1. Extraccion de Caseina de la leche, hidrolisis y analisis de aminoacidos por
cromatografía
1. Objetivo de la pratica:
Extracion de la caseína de la leche descremada y análisis de sus
aminoácidos.
2. Estructura,propiedades y usos de la caseína:
Las caseínas es un conjunto heterogéneo de proteínas por lo que es difícil fijar una
definición. Sin embargo, todas las proteínas englobadas en lo que se denomina
caseína tienen una característica común: precipitan cuando se acidifica la leche a
pH 4,6. Por ello, a la caseína también se le suele denominar proteína insoluble de
la leche. Por otra parte, y aunque las proteínas que se denominan caseínas son
específicas de cada especie, se clasifican en los siguientes grandes grupos de
acuerdo con su movilidad electroforética: αs1-caseína, αs2-caseína, β-caseína y κ-
caseína (véase la Figura 1).
Figura 1
Figura 2

2. Parte Experimental
A. Extracción de la caseína
3. Diagrama de proceso
Extracción de la caseína
Leche pura vida
V=100ml
1. Preparación de la Muestra
i) Calentar a 40 °C y añadir gota a gota acido
Acético al 10% y agitar mientras se añade.
ii) Dejar reposar para observar la precipitación
de la caseína.
iii) Filtración al vacío
Solvente
Orgánico iv) Secado a 40°C por 30min
Caseína impura
2. Extracción Solido-Liquido
i) Añadir 15ml de n-hexano y agitar por 10min,
repetir el procedimiento 2 veces
Solución de ii) Filtración al vacío
n-hexano
Caseína desengrasada
húmeda
3.secado de la caseína
i. Secar la caseina al aire durante uno o dos
días y luego pesarla.
Caseina
W=32 g

3. 4. Resultados experimentales
i. Precipitación de la caseína y punto isoeléctrico
Características(marca, densidad) de la materia prima.
Observaciones experimentales y comentarios.
Se obtuvo un precipitado en forma de gránulos de color blanco.
El punto isoeléctrico de la caseína es de pH=4,6.
Tabla1:características de la leche usada
Marca de la leche Densidad(g/ml)
Pura vida UHT 1,03
ii. Peso y características del producto obtenido
Se obtuvo un precipitado en forma de granulos de color blanco.
Donde el peso obtenido fue de :Wf=32g
iii. Rendimiento del proceso
A la caseína se le denomina como proteína insoluble de la leche, entonces
el peso que se obtendrá sera el peso únicamente de la caseina.
Se trabajo con un volumen de 400ml ,usando la densidad de la leche que es
1,03 g/ml entonces el peso de caseina iniciales:
Wi=100*1,03=103g
Como el peso final es :Wf=32g
Hallando el rendimiento:
%R=WF/WI*100%=32/103*100%=32%
B. Hidrolisis de la caseína
5. Observaciones experimentales
Variables en el uso carbón activo(cantidad,temperatura y tiempo de
disolución).
Tabla2:variables en el uso de carbón activado
Cantidad(g) Temperatura Tiempo(min)
0.5 Reflujo 10

4. 6. Ecuacion de la Hidrolisis.Mecanismo de la reacción
La ecuación de la hidrolisis es la siguiente:
7. Test de Biuret
Proponga la ecuación de la reacción que se produce.
Caseina + NaOH + CuSO4 ------> + Na2SO4
Complejo de color azul
C. Análisis cromatografico de aminoácidos
8. Resultados experimentales
i. Características de la placa,eluente,revelador,Rf y patrones
usados.
Placa: La placa es papel filtro que esta hecho de celulosa el cual
posee propiedades adsorbentes.Esto significa que unas
sustancias son adsorbidas más que otras y, por consiguiente, la
liberación de las sustancias de las manchas variará de una
sustancia a otra. Esto contribuye de nuevo a la separación.
Mientras que se va realizando el cromatograma, las sustancias
mas fuertemente adsorvidas se van quedando atrás, mientras
que las adsorvidas con menos fuerza avanzan hacia el frente.
Eluente: el eluente usado fue una solución de n-butanol,
ac.acetico y agua en la proproporción 5,1 y 2 respectivamente.
Revelador: el revelador fue el calor de la estufa.
Patrones usados: los patrones usados fueron:
Metanol
Cisterina
Quercetina

5. Rutina
Listina
Sergerina
ii. Ilustracion de las placas cromatograficas desarrolladas.
Figura 3
Donde:
P1,P2,P3 Y P4 son los patrones usados.
M es la muestra.
9. Revelado con Ninhidrina(de aminoácidos presentes)
i. Ecuación de la reacción, tome como ejemplo uno de los
aminoácidos.
ii. Mecanismo de la reacción.
Cuestionario
P1. Procedimiento alternativo de Extraccion de la caseína. Trabajo
bibliográfico
i. Cite otro texto de química organica experimental, diferente a Pavia et
al.-1978 o Rendina-1974, en el cual se presenta la “ extracion de la
caseína” y adjunte la fotocopia respectiva(como anexo).

6. ii. Proponga el diagrama del proceso respectivo(en paralelo con el
realizado en su Pract. Lab,Sec. A3)
iii. Señale las diferencias mas importantes entre ambos procedimientos.
P2.Enzima y Hormonas:
i. Enzimas.definicion y ejemplos(2).
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan
reacciones químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles:
Una enzima hace que una reacción química que es energéticamente
posible pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea
cinéticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin
la presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimas actúan
sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten
en moléculas diferentes denominadas productos. Casi todos los
procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran a unas
tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las
denomina reacciones enzimáticas.
A continuación se indican 2 enzimas:
Miosina: Al hidrolizar la ATP genera la contracción muscular.
Amilasas: Es capaz de degradar moléculas grandes (almidón o
proteínas, respectivamente) en otras más pequeñas, de forma
que puedan ser absorbidas en el intestino.
ii. Hormonas. Definición y ejemplo(2)
Las hormonas son sustancias secretadas por células especializadas,
localizadas en glándulas de secreción interna o glándulas endocrinas
(carentes de conductos), o también por células epiteliales e
intersticiales con el fin de afectar la función de otras células. También
hay hormonas que actúan sobre la misma célula que las sintetizas
(autocrinas). Hay algunas hormonas animales y hormonas vegetales
como las auxinas, ácido abscísico, citoquinina, giberelina y el etileno.
A continuación se indican 2 hormonas:

7. Dopamina: Aumento del ritmo cardíaco y de la presión arterial
inhibe la liberación de prolactina y hormona liberadora de
tirotropina.
Péptido natriurético auricular: Regula el balance de agua y
electrolitos, reduce la presión sanguínea.
P3. Precipitacion de proteínas
i. Punto isoeléctrico. Definición. Relación con la solubilidad. Cual es el
punto isoeléctrico de la caseína?
El punto isoeléctrico es el pH al que una sustancia anfótera tiene carga
neta cero. El concepto es particularmente interesante en los
aminoácidos y también en las proteínas. A este valor de pH la
solubilidad de la sustancia es casi nula. Para calcularlo se deben utilizar
los pKa.
Está relacionado con la solubilidad debido que al alcanzar el punto
isoeléctrico comienza la precipitación.
El punto isoeléctrico de la caseína es de pH=4,6.
ii. Cuál es la propiedad más importante a tener presente durante la
precipitación de una proteína (p.ej. caseína) y ejemplo
La propiedad mas importantes es la medida del pH, debido que si no se
llega a un pH adecuado la precipitación nunca ocurrirá.
Para el caso de la caseina se necesita un pH=4,6 para que comienze la
precipitación.
iii. ¿Porque es importante llegar al punto isoeléctrico en la precipitación
de la caseína?
Se debe de llegar al punto isoeléctrico para poder disolver el fosfato de
calcio ,asi al tener disuelto todo el fosfato comenzara la precipitación
de la caseina.

8. P4. Desnaturalización de proteínas. Definición y proceso.
La desnaturalización es un cambio estructural de las proteínas o ácidos
nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su
óptimo funcionamiento y a veces también cambian sus propiedades
físico-químicas.
Los agentes que provocan la desnaturalización de una proteína se
llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor)
y químicos (detergentes, disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica).
Como en algunos casos el fenómeno de la desnaturalización es
reversible, es posible precipitar proteínas de manera selectiva
mediante cambios en:
La polaridad del disolvente.
La fuerza iónica.
El pH.
La temperatura.
Bibliografía:
[1].http://www.fao.org/docrep/010/ah833s/AH833S17.htm
[2].http://es.wikipedia.org/wiki/Punto_isoeléctrico
[3].http://www.demochem.de/D-Biuret-e.htm