Introducción a las técnicas estereologicas usando sistemas de microscopía

1. Unbiased STEREOLOGY
for biological research
16 | 01 | 2013

2. UNBIASED STEREOLOGY
Estereología "imparcial"
« La estereología es un set de métodos diseñados
para asegurar un análisis cuantitativo riguroso del
tamaño, forma y número de objetos de interés »
➲ Volumen (3
dimensiones)
➲ Superficie (2
dimensiones)
➲ Largo (1 dimensiones)
La estereología apunta a recrear o estimar las
propiedades de objetos geométricos en el espacio

3. UNBIASED STEREOLOGY
¿Por qué "imparcial“?

4. UNBIASED STEREOLOGY
Diferentes métodos
Model - Based Stereology
Usa modelos basados en las propiedades geométricas de los objetos
Desing - Based Stereology
Las sondas y esquemas de muestreo son diseñados, por lo que
los métodos son independientes del tamaño, forma,
orientación y distribución espacial del objeto.
☒
☑
Usa métodos de aproximación que solo funcionan si los modelos
realmente representan al objeto.
Todo objeto tiene la misma probabilidad de ser
muestreado
No se asume sobre el tamaño, forma, orientación o
distribución del objeto muestreado
➲
➲

5. CRITERIOS
Punto único de conteo
Muestreo
Unbiased Counting Frame
❶
❷
❸

6. CRITERIOS
Muestreo

7. CRITERIOS
Muestreo
La retina del ojo es un buen ejemplo, ya que las células de ganglio retinal
no se distribuyen de forma uniforme sobre la retina.
Random
independent samples
Uniform random
systematic samples

8. CRITERIOS
Medición: Punto único de conteo

9. CRITERIOS
Medición: The Unbiased Counting Frame
Una partícula es contada si y sólo si:
Está completamente dentro del cuadro
de conteo
Cruza una linea verde pero no una roja
☑
☑
Línea de inclusión
Línea de exclusión

10. CRITERIOS
Un ejemplo…

11. CRITERIOS
The Unbiased Counting Frame: ¿Cómo funciona?

12. CRITERIOS
The Unbiased Counting Frame: ¿Cómo funciona?
La célula de Purkinje mostrada en este ejemplo es contada en el UCF n°3
y solo en este UCF, ya que toca al menos una de las líneas de exclusión de
los UCF n° 1, 2 y 4.

13. CRITERIOS
Medición: The Optical Disector
Di-sector = dos secciones

14. CRITERIOS
The Guard Zones

15. VENTAJAS
Lo que ofrece el método
Datos 3D “reales”
Los valores obtenidos se relacionan con un punto en el espacio
Exacto
Y por lo tanto imparcial
☑
☑
Preciso
Lo que aumenta la eficiencia del proceso
Simple
Fácil de aplicar en la práctica
☑
☑

16. APLICACIONES
La estereología puede usarse para estimar
Una población de células
Tamaño celular
Volumen de una región específica de un órgano
Fracción de área
Superficie
Largo de fibra
Etc…

17. STEREO INVESTIGATOR
Permite hacer estimaciones:
Área dentro de un contorno trazado
Volumen, luego de medir el grosor de una muestra histológica
Conteo de poblaciones
!
!
El programa facilita el muestreo sistemático
Permite el uso de cuadros de conteo y calcula las zonas de
protección
Posee diversas sondas para análisis locales y globales
Además: