1. Rippei Hayashi, Nono Takeuchi and Takuya Ueda
POR:
Sara Manuela Ocampo Ramírez
Paola Andrea Parra Estrada

2. NLS
Nuclear Location Signal
Specific aminoacidic sequences
Nucleus Cytoplasm
Nuclear pore 1. Carrrier prontein
2. Cytoplasmatic protein
3. NLS
4. Nuclear protein
1 2
3
44

3. IMPORTIN
Receptor and carrier proteins
Has two subunits
Importin- α Importin-β

4. Lewin´s cell

6. NRF- 2
GA-binding protein / E4
Transciption factor 1
Multimeric transcsiption factor
NRF-2α NRF-2β

7. NRF- 2
FUNCTION:
Regulates lineage-specific genes,
cytosolic ribosomal proteins, genes that
control cellular growth, regulates the
entire antioxidant system and
mitochondria-related genes.
ACTIVATION:
Regulated by nuclear transport upon
neural activation.
FUNCTION:
Regulates lineage-specific genes,
cytosolic ribosomal proteins, genes that
control cellular growth, regulates the
entire antioxidant system and
mitochondria-related genes.
ACTIVATION:
Regulated by nuclear transport upon
neural activation.

11. Cultivo de células y transfección
Resultado del
crecimiento in vitro
de células obtenidas
de organismos
multicelulares
Resultado del
crecimiento in vitro
de células obtenidas
de organismos
multicelulares
Introducción de DNA
externo con un
vector de expresión.
Introducción de DNA
externo con un
vector de expresión.

12. Construcciones de un plásmido
Formación de un DNA
extracromosómico
independiente al DNA
cromosómico
Formación de un DNA
extracromosómico
independiente al DNA
cromosómico
Fuente: google images

13. Inmunofluorescencia
Reacción antígeno-anticuerpo hecha
visible por la incorporación de un
colorante fluorescente al anticuerpo.
Exposición a luz ultravioleta.
Reacción antígeno-anticuerpo hecha
visible por la incorporación de un
colorante fluorescente al anticuerpo.
Exposición a luz ultravioleta.
Técnica de anticuerpos fluorescentes

14. Proteínas recombinantes
Proteínas producidas en el
laboratorio mediante ingeniería
genética en células distintas a las
que se producen en la naturaleza.
Proteínas producidas en el
laboratorio mediante ingeniería
genética en células distintas a las
que se producen en la naturaleza.

15. Ensayos in vitro de importación
nuclear
Técnica para realizar un
determinado experimento
en un tubo de ensayo, o
generalmente en un
ambiente controlado fuera
de un organismo vivo.
Técnica para realizar un
determinado experimento
en un tubo de ensayo, o
generalmente en un
ambiente controlado fuera
de un organismo vivo.

16. Ensayos de unión de proteínas
Técnica usada para detectar interacción
entre dos proteínas.
Activa un gen reportero o un factor de
transcripción sobre la secuencia regulatoria
UAS (Upstream activating sequence),
localizada al inicio del promotor.
Técnica usada para detectar interacción
entre dos proteínas.
Activa un gen reportero o un factor de
transcripción sobre la secuencia regulatoria
UAS (Upstream activating sequence),
localizada al inicio del promotor.

17. TÉCNICAS DE SEPARACIÓN DE MOLÉCULAS SEGÚN LA MOVILIDAD DE ÉSTAS
La separación puede realizarse
• En papel o en acetato de celulosa
• Matriz porosa: gel
• Disolución: libre
La separación obedece a la carga
eléctrica y masa.
La separación obedece a la carga
eléctrica y masa.

18. Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas
Técnica de inmunoensayo de tipo heterogénea en la cual un antígeno inmovilizado
se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un
producto detectable como cambio de color o algún otro tipo

19. Tipo sándwichTipo sándwich

20. Tipo indirectoTipo indirecto

21. Tipo competitivoTipo competitivo

22. La importina-La importina-αα::ββ mediamedia
la importación nuclearla importación nuclear
del complejo NRF-2del complejo NRF-2αβαβ
NúcleoNúcleo
NRF-2α
NRF-2α
NRF-2β
NRF-2β recluta a la NRF-2α.
Dominios Ets pueden dirigir la
NRF-2α al núcleo.
Hipótesis: Transporte de NRF-2 mediada
por dominios Ets de NRF-2α y eficiencia
aumentada por unión al NRF-2β

24. Importada al núcleo de
manera eficiente.
Esto no facilitó significativamente la
importación nuclear

25. Se formó un heterodímero
Se requieren para importación
nuclear

26. Dependían de esto para la importación
nuclear, al igual que la importación del
complejo NRF-2α-GFP:NRF-2β
NRF-2β media
importación nuclear
de complejos
NRF-2αβ

27. Ran Q69L
Forma mutante de Ran GTPasa
Disocia moléculas de carga de la importina-
β-relacionada, por lo que estas median la
importación nuclear.
Rch1-IBB
Rch1-IBB y una importina-α, se unen y enmascaran la
importina-β. El dominio Rch1-IBB inhibió la
importación del complejo nuclear.

28. IdentificaciónIdentificación
del NLSs deldel NLSs del
NRF-2NRF-2αα y ely el
NRF-2NRF-2 ββ

29. NRF-2α que normalmente es
dependiente del NRF-2 β, in vivo fue
localizada en el núcleo estando sola.

30. Lo anterior gracias a la mutante NRF-2 α Y409E,
que no se une al NRF-2 β, todavía se puede mover
en el núcleo.

31. Inhibe la localización nucleas de NRF-2 α, lo que apoya la
idea de que esta va al núcleo a través del dominio Ets.

32. La deleción del aminoácido 310, causó un aumento
sorprendente en la localización citosólica

33. Se hizo localizar en el
núcleo. Esenciales para la
función de la NLS

34. Representantes de cada subtipo de importina-αLa importina-β y Ran no
pueden activar la
importación nuclear en
ausencia de la importina-α.
Rch1, NPI-1, Qip1 activan la
de NRF-2α-GFP:NRF-2β.
El complejo importina-α:β
media importación nuclear
de la NRF-2αβ

35. Los carriles 1 y 4 A y el carril 1y2 B
indican que la NRF-2α y la NRF-2β se
unen a Rch-1: importinaβ facilitando
su importación nuclear
respectivamente.
Los carriles 6 A y el carril 4 B
indican que hay mutaciones
en la importación nuclear de
NRF-2α y la NRF-2β si se utiliza
una variedad de tipo salvaje.

36. Observación de la importación nuclear de NRF-2α y NRF-2β utilizando
proteínas mutantes incapaces de unir Rch1-importina β.
Las mutaciones no inhibieron las interacciones del complejo NRF-2αβ.

37. RELACION DE LA IMPORTACION
ENTRE EL NUCLEO Y EL CITOPLASMA

38. 1 2 3 4
1. Interacción entre Rch1 y
NRF-2B no se unen por si
solas.
2. Utilización de Rch1 con IBB
murado tiene mas afinidad
por NRF-2B.
3. Utilización de Rch1 con una
residuo mutado inhibe la
unión del NRF-2B.
4. Unión eficiente entre Rch1
completo y NRF-2

41. •Do HJ, Song H, Yang HM,
Kim DK, Kim NH, Kim JH, et
al. Hu W, Philips AS, Kwok
JC, Eisbacher M, Chong BH
Its appeared that the
nuclear import of NRF-2α
alone is not an efficient
event in vivo as compared
to that of the NRF-2αβ
complex. It is unlikely that
the residual of NRF-2α
inhibits nuclear import,
the deletion had no effect
on its subcellular
localization. Therefore, it
is probable that the
nuclear-localization
capability of the NRF-2α
Ets is not as strong as the
NLS of NRF-2β.
•Desagree

43. Learned to develop ourselves with article both in
English and in Spanish language.
Learned to relate what we saw in class what we
learned in Article.
We put into practice the knowledge learned about
reading the electrophoresis.
Learned the importance of being specific and clear
in the study of items.

44. NFR-2
NRF-2α NRF-2β
ADN Dominio de
ACT.
Dominio
ETs NLSIMPORTINA α β
núcleoTransporta complejo proteína
Subunidad β Subunidad α
Prot. citosólicas
Genes
ribosómicos
celular

46. •GONZÁLEZ RABANAL, José Manuel; CALVO PRIETO, Jesús; BARROS
PUGA, Marta. Gestión de la función administrativa del servicio Gallego
de salud. Vol 3. Editorial Mad, S.L. 2006. Pag 364.
•GÓMEZ, Susana; GUTIERREZ, Maria Fernanda. La inmunología en el
diagnóstico clínico. Primera edición. Centro editorial Javeriano. 1994. Pag
76.
•MARTINEZ SÁNCHEZ, Lina María. Biología molecular. 2. ed. Medellín:
UPB. Fac. de Medicina, 2006. Pag 121-127; 148-155.