Guia laboratorio biologia 2012 1 - copia

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ
BIOLOGÍA GENERAL

GUÍA DE LABORATORIO

BIOLOGÍA GENERAL

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA

BIOLOGÍA GENERAL

NORMAS DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO

NORMAS DENTRO DEL LABORATORIO

Siga las siguientes recomendaciones que son generales a tener en cuenta en un
laboratorio

1. GENERALES

Mantenga las luces apagadas si no hay necesidad de su utilización.

Los grifos de agua se deben manejar con cuidado a fin de no romperlos y
cerciorarse que no se está perdiendo agua inútilmente.

Las llaves de gas que abastecen los mecheros deben estar cerradas, en caso de
fugas informar al Monitor o al profesor directamente. Si hay fuerte olor a gas
cohíbase de encender fuego hasta tanto no desaparezca el olor a gas. Terminada
la práctica cierre correctamente las llaves de paso.

Estar puntual a la hora de entrar al laboratorio, recuerde ese adagio que dice “Uno
llega tarde porque se sabe que lo esperan, si sabe que no lo esperan uno no llega
tarde”. Se da un margen máximo de 5 minutos para su llegada

Está prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio, esto genera
indisposición general y no ayuda al desarrollo armónico de las prácticas

No se permite juegos ni indisciplina dentro del laboratorio, éste es un sitio donde el
respeto y la academia nos debe ayudar a formar integralmente.

No pierda tiempo, trabaje rápido y con cuidado, sea diligente dentro del proceso de
las distintas prácticas.

Evite el deambular por el espacio físico del laboratorio sin motivo aparente,
céntrese en su trabajo con el grupo de compañeros el cual le correspondió. De
esta manera el trabajo rinde y se hace más armónico.
Finalizada la práctica la mesa de trabajo debe quedar en buen estado y aseada.

Entregue el material de laboratorio asignado en perfecto estado y de manera
limpia. En caso que por accidente se haya fraccionado algunos de los materiales
dados, debe hablar con el profesor de la materia o en su defecto con el monitor.
Es claro que debe reponer el material que averió.

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2. MATERIAL DEL LABORATORIO

Dentro del laboratorio siempre utilizar bata de manga larga, blanca,
preferiblemente de algodón.

Cuide los lentes del microscopio para que no se manchen con colorantes.

Una vez dentro el laboratorio lave y seque correctamente el material que
previamente le han entregado procurando no ocasionar fracturas del mismo.

Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y
microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus
mecanismos.

Jamás pipetee ácidos o Bases fuertes, sustancias toxicas o volátiles

Nunca arroje materiales sólidos (papeles, fósforos, vidrios, etc) en los sumideros o
vertederos, utilice los implementos adecuados para ello.

Evite instalaciones o montajes inestables de aparatos durante las distintas
prácticas.

No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o
artilugio que se disponga en el Centro.

Las pipetas se cogerán de forma que sea el dedo índice el que tape su extremo
superior para regular la caída de líquido.

Al enrasar un líquido con una determinada división de escala graduada debe
evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los
ojos para que la visual al enrase sea horizontal.

Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos debe
evitarse la ebullición violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El
tubo de ensayo se acercará a la llama inclinada y procurando que ésta actúe sobre
la mitad superior del contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullición
rápida, se retirará, acercándolo nuevamente a los pocos segundos y retirándolo
otra vez al producirse una nueva ebullición, realizando así un calentamiento
intermitente. En cualquier caso, se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o
hacia otra persona.

Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de
haberlos calentado con el fin de evitar roturas.

Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se
engrasen.

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3. EVITAR ACCIDENTES

Sofoque cualquier principio de incendio con un trapo mojado

Evite inhalar vapores de manera directa de cualquier material. Si es absolutamente
necesario porque la practica así lo requiere, opere arrastrando los vapores con la
mano hacia la nariz
Lea con atención las etiquetas que están adosadas a los envases de las sustancias
químicas, evite accidentes por consumo de sustancias químicas del laboratorio.

Cerciórese antes de coger cualquier material de vidrio, hierro y porcelana, que
estos se encuentran a la temperatura ambiente para evitar posibles quemaduras

En caso de quemaduras con sustancias químicas o materiales expuestos a altas
temperaturas, vaya directamente con el docente a fin de utilizar algún paliativo para
la quemadura.

Evite por si solo hacer combinaciones de sustancias. Hable con el docente si es
procedente hacer algo al margen de lo manifestado en la guía de laboratorio.

Evite cortarse con vidrio cumpliendo las siguientes instrucciones:

a. Nunca trate de insertar tubos de vidrio, termómetros, embudos o cualquier otro
objeto de vidrio en tapones de caucho, o cualquier otro objeto sin humedecer
el tapón y el objeto de vidrio.
b. Proteja sus manos con una toalla
c. Para reducir el palanqueo que se ejerce sobre el vidrio, mantenga una mano
en el tapón y con la otra tome el material de vidrio muy cerca del extremo que
se va a insertar, haga presión y el objeto de vidrio se ira introduciendo
lentamente.

Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse alejados
de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos
productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan
mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al
apagar la llama.

Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos, álcalis, etc.) deberá hacerse
con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se verterán
bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarán resbalar suavemente
por su pared.

Cuando se quiera diluir un ácido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre
al contrario: ácido sobre agua.

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Cuando se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de
forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido
se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco.

RECOMENDACIONES PARA EL ÉXITO DE LAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO

Antes de realizar una práctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea
clara de su objetivo, fundamento y técnica. Los resultados deben ser siempre
anotados cuidadosamente apenas se conozcan.
Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su
material
.
Llevar el material solicitado en las distintas prácticas

Trabajar con diligencia y de manera armónica de tal forma que no se malgaste el
tiempo y pueda terminar la practica en el tiempo estipulado

Conformar grupos de trabajo de acuerdo a las indicaciones del Docente o Monitor
y presento los informes de laboratorio con el grupo de trabajo con quien realizo la
practica

PREGUNTAS PREGUNTAS
PRELABORATORIO COMPLEMENTARIAS (Se
entregan ocho días después
de hacer este laboratorio)
1. Defina:

Residuo solido
Residuo peligroso
Residuo combustible De acuerdo con la clasificación
Residuo corrosivo de residuos diseñe una tabla
Residuo reactivo que incluya: clase de residuo
Residuo explosivo (NO PELIGROSOS,
Inflamabilidad reciclables, vidrio); contenido
básico (toda case de vidrio no
Residuo patógeno
contaminado), color (blanco) y
Residuo volátil
etiqueta.
Residuo cortopunzante
Biodegradable
Biosanitario
Metales pesados
Recalcitrante

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PRESENTACIÓN GENERAL DEL INFORME DE LABORATORIO

El desarrollo práctico de la asignatura Biología General se realiza a través de
cuatro laboratorios. Todas las prácticas requieren del manejo del microscopio
para observar diferentes tipos de sistemas biológicos unicelulares, pluricelulares,
bacterianas, protista, hongo, animales y vegetales.

Las guías de biología inician con un conocimiento sobre microscopía, resaltando
la importancia del microscopio como instrumento fundamental para la observación
y estudio de la diversidad celular y otros campos importantes de la Biología
microscópica; continúa con el estudio de la célula como entidad estructural y
funcional de todos los sistemas vivos, destacando la variabilidad que se presenta
en cuanto a forma, tamaño y tipos celulares.

Las actividades de laboratorio están diseñadas con el objetivo de llevar a la
práctica los conceptos fundamentales que se imparten en teoría y de esta manera
involucrarse experimentalmente con la ciencia.

En los instructivos de cada práctica encontrará una introducción, objetivos,
procedimiento y cuestionario, los cuales deben ser resueltos antes de ingresar al
laboratorio ya que contienen aspectos indispensables para comprender la
práctica. Todas las prácticas indican qué material, equipo o reactivo se utilizará y
el procedimiento a seguir, para llevar a cabo los experimentos.

Forma de presentar el laboratorio:

El estudiante deberá presentar en un cuaderno de laboratorio cada una de las
prácticas desarrolladas (no se reciben laboratorios en computador).

El laboratorio se presenta en tipo artículo científico: Título, resumen, abstract,
introducción, metodología (materiales y métodos), resultados (gráficas, figuras,
gráficos), discusión de resultados, conclusiones y bibliografía.

Las personas que no asistan a las prácticas no podrán entregar informe de
laboratorio.

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MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO
PRÁCTICA No 1

INTRODUCCIÓN

El microscopio óptico es el instrumento principal en el laboratorio de biología, ya que este
nos ayuda a observar cosas que no podemos ver a simple vista.

Existen tres tipos de microscopios en el laboratorio de biología

1. - Microscopio estereoscópico: este nos sirve para observar muestras vegetales y
muestras animales, y consta de 2 objetivo, uno de 2 “x” y otro de 4 “x”, por lo tanto su
aumento será de 20 y 40 veces.

2. - Microscopio de luz polarizada: este se utiliza para observar metales, tiene 5 objetivos
y un solo ocular.

3. - Microscopio óptico: este es el que se utiliza de manera más común en las prácticas
de laboratorio de biología, este microscopio consta de tres sistemas.

a)Sistema mecánico: son todas las partes que sirven de soporte al microscopio: el brazo,
el pie o soporte, el carro o la platina

b) Sistema de iluminación: las fuentes de luz, el condensador y el espejo

CLASES DE MICROSCOPIOS:

Existen dos tipos de microscopios: simples y compuestos

� Microscopios simples : Consta de un solo sistema de lente
� Microscopios compuestos:
Constan de dos (2) sistemas de lentes: el objetivo y el ocular.

El microscopio compuesto es un instrumento que aumenta considerablemente la imagen
de los objetivos que en él se observan. Entre las variedades de éste microscopio
encontramos el electrónico y el fotónico u óptico. Este último tipo de microscopio está
formado por una parte mecánica y una parte óptica.

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Parte Mecánica:

a. Pie o Base: Generalmente en forma de herradura o rectangular, es el apoyo de las
demás piezas del microscopio. El pie debe ser sólido y pesado para asegurar su
estabilidad.
b. Columna o Brazo: Este elemento relaciona el tubo del microscopio con el pie; sostiene
la platina y el condensador y de ella se agarrará el microscopio cuando se traslada
durante los trabajos. En algunos c. Tubo del Ocular: Está colocado en la parte superior
del microscopio, donde están acoplados los oculares, que pueden tener movimiento
vertical, con ayuda de una cremallera sobre la columna. En algunos microscopios el tubo
del ocular es inclinado y se mantiene fijo, en este caso se mueve la platina.
d. Revólver o Disco Giratorio: Está debajo del tubo ocular donde están acoplados los
objetivos, presenta movimiento giratorio para facilitar el cambio de un objetivo a otro.
e. Platina: Es una placa que puede ser cuadrada, circular o rectangular, con un orificio
central que permite el paso de la luz a través de ella. Su función es sostener las placas
con los preparados biológicos que se van observar
f. Carro: es un dispositivo ubicado sobre la platina, cuya función es sujetar y mover la
placa que se va a estudiar. Posee dos tornillos que permiten movimientos horizontales
(hacia adelante, hacia atrás, hacia la derecha y hacia la izquierda) del portaobjeto.
Cuando la platina carece del anterior dispositivo, lleva dos soportes para fijar las placas
llamadas ganchos o uñas.
g. Mecanismos de Movimiento: Está integrado por el tornillo macrométrico y el
micrométrico
� Tornillo Macrométrico: Acerca o aleja rápidamente el objetivo del preparado a
observar; su función es lograr un enfoque más o menos claro o aproximado del objeto.
� Tornillo Micrométrico: Acerca o aleja el objetivo del preparado, pero lentamente, casi
imperceptiblemente, permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo del
ocular. Durante la observación y enfoque este tornillo debe estarse moviendo
permanentemente; su función es darle nitidez al enfoque.

Parte óptica:

Esta integrada por los objetivos, oculares y el aparato de iluminación (espejo, diafragma,
condensador y filtros). Estos elementos son los que permiten la iluminación, ampliación y
la visión aumentada del objetivo.
a. Objetivo: Es la pieza más importante del microscopio. Ellos se acoplan mediante
roscas estándar al revólver y pueden ser cambiados de posición con sólo rotarlos.
Reciben el nombre de objetivos porque son los lentes que están más cerca del objeto. La
mayoría de los microscopios tienen tres o cuatro objetivos. Las lentes de los objetivos
son de aumentos diversos, los más usados son:
Objetivos de pequeños aumentos 3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de grandes

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aumentos 40x, 45x, 50x y objetivos de inmersión 90x, 95x y 100x.

Las lentes de inmersión se emplean con aceite de inmersión para conectar la lente frontal
(lente inferior del objetivo) al porta-objeto. Entre el objetivo y el objeto se produce una
pérdida de luz por reflexión que se corrige adicionando al preparado unas gotas de aceite
de cedro (aceite de inmersión) cuyo índice de refracción 1.515, es próximo al cristal. Este
aceite también reduce o suprime por completo la refracción de los rayos de luz
provenientes de la fuente luminosa. b. Ocular: Están colocados en la parte superior del
tubo ocular. Está formado por dos sistemas de lentes dispuestos de un cilindro. Su
finalidad es aumentar la imagen dada por el objetivo y eventualmente corregir algunos
defectos de la misma. Reciben dicho nombre porque son las lentes que se encuentran
más cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; 5x; 6,3x; 10x; 12.5x; 15x; 20x y 25x.

El aumento de la imagen de un objeto observado a través de un microscopio, se calcula
multiplicando el número de aumento del objetivo con el cual se está trabajando por el
número de aumento del ocular que se está utilizando.

c. Aparato de iluminación: Está conformado por la fuente de luz, el diafragma, el
condensador y los filtros.
d. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial, cuando es natural (solar) o procede de un
foco luminoso situado fuera del microscopio, un espejo recoge la luz del medio y la refleja
a través del objeto y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente un
bombillo ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje.
e. Diafragma: Está ubicado entre la fuente de luz y el condensador, inmediatamente
debajo de la platina, su función es regular la intensidad de luz que atraviesa el objeto. El
diafragma tiene una palanquita que al moverla hacia delante o hacia atrás agranda o
achica el orificio central, dejando pasar mayor o menor cantidad de luz respectivamente.
f. Condensador: Es un elemento cónico que posee un sistema de dos lentes
convergentes que recogen o concretan los rayos luminosos para enviarlos al objetivo por
el agujero de la platina.
Existe un tornillo manual que permite guardar la altura del condensador. Esta graduación
es importante cuando se trabaja con objetivos de gran aumento (40x, 100x), ya que en la
medida que se trabaja con éstos objetivos el condensador debe subirse. Lo contrario
sucede cuando se trabaja con objetivos de menor aumento (4x, 10x).
g. Filtros: Entre la fuente de luz y el condensador de algunos microscopios existe un
portafiltros en el cual se puede colocar filtros a voluntad del observador. Los filtros son
elementos de cuarzo o de vidrio, pueden ser de color azul, amarillo o verde. Ellos
interceptan el haz de rayos luminosos antes de entrar al condensador, esto se hace con
el objeto de seleccionar un tipo de luz determinada para una experiencia dada.

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LENTES:
Las lentes son el componente más importante del microscopio; se fabrican de vidrio u
otros materiales transparentes.
Pueden ser convexas o cóncavas en ambas superficies, planas en una cara o tener
cualquier combinación de éstas dos formas en su superficie.
Las lentes son de dos tipos: positivas y negativas.
� Lentes Positivas: Hacen converger los rayos de luz, es decir, los concentra para formar
una imagen real.
� Lentes Negativas: Hacen divergir los rayos de luz, sin formar ninguna imagen real.

PREPARACIONES MICROSCÓPICAS:
Debemos tener en cuenta que a través del microscopio solamente se pueden observar
objetos que dejan pasar rayos de luz, por esta razón el preparado debe ser lo más
delgado y transparente posible, pues un preparado grueso solo nos permite observar una
mancha negra. Los detalles solo se observan si la preparación es lo suficientemente
delgada para que sea transparente con la luz que recibe. Para realizar preparaciones
microscópicas los porta y cubre-objetos deben limpiarse antes de usarse. Un buen
método es guardarlos en alcohol y antes de utilizarlos secarlos con un paño limpio y libre
de grasa. Los cubre-objetos deben limpiarse con mucho cuidado porque son frágiles.
Las preparaciones microscópicas pueden ser acuosas o en seco.

Las preparaciones acuosas son las más simples y fáciles usadas para examinar
cualquier objeto fluido, como agua de estanque o sangre. Se deposita una gotita del
líquido que se desea observar en el centro del porta-objeto, se coloca el cubreobjeto
sobre el porta, forme con las dos láminas un ángulo de 45 grados y luego deje caer
suavemente la laminilla cubre-objeto sobre el preparado, evitando la formación de
burbujas.

El líquido no debe rebosar los bordes del cubre-objeto, en caso de que suceda seque
cuidadosamente el líquido sobrante usando papel absorbente o papel toalla. La
preparación queda así lista para la observación. Estas preparaciones son de corta
duración porque se secan rápidamente; para hacerlas más duraderas debe cerrarse
herméticamente los bordes del cubre objeto; la duración de ésta preparación no es
indefinida. Los bordes se pueden cerrar con vaselina o esmalte.

COLORANTES :
Los colorantes son sales compuestas por un ácido y una base. Se clasifican en ácidos,
básicos y neutros, según la parte de los mismos que imparta el color. En los colorantes
ácidos el grupo cromóforo, el que imparte el color, es el componente ácido, el
componente básico es incoloro. Lo contrario sucede con los colorantes básicos. Los

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colorantes neutros tienen coloreado el componente ácido y el básico.

La mayoría de los colorantes son sintéticos, aunque se emplean todavía algunos
naturales. La hematoxilina y el carmín son los colorantes naturales más importantes para
la tinción de tejidos. El carmín es producido por la conchinilla (Coccus cacti). La
hematoxilina se extrae de la madera de un árbol de México, el palo Campeche.

Otro colorante es la orceína que se extrae de líquenes. Existen tres técnicas de tinción de
uso general: la coloración seca o de tejidos muertos, la coloración vital o de tejidos vivos
y la histoquímica, en la cual se utilizan las reacciones de los colores para hacer visible los
elementos estructurales de las células y de los tejidos.

Partes de un microscopio óptico

RESUMEN PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

SISTEMA ÓPTICO

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

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SISTEMA MECÁNICO

SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular.
REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que
consigue el enfoque correcto.

I. MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya
debería estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de
10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular,
ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose
dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de
la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra,
girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al

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cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar
con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x
enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos
tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones
anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya
se enfocó con el objetivo de inmersión.
6. Empleo del objetivo de inmersión:
a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre
éste y el de x40.
d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de
inmersión.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente
toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se
adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el
objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x
por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede
volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por
tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación
desde el paso 3.
i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca
el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede
retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersión en posición de observación.
j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para
óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

II. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento
en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no
sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo
cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar
de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo

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del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el
microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que
queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo
con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de
limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y
su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico,
micrométrico, platina, revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la
mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar
nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está
observando a través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre
ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño
humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la
sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general
de los mismos.

EL DIBUJO EN BIOLOGIA, debe tener las siguientes características:
Objetividad y claridad. Deben representarse los objetos tal como son y con
nitidez.
Exactitud. Proporcionalidad entre el objeto y su representación gráfica en toda su
estructura.
Trazos nítidos y firmes. Con ausencia de sombras y colores.
Nombres. Todas las estructuras que aparecen deberán llevar su nombre por
fuera del dibujo en forma ordenada

RECORDEMOS:

Usar eficientemente el microscopio y los elementos y equipos a su disposición.
Estudiar e interpretar críticamente el material biológico para el estudio
microscópico.
Registrar las imágenes microscópicas para ilustrar y discutir los resultados

BIOLOGÍA GENERAL

obtenidos.
El examen microscópico proporciona información fundamental en investigación.
Mucha de esta información sólo puede ser obtenida a través de esta herramienta,
por lo tanto, se debe poner el máximo interés en la adquisición de una
información lo más amplia y profunda posible sobre la estructura microscópica y
los métodos de trabajo utilizados para su observación y estudio.

Objetivos

Identificar cada una de las partes que conforman el microscopio óptico y conocer
los cuidados que se deben tener para su manejo.
Manejar los mecanismos de enfoque del microscopio
Comprender la importancia del microscopio como herramienta fundamental en
biología celular

Materiales (descripción de equipos, reactivos, materiales de vidrio, plástico y acero,
especificar los materiales que deben llevar los estudiantes)

Microscopio
¼ hoja de papel periódico
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tijeras
Papel seda banco
Gotero
Xilol
Fibras de lana o algodón de diferentes colores
Granos de polen

Metodología – Procedimiento

1. Cortar un pedazo de papel periódico de 1 cm2 de área y colocarlo sobre un cubre
limpio y seco
2. Adicionar con el gotero un poco de agua sobre el papel hasta humedecer y poner
el cubre objeto sobre el evitando que se formen burbujas.
3. Observar la muestra en el microscopio para ello se debe colocar la muestra e la
platina asegurándola con las pinzas.
4. Realizar las observaciones con los objetivos de 10x, 40x, 100x

BIOLOGÍA GENERAL

5. Ajustar las observaciones con los tornillos macrométrico y micromético.
6. Realizar los esquemas de cada una de las observaciones.
7. Realizar el mismo procedimiento con fibras de lana o algodón de diferentes
colores y con Granos de polen.
8. Después de utilizar el microscopio limpiar suavemente el microscopio y las lentes
con xilol y papel seda
9. Cubrir y guardar debidamente el microscopio

Cuestionario

¿Cómo se puede definir un microscopio?
¿Cuáles son las diferencias entre un microscopio simple y uno compuesto?
¿Cuáles son las diferencias al observar la muestra con diferentes tipos de lentes
de aumento?
¿Que dificultades tendrías si al iniciar un trabajo lo hicieras con la lente de mayor
aumento?
Cuando utilizas el objetivo de inmersión ¿por que es necesario utilizar un aceite
con este nombre? Por que el objetivo necesita un índice?
Cuáles son los poderes del microscopia.
Cuál es el índice de refracción del agua y del aceite.
Cuáles pueden ser las causas de las rupturas de los micropreparados
¿Qué importancia tiene el microscopio en la biología celular?
Investiga si es lo mismo amplificación y resolución ¿y de que factores depende
cada una de ellas?

BIOLOGÍA GENERAL

CÉLULAS VEGETALES Y CÉLULAS ANIMALES
PRÁCTICA No 2
INTRODUCCIÓN

Las células son la porción más pequeña de materia viva capaz de realizar todas las
funciones de los seres vivos, es decir, reproducirse, respirar, crecer, producir energía,
etc. Existen dos tipos de células con respecto a su origen, células animales y células
vegetales:

En ambos casos presentan un alto grado de organización con numerosas estructuras
internas delimitadas por membranas. La membrana nuclear establece una barrera entre
el material genético y el citoplasma. Las mitocondrias, de interior sinuoso, convierten los
nutrientes en energía que utiliza la planta.

Tanto la célula vegetal como la animal poseen membrana celular, pero la célula vegetal
cuenta, además, con una pared celular de celulosa, que le da rigidez. La célula vegetal
contiene cloroplastos: organelos capaces de sintetizar azúcares a partir de dióxido de
carbono, agua y luz solar (fotosínteis) lo cual los hace autótrofos (producen su propio
alimento) y la célula animal no los posee por lo tanto no puede realizar el proceso de
fotosíntesis. Pared celular: la célula vegetal presenta esta pared que está formada por
celulosa rígida, en cambio la célula animal no la posee, sólo tiene la membrana
citoplasmática que la separa del medio. Una vacuola única llena de líquido que ocupa
casi todo el interior de la célula vegetal, en cambio, la célula animal, tiene varias vacuolas
y son más pequeñas.

Las células vegetales pueden reproducirse mediante un proceso que da por resultado
células iguales a las progenitoras, este tipo de reproducción se llama reproducción
asexual. Las células animales pueden realizar un tipo de reproducción llamado
reproducción sexual, en el cual, los descendientes presentan características de los
progenitores pero no son idénticos a él.

CÉLULAS VEGETALES

MATERIALES:

Una cebolla cabezona.
Viruta de madera
Semillas de durazno y cereza.
Un tomate, Una arracacha, yuca, papa y banano.
Una hoja de lirio, elodea
Láminas porta y cubres. Cuchilla o bisturí. Papel absorbente. Aguja de disección.
Pincel.

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PROCEDIMIENTO.

MONTAJE HUMEDO DE EPIDERMIS DE CEBOLLA (Allium cepa)
En un porta objetos coloque dos muestras de epidermis de cebolla. Uno con agua y otro
con lugol. Observe la forma de la célula y su disposición en el tejido. Identifique Pared
celular, membrana celular, citoplasma, vacuola, núcleo, nucleolos. Cuántos núcleos y
nucleolos presenta la célula. Diferencie entre las dos preparaciones. Cuáles son las
ventajas de utilizar colorantes. Qué organelos celulares se colorean con lugol.

MONTAJE HUMEDO DE EPIDERMIS DE LIRIO- Elodea
Coloque un segmento de hoja de lirio en el porta objetos, coloree con azul de metileno.
Observe al microscopio y diga: cuántos tipos de células observa y qué forma tienen,
identifique y esquematice en las células epidérmicas las siguientes estructuras: pared
celular, membrana celular, citoplasma, vacuolas y núcleo. Identifique un estoma, señale
el ostiolo y diga su función. De cada una de las estructuras anteriores diga su función.

MONTAJE HUMEDO DE EPIDERMIS DE TOMATE (Lycopersicum esculentum
Millar)
Raspe la epidermis de tomate sobre la lámina porta objetos, lavando con agua hasta que
la epidermis esté translucida. Agregue tionina y observe: La forma de las células, su
coloración, pared celular, la lámina media y los plasmodesmos que fraccionan o
seccionan la pared celular. Diga qué son y cuál es su función.

OBSERVACIÓN DE CLOROPLASTOS.
Tome una hoja de elodea (Egeria densa) y ubique el ápice foliar. Pase a 40X y diga cómo
se llaman los organelos de color verde que se observan, dónde se localizan y cuál es su
función. Describa el tipo de movimiento de los organelos y cómo se llama este tipo de
movimiento?. Dibuje lo observado.

OBSERVACIÓN DE AMILOPLASTOS.
Tome un trozo de papa (Solanum tuberosum L) y con el bisturí o cuchilla haga un
raspado y deposítelo sobre el portaobjetos; agregue una gota de lugol, cubra y lleve al
microscopio. Observe la forma de los amiloplastos. Repita la misma operación con
banano (Musa sapientum L.).

OBSERVACIÓN DE CROMOPLASTOS.
Tome una muestra de pulpa roja (mesocarpo) de tomate, extienda sobre la lámina porta
objetos, agregue una gota de agua y lleve al microscopio. Observe las células grandes y
transparentes con una pared delgada, dentro se encuentran unas granulaciones de color
rojo que pueden agruparse alrededor del núcleo o estar dispersos en el citoplasma.

BIOLOGÍA GENERAL

CÉLULAS ANIMALES

METODOLOGÍA

Muestra de sangre:

Con la lanceta estéril realizar una punción en un pulgar.

Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos.

Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del
porta de manera que se pueda obtener una fina película de sangre. El porta absorbe
la gota y la arrastra, pero sin pasar nunca por encima de ella para no dañar los

gota de sangre

hematíes.
Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol
absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparación.

Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la
desecación del colorante agregando más líquido.

Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto.

Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.

Dejar secar aireando el porta.

Observar al microscopio.

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o
eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No tienen núcleo y son más delgados
por el centro que por los bordes.

BIOLOGÍA GENERAL

Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo,
teñido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos:
Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo que
ocupa casi todo el glóbulo.
Monolitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, núcleo grande,
redondo, son los más móviles y su función principal es la fagocitosis.
Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinófilos, con
abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina, neutrófilos y basófilos.

Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción.

Muestra de protozoarios:
-Agregar una gota de muestra de agua estancada (con gotero) en el portaobjeto,
poner el cubreobjeto con la precaución de que no se formen burbujas, observar en los
objetivos de 10x y 40x.

Actividad Complementaria

En el siguiente cuadro marca las estructuras que pudiste observar

Muestras/ Células Vegetales Células Animales
organelos Cebolla Tomate Elodea Sangre Protozoarios
10 X 40X 10 X 40X 10 X 40X 10 X 40X 10 X 40X
Núcleo
Membrana
celular
Pared
celular
Citoplasma
Vacuolas
Otros

POST LABORATORIO

1. Indique las principales diferencias entre células vegetales y células animales
(realice un cuadro comparativo).
2. Porque los organelos celulares son de diferente formas y color
3. Describa los organelos celulares que diferencias los dos tipos de células de
estudio.
4. Revise diferentes tipos de técnicas que se utilizan para estudia células vegetales
y animales.

BIOLOGÍA GENERAL

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS
PRÁCTICA 3

INTRODUCCIÓN

Los hongos constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descrito
aproximadamente 500.000, pero se estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones de
especies) que presentan una amplia distribución en la naturaleza, contribuyendo a la
descomposición de la materia orgánica (Figura 1) y participando en los ciclos biológicos.
Un pequeño número son patógenos de animales y plantas.

Figura 1. Estructura de Hongos estructuras para la degradación de materia orgánica.
Inicialmente, los hongos fueron clasificados dentro del Reino Plantae ya que fueron
considerados organismos inmóviles presentando estructuras que se asientan firmemente
en el sustrato sobre el que crecían. Sin embargo, cuando se ha aplicado la biología
molecular en los estudios taxonómicos se ha observado que los hongos están más
próximos al Reino Animalia que al Plantae. En el sistema de clasificación de los seres
vivos en cinco reinos, los hongos se encuentran clasificados en el Reino Fungi, que se
divide en cuatro Phyla denominados Ascomycota (el más extenso que comprende el 50%
de los hongos conocidos y aproximadamente el 80% de los hongos patógenos,
Basidiomycota, Zygomycota, y Chytridiomycota, encontrándose en los tres primeros los
hongos patógenos humanos. Los hongos en los que no se conoce su reproducción
sexual, constituyen un grupo heterogéneo denominado Deuteromicetos, hongos
imperfectos o mitospóricos, que representa el segundo grupo más numeroso y que
también incluye patógenos humanos.

Los hongos son organismos eucariotas típicos (Figura 2) y poseen un núcleo que
contiene varios cromosomas (siete en Candida albicans, ocho en Aspergillus nidulans y
dieciséis en Saccharomyces cerevisiae) delimitado por una membrana nuclear, con
nucléolo rico en ARN y orgánulos citoplásmicos, como mitocondrias, vacuolas, retículo
endoplásmico, aparato de Golgi y ribosomas 80 S. El citoplasma se encuentra limitado
por la membrana citoplásmica, que es una doble capa de lípidos que contiene proteínas y
esteroles y que controla la permeabilidad celular y participa en la síntesis de la pared
celular. La estructura de las células de los hongos es muy diferente de la de las bacterias
que son organismos procariotas. Aunque comparten muchas estructuras, las células de
los hongos se diferencian de las de las plantas en la composición de la pared celular y en
que carecen de cloroplastos y clorofila, y de las humanas en que tienen pared celular y
en la presencia de ergosterol en la membrana citoplásmica. Por el exterior de la
membrana citoplásmica, presentan una pared celular que está compuesta
fundamentalmente por polisacáridos y por diversas proteínas. Los polisacáridos más
importantes son la quitina (polímero de n-acetil glucosamina), el manano (polímero de
manosa) y el glucano (polímero de glucosa).

Los hongos presentan básicamente dos tipos de morfologías: una multicelular
denominada filamentosa y otra unicelular denominada levaduriforme. Los hongos
filamentosos (miceliares o mohos), representan el crecimiento más típico de los hongos

BIOLOGÍA GENERAL

microscópicos. En medios de cultivo sólidos y también sobre cualquier superficie en la
que se desarrollen, por ejemplo frutas u otros alimentos, producen colonias algodonosas
o pulverulentas que son muy características. Al microscopio óptico, los hongos
filamentosos presentan unas estructuras tubulares, formadas por múltiples células, que
se denominan hifas.

Los hongos obtienen los nutrientes por absorción y tienen un metabolismo
quimioheterótrofo, ya que obtienen la energía y el carbono de compuestos orgánicos
sintetizados por otros organismos. Este hecho condiciona su modo de vida, ya que en la
naturaleza se encuentran asociados a la materia orgánica en descomposición,
participando en los ciclos naturales de reciclado del carbono y otros elementos naturales
o Bial - Arístegui 3 4 Rev Iberoam Micol 2002 como patógenos oportunistas de los
animales y plantas. Los hongos pueden degradar una gran cantidad de componentes,
para lo que disponen de potentes exoenzimas que en algunos casos pueden servirles
como factores de virulencia en el hospedador.
En el laboratorio, los hongos crecen fácilmente en la mayoría de los medios de cultivo,
necesitando una fuente de carbono orgánica e iones amonio o nitrato como fuentes de
nitrógeno. Esta facilidad para crecer en cualquier medio de cultivo y la presencia de
conidios en el aire hace que sean contaminantes habituales en el laboratorio. Los hongos
filamentosos son aerobios y los levaduriformes anaerobios facultativos. Sus
requerimientos de temperatura y de pH son poco exigentes y la mayoría crecen en un
rango de pH de 2 a 9 y a temperaturas entre 10 y 40 °C.

La mayoría de los hongos presentan reproducción sexual y asexual. El estado sexual se
denomina teleomorfo o meiospórico y el asexual anamorfo o mitospórico. Es
relativamente común que un mismo hongo tenga dos nombres, el del estado anamorfo y
el del estado teleomorfo, ya que suelen haberse descubierto y nombrado de forma
independiente. En un grupo importante de hongos solamente se conoce la reproducción
asexual, bien porque no se conocen las condiciones adecuadas para que se desarrolle la
forma sexual o porque ésta se ha perdido a lo largo de la evolución. Aunque la
reproducción asexual puede lograrse por fragmentación de las hifas, ya que cada
fragmento puede producir una nueva colonia, normalmente los hongos se reproducen,
tanto sexual como asexualmente, por medio de esporas. Los hongos producen millones
de esporas, cada una con la capacidad para desarrollar una nueva colonia. Las esporas
sexuales se producen tras la fusión de los núcleos de dos hifas sexualmente compatibles
o de dos levaduras y posterior meiosis. La morfología de las esporas sexuales es muy
variada y tiene gran interés para la identificación fúngica, ya que presentan diferencias
características.

OBJETIVOS

1. Conocer procesos de preparación en fresco y en cinta adhesiva de distintas
especies de hongos
2. Observar la morfología de los hongos y distinguir las diferentes estructuras
que presenta.
3. Diferenciar los diferentes tipos de hongos según su origen y materia

BIOLOGÍA GENERAL

orgánica que pueden degradar

Una semana antes de realizar el laboratorio se deberán cultivar hongos, los cuales
serán observados en el laboratorio.

En diferentes frascos de vidrio de plástico o vidrio de boca ancha, colocar los
siguientes materiales: a) un trozo de pan de marca o de panadería, b), un trozo
de tomate, papaya u otros alimentos en descomposición. Dejar la caja a la
intemperie un día en un lugar sombreado y después taparla. Colocar los frascos
de preferencia en un lugar fresco por cinco días y llevarla posteriormente al
laboratorio.

Materiales

Microscopio
Agujas de disección
Solución salina al 1%
Gotero
Pinza de punta roma
Lugol
Cajas de Petri
Azul de metileno
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cuchilla-bisturí
Muestras de hongos
Cinta transparente
Champiñón

Procedimiento en el laboratorio

-Abrir los frascos y separa los diferentes productos colocándolos en una caja de
Petri.

-Empleando el estereoscópico, observa cada uno de los productos y describe la
apariencia que tienen los mohos o pelusas que se observan sobre ellos, así como
las manchas que aprecies sobre los mismos.

-En el cuadro que se presenta en la sección de resultados deberás indicar que
olor despiden los diferentes productos: si es azucarado, picante como vinagre,
rancio, fétido, etc. Estas observaciones son subjetivas. Igualmente deberás
indicar el color de los mohos, manchas o pelusas, si se ve como polvo o como
gelatina.

BIOLOGÍA GENERAL

-Una vez descritos los productos observados con el estereoscópico, realizar una
serie de preparaciones temporales y observar con el microscopio compuesto la
estructura microscópica que presentan, añadir una gota de colorante y describir la
estructura que logra identificar. Elaborar los esquemas representativos de las
observaciones y anéxala a este reporte. En caso de no observar hifas,
conidióforos o esporangióforos señala las características de forma y color que
presentan conidiósporas y esporangiósporas.

-Respecto al champiñón, realizar con un bisturí un corte lo más fino posible tanto
en la cabeza del hongo como de su talo o estípite, colocarlo en el porta objeto,
añadir una gota de azul de metileno, describir a través de un esquema las
estructuras que observa.

-Técnica cinta adhesiva: colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de
lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la
preparación quede demasiado gruesa. Cortar un trozo de cinta adhesiva
transparente de aproximadamente 2cm. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la
superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de
un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva
concentración de esporas. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.
Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.

Una vez concluidas las observaciones trata de agrupar a los hongos observados
de acuerdo a las características comunes.

Completar en el siguiente cuadro y guía.

Sustrato o Olor que Apariencia de Estructuras
alimento despide las colonias observadas

Cuestionario

1. ¿En qué consisten las diferencias que presentan los hongos encontrados o
desarrollados en los distintos materiales?

2. ¿Qué origen tienen olores que despiden los diferentes alimentos? Señalar si
éstos pueden indicar cuál sustancia o compuesto degradan los hongos

3. Tras realizar las observaciones con el microscopio compuesto, qué

BIOLOGÍA GENERAL

estructuras se pueden identificar en los organismos observados.

4. Con base en las características observadas en los diferentes organismos,
¿Cómo se clasifican los organismos observados?

5. Realizar un esquema con las divisiones del reino hongo o fungi.

PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO
PRÁCTICA No 4
INTRODUCCIÓN

Para realizar el estudio microbiológico, ya sea humana o animal, vegetal, industrial o del
medio ambiente, se debe someter a una serie de procesos estandarizados de laboratorio,
que permitan reconocer los microorganismos. Las coloraciones permiten diferenciar
formas, agrupaciones, características tintoriales y estructuras de los diferentes
microorganismos en las muestras.

COLORACIONES
Los colorantes biológicos tienen varias aplicaciones en microbiología, se usan para
clasificar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas, también para observar las
diferentes estructuras microbianas como pared, capsula, espora, flagelo, núcleo y
gránulos, tienen utilidad para la observación de levaduras y estructuras, en medios de
cultivo se emplean como indicadores o inhibidores selectivos.

La morfología bacteriana se puede observar claramente por medio de coloración de las
células. En las técnicas de coloración, las bacterias están muertas por el hecho de fijar
con calor la muestra a la lámina y por el mismo proceso de coloración.
Al aplicar un colorante a la preparación microbiana, las bacterias se tiñen haciéndolas
resaltar con claridad, debido a la composición química tan diferente con respecto al
medio que las rodea, además permite estudiar las características morfológicas y emplear
mayores amplificaciones microscópicas.

Al poner en contacto una célula bacteriana con un colorante, ocurre un intercambio de
iones entre el colorante y los sitios activos de la superficie o del interior de la célula. Los
iones tenidos del colorante reemplazan a los iones de los componentes celulares, por
ejemplo, el catión azul de metileno, reemplaza el catión de sodio, dándoles el color.
Según la estructura que el colorante tiñe en la bacteria, las coloraciones se han
clasificado en:

BIOLOGÍA GENERAL

-Coloraciones simples: En las que se emplea un solo colorante para el proceso, por
ejemplo: azul de metileno, cristal violeta, fucsina básica y safranina.

-Coloraciones compuestas y diferenciales: En estas se usa más de un colorante, y
con la misma coloración las células se tiñen de manera diferente.
Ejemplo: Tinción de Gram, Ziehl Neelsen.

-Coloraciones especiales: permiten la observación de estructuras especiales de la
bacteria como esporas, glicocálix, cápsulas, flagelos, etc. Ejemplo: Wayson (esporo),
Leifson (flagelo), rojo congo (coloración ácida) (glicocalix, cápsula), Van Stoltemberg
(gránulos metacromáticos).

-Coloración de Gram:
La coloración de Gram fue descrita en 1884, por el citólogo Christian Gram, para teñir
bacterias presentes en los tejidos. Actualmente continúa siendo la más empleada en
microbiología, esta clasificada como una coloración compuesta y diferencial, debido a
que en el proceso se utilizan dos colorantes: el cristal violeta y la fuscina básica, y
dependiendo del colorante que toma la pared bacteriana y dos grandes categorías
denominadas: Gram positivas (se tiñen de cristal violeta) y las Gram negativas (toman el
color de la fuscina básica).

Esta diferenciación es fundamental para establecer específicamente el tratamiento con
antibióticos. La reacción tintorial que presentan las bacterias al ser coloreadas con Gram
demuestra una composición química y estructural de la paredes, pues se evidencia
también el comportamiento bacteriano específico frente a agentes físicos y químicos.
Reacción de las células frente a los componentes de la coloración de Gram.

COMPONENTES GRAM POSITIVAS (más GRAM NEGATIVAS
concentración de (menos concentración de
peptidoglicano) peptidoglicano, doble
capa lipídica)
Cristal violeta (colorante Bacteria de color violeta. Bacterias de color violeta
básico)
Lugol (fijador) Se forma complejo CV-I Se forma complejo CV-I.
Bacteria de color violeta Bacterias de color violeta
Alcohol acetona Deshidratación de paredes Extracción de lípidos de la
(decolorante) celulares, retracción de pared, mayor porosidad,
poros, disminución de la liberación del complejo
permeabilidad. colorante-fijador (CV-I).
Presencia del complejo Bacteria incolora
CV-I. Bacteria de color
violeta.
Fucsina básica Bacteria de color violeta Bacteria de color rosado

La pared celular es responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la tinción de
Gram (1884). Las propiedad de teñirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o Gram

BIOLOGÍA GENERAL

negativas) por esta coloración es un criterio de clasificación importante correlacionable
con otras propiedades bacterianas. Unos pocos organismos son Gram variables.

Tanto las Gram positivas como las Gram negativas captan la misma cantidad de cristal
violeta e yodo. El complejo CV-I sin embargo es atrapado dentro de la célula Gram
positiva por la deshidratación y la reducción del tamaño de los poros de la pared
resultante del proceso de lavado con solvente. En contraste en las Gram negativas la fina
(y probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la extracción por el
solvente del complejo.

Avala lo antedicho el hecho que, si después de su tinción se tratan con lisosoma
bacterias Gram positivas, se ve que los protoplastos siguen teñidos, pero pierden el
colorante si se los trata con alcohol. Esto indica que el colorante es fijado a nivel del
protoplasto, y que la pared celular de las bacterias Gram positivas es la que impide la
extracción del colorante. Corroborando esta suposición se observa que cuando B.
subtilis emerge de su espora su pared celular está inmadura y se comporta como Gram
negativas. Cuando la pared celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram positiva.

La pared bacteriana está compuesta por elementos comunes para la mayoría de
especies como son peptidoglucano, ácido diaminopimélico, y componentes especiales
que están presentes solo en algunas especies como ácido teicoico – teicurónico en Gram
positivas, lipopolisacaridos en Gram negativas, ácido micólico – arabinogalactano en
mycobacterias, formas meso – levo de ácido diaminopimélico o carencia de ellas como
sucede en Actinomices, Streptomyces y Nocardias, ausencia de peptidoglucano en
Micoplasma y Ureaplasma.

Dichos componentes son aprovechados por la coloración de Gram que clasifica las
bacterias en 4 grandes grupos: Cocos Gram positivos, Cocos Gram negativos, Bacilos
Gram positivos, Bacilos Gram negativos. Sin embargo algunos géneros bacterianos no
pueden ser incluidos dentro de la clasificación por la coloración de Gram porque no
toman el colorante por su baja afinidad (Ricketsias), ausencia de pared (micoplasmas),
diferente composición química de la pared (mycobacteias, Nocardias, Actinomices),
carcterísticas especiales o no visibles al microscopio óptico común por su reducido
tamaño (Espiroquetas, Mycobacterias entre otras), formas diferentes a las clásicas
(Haemophilus, fusoespirilos). Como coloraciones alternas para estos microorganismos
esta Ziehl Neelsen, Giemsa, Wright, fluorocromos e incluso microsocopía electrónica.

-Coloración de Wayson: especial para endosporas, está clasificada como una coloración
especial, por demostrar la presencia de una estructura especial, que caracteriza a la
bacteria. Que se pueda observar dicha estructura es de gran importancia, para
determinar el proceso de estudio que se va a seguir, realizar el diagnóstico exacto y dar
un tratamiento adecuado al agente infeccioso.
Las endosporas son cuerpos ovales de pared gruesa, que se forman dentro de la célula
vegetativa, donde se recoge el material celular y la célula se deshidrata (se sintetiza
dipicolinato de calcio y el endosporo se recubre de una serie de capas protectoras como
el oxosporium), dentro de la cual se encuentra la cubierta de la espora, que está
compuesta de una capa parecida a la de la pared celular, por debajo de la cubierta de la

BIOLOGÍA GENERAL

espora se encuentra la corteza, y dentro de ella, el núcleo o corazón, que contiene a la
pared celular usual. Así, la espora difiere de la estructura de la célula vegetativa.

Las endosporas dan a la bacteria alta resistencia a factores físicos y químicos
desfavorables, son características del género Bacillus y Clostridium.
-Coloración de rojo congo y tinta china (cápsula y glicocálix), los glicocálix son sustancias
densas o pegajosas, constituidas por glucanos solubles e insolubles que secretan la
mayoría de procariotas, sobre su pared: algunos forman una capa de poco espeso
llamada microcápsula, otros forman capas de mayor diámetro que constituyen una
verdadera cápsula.

El glicocálix cumple la función de fijar los microorganismos patógenos a sus huéspedes,
los cuales son difíciles de reconocer y destruir por fagocitosis.
Esta sustancia tiene especial importancia en la patogenicidad bacteriana y les da
especial resistencia a la desecación.

Las coloraciones utilizadas para la observación de estas estructuras son denominadas
negativas (rojo congo, nigrosina y tinta china). También se pueden utilizar colorantes
básicos, como en la coloración de Hiss, en la que la cápsula se colorea de azul pálido, la
bacteria de color púrpura y el fondo de color claro.

Estas coloraciones, por tener el ión colorante cargado negativamente, son rechazadas
por la cápsula y el glicocálix, por eso la estructura queda incolora, pero si se colorea el
medio que a envuelve, el resultado es un fondo coloreado sobre el cual se observan
pequeños agujeros incoloros que corresponden a la cápsula cuando es de escaso
diámetro y al glicocálix cuando el diámetro es más amplio. Si en el proceso de coloración
se incluye un colorante básico, este tiñe la pared de la bacteria, que se observa
coloreada dentro de la cápsula o del glicocálix.

Si se desea incrementar el contraste de las células para la microscopía son suficientes
procedimientos simples de tinción. El azul de metileno es un buen colorante simple que
actúa sobre todas las células bacterianas rápidamente y que no produce un color tan
intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente útil para detectar la
presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no
celular no se tiñe.

ELABORACION DEL FROTIS: Si el frotis se va a realizar a partir de una muestra sólida,
se debe poner sobre una lámina limpia y desengrasada una pequeña gota de agua con el
asa recta esterilizada, y con la punta del asa recta se toma ya sea una colonia bacteriana
empleadas en este laboratorio, se emulsiona con la gota de agua y luego se extiende
sobre la lámina en un área no mayor de 0.5 cm de diámetro, de manera que sobre una
misma lámina se pueden realizar hasta 3 frotis diferentes. El frotis se deja secar a
temperatura ambiente y nunca con calor, debido a que se facilita la formación de
abundantes aerosoles, precipitados de colorantes y alteraciones de la forma de los
microorganismos. Si la muestra es líquida se emplea el asa con argolla y no se requiere
emulsionar la muestra con agua, sino que directamente se extiende en un área de 0.5

BIOLOGÍA GENERAL

cm, se deja secar a temperatura ambiente.

FIJACION: en el proceso de fijación del frotis consiste en pasar la lámina por el lado
contrario de donde se hizo el frotis sobre la llama del mechero tres veces consecutivas,
evitando que se caliente la lámina para que no se dañen las estructuras celulares, esto
se hace debido a que tiene como fundamento matar y fijar a la lámina los
microorganismos presentes en el frotis.

MATERALES

OBLIGATORIO USO DE BATA DE MANGA LARGA

-Por grupos llevar una toalla y jabón en polvo para lavar el material

Microscopio Frasco lavador
Portaobjetos Mechero de alcohol
Cubreobjetos Papel de filtro
Asa de siembra Cristal violeta
Cubeta de tinción Lugol
Pinzas Alcohol-acetona
Yogur Safranina
Vinagre
Palillos

Bacterias del Yogur.

1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es
necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra.

2. Tomar una muestra (gota) de yogur y expandirla en el porta, mezclarla bien col el
agua.

3. Dejar secar y fijar con metanol.

4. Teñir 2 o 3 minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.

5. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta
a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar
demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

6. Observar en microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100 x. Para el objetivo de
100x aplicar aceite de inmersión, colocar cubre objetos y observar.

BIOLOGÍA GENERAL

Bacterias del Vinagre


8. Tomar una muestra (gota) de vinagre y expandirla en el porta.

9. Dejar secar y fijar al calor




Bacterias del Sarro Dental


14. Tomar con una aguja enmanglada una porción del sarro dental y expandirla en el
porta.

15. Dejar secar y fijar al calor




FIJACIÓN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS

Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos.
Dejar enfriar el porta entre los pases.

Con metanol (para bacterias procedentes de medio líquido). Añadir unas gotas de
metanol sobre la extensión completamente seca. Golpear el portaobjetos por su canto
con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol.
Esperar a que el metanol se evapore completamente.

BIOLOGÍA GENERAL

Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser
observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el
proceso de tinción.

RESUMEN

1. Preparar los frotis bacterianos.
2. Teñir con cristal violeta 1min.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Cubrir con Lugol 1min.
5. Lavar con agua el exceso de Lugol.
6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la
preparación deje de perder color (30seg)
7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
8. Teñir con safranina 1min.
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
10. Secar la preparación.
11. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación.

Los tiempos de exposición a los colorantes son orientativos. Cada vez que se prepara la
batería de colorantes para realizar la tinción Gram presentan algunas diferencias
respecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser necesario ajustar los
tiempos.

POST LABORATORIO

Describa las características más importantes de las bacterias, realizar esquemas
de las formas que presentan y los tipos de agrupaciones que presentan.
Realizar una revisión de las aplicaciones de células bacterianas más importantes
a nivel ambiental e industrial.
Busque en esquemas (dibujos) las formas y agrupaciones bacterianas y dibujelas
De 3 razones por las que a una muestra se le debe realizar la coloración de Gram
De acuerdo a la localización y tamaño de las esporas como se clasifican.
Mencione 5 bacterias Gram positivas y 5 Gram negativas.

PREPARACION Y ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO.
PRÁCTICA No 5

INTRODUCCION

Los medios de cultivo son un sistema artificial que permite las condiciones óptimas y
necesarias (de cantidad de nutrientes, temperatura) para el desarrollo de determinados

BIOLOGÍA GENERAL

microorganismos. De acuerdo con esto encontramos diferentes requerimientos
nutricionales, distintos tipos de medios en cuanto a consistencia: líquidos, sólidos)
alrededor de 1.6% de agar), semisólidos (0.8% de agar), que como se observa, la
consistencia depende de cantidad de agar o de su ausencia, el agar es componente
esencial que proviene de las algas rojas, además que es resistente a la acción de
degradación que realizan las bacterias. El conocimiento de la nutrición microbiana
permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. Todos los microorganismos
tienen parecidos requerimientos de macro y micronutrientes, aunque ha quedado caro
que la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias
y otras, así como la cantidad relativa de cada nutriente.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO:

Un medio de cultivo es una solución acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un
coloide en estado de gel) en la que están presentes todas las sustancias necesarias para
el crecimiento de un(os) determinados microorganismos. Los medios de cultivo se
pueden clasificar en primera instancia en tres grandes tipos:

1. Medios complejos o indefinidos: su composición química exacta se desconoce, ya
que son el producto de realizar infusiones y extractos de materiales naturales complejos:
Ejemplos: Digeridos crudos de extracto de carne, extracto de levadura, peptona de carne,
extracto de levadura y caseína (de la leche).

Con ellos se logra un tipo de medio rico nutricionalmente, aunque indefinido
químicamente. Si lo que pretendemos simplemente es obtener un buen crecimiento
bacteriano, este tipo de medios es ideal, ya que su confección es fácil y rápida (basta
pesar cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales,
disolverlo en agua y esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con la
que queramos trabajar). Estos medios contienen fuentes variadas de C y N orgánicos,
sales minerales y micronutrientes. Sin embargo con ellos no podemos tener un control
nutricional preciso, ya que desconocemos la composición química y proporción exacta de
los distintos nutrientes.

2. Medios sintéticos o definidos: se obtienen disolviendo en agua destilada
cantidades concretas de distintas sustancias químicas puras, orgánicas y/o orgánicas. La
composición concreta de un medio sintético dependerá de la bacteria que queramos
cultivar: lógicamente un medio definido para una bacteria con grandes capacidades
biosintéticas será más sencillo que el medio definido de otra bacteria con menores
posibilidades biosintéticas.

3. En tercer lugar, podemos fabricar un tipo de medio “mezcla” de los anteriores,
denominado medio semisintético: llevan algunas sustancias químicas cuya naturaleza y
cantidad conocemos, junto con sustancias de naturaleza y composición indefinidas.
Cualquiera que sea el tipo de medio, de los 3 que acabamos de citar, podemos elaborar
dos tipos de versiones, según su estado aparente:

-Medios líquidos.

BIOLOGÍA GENERAL

-Medios sólidos: derivan de los líquidos simplemente añadiendo a la solución nutritiva
un coloide en estado gel, que solidifica (da consistencia) a esta solución.

En los primeros tiempos de la microbiología solo se conocía como sustancia gelificante,
la gelatina. Sin embargo, presenta muchos inconvenientes, ya que funde a 25C (por
encima de esta temperatura el medio se licúa), y además, muchas bacterias presentan
gelatinasas que hidrolizan la gelatina.

El gelificante más usado es el agar-agar, extraído de algas rojas (p.ej. Gelidium), del cual
existen versiones más o menos purificadas (las más puras están más enriquecidas en el
polisacárido agarosa, son las que se emplean para los medios definidos, con el objeto de
evitar la introducción de sustancias contaminantes, inadvertidas que falseen las
interpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria).

El agar presenta la ventaja de que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los 100C,
lo que permite su uso para la inmensa mayoría de las bacterias, que son mesófilas.
Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautótrofos) se suele recurrir a un
gelificante inorgánico, el silicagel o gel de sílice.

Medios selectivos son aquellos que permiten seleccionar un tipo (unos pocos tipos) de
microorganismos. En el laboratorio se emplean mucho medios selectivos sólidos que
incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas bacterias, pero
permite el crecimiento de otras (p. ej. Medios que llevan violeta cristal inhiben el
crecimiento de bacterias gran positivas).

Medios diferenciales son aquellos que permite distinguir a simple vista dos o más tipos
de bacterias en función de su distinto comportamiento respecto de algún nutriente del
medio. Este comportamiento diferencial se traduce normalmente en viraje de color de
una sustancia indicadora presente en el medio.

Ejemplos:
En el medio EMB (eosina azul de metileno) ciertos tipos de metabólicos de bacterias
producen ácidos por fermentación de ciertas fuentes de carbono.
El medio agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo cual revela la
capacidad (y el tipo) de hemólisis de ciertas bacterias.

CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS

Antes de utilizar un medio de cultivo se debe realizar el control de calidad para
comprobar si las características del medio están dentro de las especificaciones dadas por
la casa comercial y si la metodología de preparación es satisfactoria. Cada lote de medio
preparado debe someterse a un programa mínimo de ensayo que asegure su aceptación
y demuestre su actividad bacteriana típica.

Valor de pH: compruebe el pH del medio, cuando este, tenga la temperatura ambiente, el

BIOLOGÍA GENERAL

cual debe coincidir con el señalado en la etiqueta.

Esterilidad: Tome al azar una muestra del 3 al 5% del lote preparado e incúbelo a 37C
durante 2 a 5 días, para observar si hay crecimiento microbiano. Si hay presencia es
indicativa de mala esterilización y debe repetirse toda la preparación.
La esterilización es el proceso mediante el cual se destruyen los microorganismos sea
cual sean sus características (células viables, esporas etc.) patógenos o no, sobre el
material o dentro de él.

Efectividad: Que en el medio preparado efectivamente hay un desarrollo de
microorganismos, se pone el medio de cultivo al ambiente o sirviendo una muestra.
Estabilidad: con cierta periodicidad compruebe los datos mencionados en el medio
preparado y conservado, para determinar si las condiciones de conservación son
satisfactorias

MATERIALES

Autoclave
Balanza
Espátula
Erlenmeyer
Cajas de petri
Gradillas
Agua destilada
Papel kraft
Probetas
Erlenmeyer
Tapones
Medios de cultivo (agar y caldo)

METODOLOGIA

En la práctica, se realizará la preparación de medios de cultivo tales como: agar nutritivo
y caldo nutritivo.

Realizar los cálculos correspondientes para la preparación de los medios, teniendo en
cuenta el recipiente en el que se va a ensayar el medio, ya que los tubos de ensayo
13X100 tapón algodón se ponen 3 ml y en las cajas de petri se envasan 20 ml.
Agregar en un erlenmeyer el medio (gramos) y agregue la cantidad de agua calculada
(ml). Agite el medio y póngalo a calentar con un tapón algodón ligeramente puesto, deje
hervir. En el caso de los caldos no se calientan.

Posteriormente esterilice en autoclave (calor húmedo). Es importante saber que hay
condiciones que garantizan una verdadera esterilización: tiempo: 15-30 minutos, presión
de vapor 15 libras/pulgadas cuadradas o 1.2 atmósfera y temperatura de 121C.
Deje enfriar a temperatura cachete y sirva en cajas de petri, en el caso de los tubos sirva
5 o 6 mililitros con la pipeta.

BIOLOGÍA GENERAL

Para conservar los medios de cultivo, se colocarán en el refrigerador para evitar que se
dañen y se contaminen. Se recomienda guardar los medios dentro de bolsas de plástico
selladas.

Realizar la prueba de esterilidad para 2 cajas, una como control sin esterilizar y una
prueba de efectividad exponiendo la caja al ambiente.

PREGUNTAS PRELABORATORIO

Qué efecto tiene el calor sobre los microorganismos?.
Qué efecto tiene el método de calor seco en la célula (microorganismos)?.
Qué efecto tiene la luz ultravioleta sobre la célula (microorganismos)?.
Defina desinfectante, antiséptico, bactericida.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

Haga un esquema del autoclave con sus partes y su función
Esquematice etapas de esterilización en autoclave (en clase).
Mencione los dos tipos principales de esterilización y explique cada uno de ellos.

PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CELULAR. FENÓMENOS DE DIFUSIÓN,
OSMOSIS Y PRESION OSMÓTICA

LABORATORIO No. 6

Toda célula posee un sistema complejo de membranas, cuya función general es el
intercambio de materiales entre la célula y el medio acuoso externo o fluido extracelular y
entre los organelos y el citoplasma de las células. Las membranas sirven igualmente
para compartimentar enzimas y metabolitos celulares. Estas poseen la propiedad
funcional de PERMEABILIDAD SELECTIVA, por ser permeables a las moléculas de
agua, pero más o menos impermeables a los solutos. Sin embargo, esta permeabilidad
puede verse afectada por cambios de temperatura, tóxicos, solventes orgánicas y la
composición química del medio que rodea la célula.

OBJETIVO: Observar el efecto de la concentración del medio sobre las células y
comprobar el proceso de ósmosis en un osmómetro.

PRIMERA PARTE

MATERIALES:
Azul de metileno
Solución rojo neutro
Solución salina (NaCl) al 2%, 0.6%

BIOLOGÍA GENERAL

Agua destilada
Hielo
Termómetro
Tubos de ensayo
Gradillas
Pipetas
Vasos de precipitado
Pinzas, porta y cubreobjetos.

PROCEDIMIENTO:

DIFUSIÓN ESPONTÁNEA:

Ponga 2 ml de agua destilada en 5 tubos de ensayo marcados respectivamente del 1 al
5. Tome la temperatura. Agregue azúl de metileno a cada uno de los tubos así: Tubo 1:
Una gota, Tubo 2: Dos gotas, Tubo 3: Tres gotas, Tubo 4: Cuatro gotas, Tubo 5: Cinco
gotas. Mida el tiempo de difusión en cada uno de los tubos, para ello registre el tiempo en
el que colocó las gotas de azúl de metileno y el momento en que la distribución de éste
es uniforme. Registre el tiempo de difusión en una gráfica (papel milimetrado) y diga qué
efecto tiene la concentración sobre la velocidad de difusión.

Tome cuatro tubos de ensayo marcados del 1 al 4. En el tubo 1 adicione 2 ml de agua a
0°C, al tubo 2 adicione 2 ml de agua a temperatura ambiente, al tubo 3 adicione 2 ml de
agua a 45°C y en cuarto tubo 2 ml de agua a 75°C. Inmediatamente después de
adicionar el agua en los tubos coloque dos gotas de azul de metileno en cada uno de
ellos y mida el tiempo de difusión. Registre gráficamente los resultados y diga el efecto
que tiene la temperatura sobre la velocidad de difusión (realice una tabla y una gráfica).

OSMOSIS A TRAVES DE LA MEMBRANA CELULAR

Utilizando los eritrocitos como osmómetros, marque 3 tubos del 1 al 3 tres
respectivamente y deposite en cada uno de ellos 2 ml de solución así: tubo 1: solución
salina al 2%, tubo 2: agua destilada, tubo 3: solución salina al 0.6%. Luego adicione 1
gota de sangre en los tres tubos de ensayo. Transcurridos 2 minutos transfiera con una
pipeta limpia a un portaobjetos previamente marcado (1 a 3) una gota de cada tubo y
cúbrala con una laminilla. Observe la muestra al microscopio y describa la forma que
presentan los eritrocitos o glóbulos rojos. Con el ocular micrométrico indique el tamaño
de los eritrocitos en cada caso y compare. El tamaño promedio de un eritrocito humano
es de 7.5 um. Haga sus esquemas.

PREGUNTAS:

Qué procesos se desarrollaron durante la práctica, hubo hemólisis o normalidad
en cada caso?
La solución era isotónica, hipotónica o hipertónica en cada caso.
Qué le sucedería a una persona si se le inyectara agua destilada en el torrente

BIOLOGÍA GENERAL

sanguíneo.

SEGUNDA PARTE

DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN OSMÓTICA CELULAR Y CÁLCULO DE
LA PRESIÓN OSMÓTICA MEDIANTE EL MÉTODO PLASMOLÍTICO.

Coloque al lado izquierdo de una lámina dos gota de solución de sacarosa al 0.1M y
sobre ésta una hoja de elodea. Luego cubra el montaje con una laminilla. Al lado derecho
de la misma lámina coloque en una gota de agua de acuario otra hoja de tamaño
semejante. No permita que se seque el líquido en los montajes. Observe al microscopio
20 células de la hoja y determine si se presenta plasmólisis en algunas de ellas. Para
efectos prácticos se considera que una solución de determinada concentración produce
plasmólisis cuando el 50% están plasmolizadas. Compare su observación con el montaje
de control. Repita el procedimiento con las soluciones restantes de sacarosa (0.2, 0.3,
0.4 y 0.5M) y registre sus resultados en una gráfica. Indique la (s) concentración (es)
hipo-osmótica, iso-osmótica e hiper-osmótica. Determine la concentración osmótica de la
célula y calcule la Presión Osmótica (PO).

Preguntas:

 Qué factores determinan el paso de sustancias a través de las membranas celulares.
 Explique por qué las heladas afectan a los cultivos.
 Indique algunos procesos biológicos en plantas y animales relacionados con la
ósmosis.
 Qué es transporte activo. De un ejemplo de este proceso.
 Qué es diálisis y de un ejemplo.
 En que consiste la electrodiálisis.
 Dé un ejemplo de una aplicación práctica de la diálisis en el campo de la salud.

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