Stage - Été 2016
Aleksandra Pruszynska (Université McGill) Geneviève Demers (Université d’Ottawa)
Formations obligatoires
• Visite de l’animalerie + Examen LabTracks
• Conseil canadien de protection des animaux + Examen ...
Observation de manipulations en laboratoire
• Tests comportementaux
Conditionnement opérant
Force Swim Test
Marble Bury...
GPR120
• Récepteur couplé aux protéines G
• Fonctions
↓ inflammation en périphérie
↑ sensibilité à l’insuline
• Agoniste...
GPR120
En quoi il est intéressant?
• Perte de fonction de GPR120 = ∅ effet antiinflammatoire
∅ effet des oméga-3 sur la se...
GPR120
↑ INFLAMMATION ↑ COMPORTEMENTS
DE TYPE
DÉPRESSIF/ANXIEUX
OBÉSITÉ
RELIÉ À GPR120 AU
NIVEAU CENTRAL???
GPR120
Souris
• 4 NF-kB reporter mice
1. Chirurgies stéréotaxiques  Implantation de
canules
2. Injection d’angiotensine I...
GPR120
Souris
5. 10e journée = Injection intrapéritonéale de
lipopolysaccharides (LPS)
5. 4h plus tard = Perfusion
5. Entr...
Résultats
GPR120
Microglies en culture
• 9 puits
3 contrôles
3 LPS
3 LPS + cpdA
1. Extraction d’ARN
2. cDNA
Résultats
Contrôle LPS LPS + cpdA
Limites
Souris
• Précision de mesure de prise alimentaire (Résidus, humidité)
• Échantillons de petites tailles
• Mesure d...
À venir
Souris Microglies
IHC  β-galactosidase. IBA-1?
Dans quelles cellules =
microglies, neurones?
Dans quelles régions...
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Présentation Lab Meeting - 26 juillet 2016

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  • DHA alimentaire nécessaire est beaucoup trop élevé pour procurer activer GPR120 de façon prolongée (Oh, D. Y., Walenta, E., Akiyama, T. E., Lagakos, W. S., Lackey, D., Pessentheiner, A. R., … Olefsky, J. M. (2014). A Gpr120-selective agonist improves insulin resistance and chronic inflammation in obese mice. Nature Medicine, 20(8), 942–7. doi:10.1038/nm.3614)
  • NK-kB reporter mice = produisent enzyme béta-galactosidase
  • NK-kB reporter mice = produisent enzyme béta-galactosidase
  • Souris
    La prise de nourriture n'a pas été meaured de manière précise beacause les palettes alimentaires auraient été perdus ou petits résidus d'aliments ne sont pas vus.
    En raison de l'humidité et de la proximité de l'eau, la nourriture pourrait pondérée plus
    Le manque de mesure de l'activité physique , ce qui pourrait avoir influencé la prise de poids

  • Présentation Lab Meeting - 26 juillet 2016

    1. 1. Stage - Été 2016 Aleksandra Pruszynska (Université McGill) Geneviève Demers (Université d’Ottawa)
    2. 2. Formations obligatoires • Visite de l’animalerie + Examen LabTracks • Conseil canadien de protection des animaux + Examen du Tronc Commun • Plan des mesures d’urgence • Biosécurité générale • Manipulation de souris • Atelier appareil anesthésie (À venir)
    3. 3. Observation de manipulations en laboratoire • Tests comportementaux Conditionnement opérant Force Swim Test Marble Burying Elevated Plus Maze • Oral Glucose Tolerance Test + Insulin Tolerance Test • Résonnance magnétique • Chambres métaboliques (CLAMS) • Euthanasie/nécropsie Guylaine Gagnon 2016-2016
    4. 4. GPR120 • Récepteur couplé aux protéines G • Fonctions ↓ inflammation en périphérie ↑ sensibilité à l’insuline • Agoniste  Acides gras polyinsaturés de type oméga-3 (DHA)  Compound A (cpdA)  Molécule synthétique • Pourquoi cpdA est plus efficace/pratique que DHA??
    5. 5. GPR120 En quoi il est intéressant? • Perte de fonction de GPR120 = ∅ effet antiinflammatoire ∅ effet des oméga-3 sur la sensibilité à l’insuline ↓ dépense énergétique ↑ poids sur diète haute en gras (HFD) • Chez l’Humain  Variation sur le gène GPR120 = Obésité • cpdA = ++ sélectif à GPR120 (et non GPR40)  Potentiel traitement pharmacologique du T2DM
    6. 6. GPR120 ↑ INFLAMMATION ↑ COMPORTEMENTS DE TYPE DÉPRESSIF/ANXIEUX OBÉSITÉ RELIÉ À GPR120 AU NIVEAU CENTRAL???
    7. 7. GPR120 Souris • 4 NF-kB reporter mice 1. Chirurgies stéréotaxiques  Implantation de canules 2. Injection d’angiotensine II 3. Injection de cpdA (n=2) vs contrôle (n=2) X 10 jours 4. Mesure de la prise alimentaire à 1/2/4/24h et quotidien X 10 jours
    8. 8. GPR120 Souris 5. 10e journée = Injection intrapéritonéale de lipopolysaccharides (LPS) 5. 4h plus tard = Perfusion 5. Entreposage des cerveaux dans formaline  Sucrose  Congélation
    9. 9. Résultats
    10. 10. GPR120 Microglies en culture • 9 puits 3 contrôles 3 LPS 3 LPS + cpdA 1. Extraction d’ARN 2. cDNA
    11. 11. Résultats Contrôle LPS LPS + cpdA
    12. 12. Limites Souris • Précision de mesure de prise alimentaire (Résidus, humidité) • Échantillons de petites tailles • Mesure de l’activité physique vs le poids? Microglies en culture Problème avec la culture cellulaire au traitement > nous ne savons pas si CPDA diminué l' inflammation et combien
    13. 13. À venir Souris Microglies IHC  β-galactosidase. IBA-1? Dans quelles cellules = microglies, neurones? Dans quelles régions du cerveau? qPCR  Mesure gènes liés à l’inflammation (TNF-α, IL-6)

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