1. DETERMINACIÓN DEL POTENCIAL INHIBIDOR DEL EXTRACTO Y
FRACCIONES DE Passiflora manicata SOBRE ENZIMAS DIGESTIVAS
(α-amilasa, α-glucosidasa y lipasa pancreática)
Presentado por:
Angy Tatiana Morales Gómez
Geison Modesti Costa
Director
Milena Lima de Moraes
Co-directora
Fuente:
https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata
/Timeline
3. Alteraciones metabólicas
Control de la glicemia
Control de equilibrio
La respuesta del
hígado y tejidos
periféricos a la
insulina
La cantidad y
cinética de las
enzimas
digestivas
La velocidad de
propulsión de los
nutrientes
La velocidad y
la cantidad de
insulina y
glucagón
Insulina Glucagón
Resistencia a la
insulina
Hiperinsulinemia Hipertrigliceridemia
Hiperglicemia
ADA, 2017; AACE, 2017; Giugliano et al., 2008; Lebovitz, 1997; Yuan et al., 2007; Mahan et al., 2013; Frayn et al., 2006
CHO´s
Grasas
Fuente: Elaboración propia
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
4. Enzimas digestivas relacionadas con la digestión de los carbohidratos
α-amilasa
Hidrólisis en enlaces
α-1,4-glucosídicos
del almidón.
Quimo al duodeno
Secretina y CCK
Páncreas
50% consumo
Silva & Mura, 2011ª ; Lieberman et al., 2013; Avellaneda, 2013; Chiba, 1997; Lebovitz, 1997
α-glucosidasa
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline Fuente: http://nutricionanimal.mx/tag/digestion-de-almidon
5. Enzimas digestivas relacionadas con la digestión de las grasas
Lipasa pancreática
Células acinares
CCK-Estimulo al
páncreas
LP-Colipasa
Hidrólisis
Triglicéridos (90%)
Lipasa pancreática
Micelas
mixtas
Sales biliares
Colesterol
Absorción
resíntesis
Almacén de
energía
Exceso de
deposición
de grasa
Tejido adiposo
Boca
Lipasa lingual
Lipasa gástrica
Estomago
Obesidad
Páncreas
Grasa Dietetica
Fuente: Birari, 2007
Mukherjee, 2003; Lowe, 2002; Lieberman et al., 2013; Birari, 2007
Ácido lisofosfatídico
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
6. El género Passiflora
Sedantes - Anti-inflamatorios - Antioxidantes - Hipoglicemiantes
Industria alimentaria Área farmacéutica Productos fitoterapéuticos
Carvajal et al., 2014; Bernal & Diaz, 2005; (Colomeu et al., 2014; Gupta et al., 2012; Da Silva et al., 2013; Deng et al., 2010
Passifloraceae
18 géneros y 630 especie
región tropical
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
58 especies
• Tacsonia
• Decaloba
• Passiflora
Fuente: https://pixabay.com/es/colombia-croquis-png-mapa-1266006/
(Passiflora edulis var. flavicarpa) (P. ligularis) (P. maliformis) (P. edulis var. edulis) (P. tripartita var. mollissima)
Fuente: http://passiflora.foroactivo.com/t10-las-frutas-de-la-pasion-mas-conocidas
7. El género Passiflora
Passiflora manicata
“curuba de monte”
• Flavonoides C-glicosidico (isovitexina).
• Potencial citotóxico in vitro contra células de linaje
tumoral.
• El extracto acuoso de las hojas proporcionó
actividad antioxidante y antiglicación.
Falcone Ferreyra et al., 2012; Morrone et al., 2013; Bonilla, 2016; Casierra-Posada & Jarma-Orozco, 2016
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
8. Formulación del problema y justificación
Sofowora et al., 2013; Abe & Ohtani, 2013; Maroyi, 2013; Perrasse et al.,2003; Múnera et al., 2012; Asociación Colombiana de
Endocrinología, 2015; Colomeu et al., 2014; Gupta et al, 2012; Da Silva et al., 2013; Deng et al., 2010
• En Colombia
contribuyen con
síntomas.
Fuente:https://es.123rf.com/imagenes-de-
archivo/arboles_abstractos.html?sti=m6itrd275ilmu3q5b6
• Relevante en
Colombia, ya que la
prevalencia de ECNT
es creciente.
• Importancia en salud
pública.
Fuente: https://es.123rf.com/photo_69007239_concepto-de-prueba-de-perfil-de-
lipidos-ilustracion-del-vector-en-estilo-plano-para-la-infografia-co.html
• Uso de plantas
medicinales para
mejorar la salud de las
personas.
• En países
subdesarrollados con
bajo nivel de atención
médica.
Fuente:https://es.123rf.com/imagenes-de-
archivo/arboles_abstractos.html?sti=m6itrd275ilmu3q5b6
Género Passiflora
• 70% región andina
• Composición química
• Actividades biológicas descritas
P. manicata
• Estudios previamente realizados
• Conocimiento de composición
química y actividades biológicas
Fuente:
https://hiveminer.com/Tags/pas
sifloramanicata/Timeline
9. Pregunta de investigación
¿Cuál es la actividad inhibitoria del extracto y
fracciones de las hojas de Passiflora manicata sobre
las enzimas digestivas α-amilasa, α-glucosidasa y
lipasa pancreática?
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
10. Objetivos
Analizar la potencial actividad inhibitoria del extracto y fracciones de
las hojas de Passiflora manicata sobre enzimas digestivas α-amilasa,
α-glucosidasa y lipasa pancreática.
Determinar la actividad inhibitoria del extracto y fracciones sobre las
enzimas α-amilasa, α-glucosidasa, y lipasa pancreática, mediante
estudios in vitro.
Evaluar la composición química parcialmente del extracto y
fracciones obtenidos a partir de las hojas de P. manicata.
General
Específicos
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
11. Hipótesis
El extracto y fracciones de las hojas de P. manicata presentan
elevada actividad inhibitoria en las enzimas digestivas (α-amilasa,
α-glucosidasa y lipasa pancreática).
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
14. Resultados y discusión
Cromatografía de capa delgada en el extracto y las fracciones de P. manicata.
Perfil de fenoles y flavonoides
Composición química de P. manicata
Condiciones cromatográficas:
FE: Sílica gel; FM: acetato de etilo:acetona:ácido acético:agua (6:2:1:1, v:v:v:v); Revelador: A-Vainillina Sulfúrica, B -Luz UV 254nm.
Presencia de
flavonoides
1. Extracto
2. Acetato de etilo
3. N-Butanol
4. Res. acuoso
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
15. Resultados y discusión
Morrone et al., 2013
Composición química de P. manicata
Perfil de HPLC–DAD del extracto acuoso crudo de hoja de P. manicata a 340 nm.
1: Isoorientina; 2: Vitexina; and 3: Isovitexina.
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16. Resultados y discusión
Cuantificación de fenoles totales
Contenido fenólico total (mgEAG)
Contenido fenólico total (mg EAG)
Triplicado
Extracto
crudo
0.081 0.085 0.078
Fr. AcOEt 0.046 0.050 0.041
Fr BuOH 0.127 0.140 0.144
Residuo H20 0.055 0.060 0.062
-> Elevado contenido
fenólico en la fr. n-butanol.
->Bajo contenido fenólico
en fr. Acetato de etilo.
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17. Resultados y discusión
Log [ ]
g/mL
[ ]
extracto
mg/ml
Extracto Crudo
(74.4%)
Residuo acuoso
(78.7%)
Log [ ]
g/mL
[ ]
extracto
mg/ml
Fracción n-butanol
(95.6%)
Fracción Acetato de
etilo
4.079181 30 88.1 60.8 74.4 76.6 73.4 85.5 0.602060 4 96.2 96.8 97.6 57.3 31.1 49.2
3.778151 15 60.7 68.6 52.9 49.7 58.9 58.2 0.301030 2 66.4 66.4 66.8 -0.3 -6.9 1.4
3.477121 7.5 25 35.3 27.6 38.9 55.8 47.35 0.000000 1 39.1 39.2 39.1 -28.2 -37.7 -42.4
3.176091 3.75 15.5 13.9 14.7 37.1 38.4 39.7 -0.301030 0.5 31.4 31.1 32.8 -27.9 -29.9 9.6
2.875061 1.87 5 8 7 21.9 33 30 -0.602060 0.25 28 28.3 25.7 -14.2 -21.4 -7.3
2.572872 0.935 2 1 3 0 0 0 -0.903090 0.125 14.4 17.9 24.2 -5.8 -3.1 -2.0
CI50 12.64 ± 6.52 8.46 ± 8.98 CI50 0.937 ± 0.01 NA
Acarbosa 0.80 ± 1.0
Actividad inhibitoria del extracto y fracciones de las hojas de P. manicata sobre las
enzimas digestivas α-amilasa, α-glucosidasa y lipasa pancreática.
Porcentajes de inhibición α-Amilasa
NA: No activo
Control
Liu et al., 2013, Yilmazer-Musa et al., 2012; piparo et al., 2008; Tadera et al., 2006; Lévuok, 2016; Yang et al., 2014;
Costa et al., 2015
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18. Resultados y discusión
Porcentajes de inhibición α-glucosidasa
Log [ ]
g/mL
[ ]
extracto
mg/ml
Extracto Crudo Residuo acuoso
Log [ ]
g/mL
[ ]
extracto
mg/ml
Fracción n-
butanol
(21%)
Fracción Acetato de
etilo
3.380211 12 -79.9 -63.9 -61.0 -21.9 -38.6 -24.1 2.602060 2 21.4 21.1 20.7 -4.1 -15.3 -27.2
3.079181 6 -50.9 -41.1 -61.3 -19.5 -27.4 -24.5 2.301030 1 17.8 17.9 18.1 8.8 12.5 12.0
2.778151 3 -31.0 -30.5 -31.9 -21.6 -34.8 -17.3 2.000000 0.5 14.5 29.2 13.4 -12.0 -18.1 -15.4
2.477121 1.5 -14.0 -10.0 -18.9 -27.6 -50.0 -37.4 1.698970 0.25 9.9 22.6 12.9 -18.1 -21.0 -24.3
2.176091 0.75 -26.0 -23.4 -33.4 -29.7 -51.6 -39.9 1.397940 0.125 14.6 26.7 19.8 -10.3 12.0 -3.5
1.875061 0.375 -38.9 -24.2 -36.7 -23.2 -44.0 -31.6 1.096910 0.0625 8.2 37.5 14.0 -31.5 -35.9 -38.3
CI50 NA NA CI50 BA NA
Acarbosa 104 ± 2.9
NA: No activo; BA: Baja actividad
Control
Liu et al., 2013, Yilmazer-Musa et al., 2012; piparo et al., 2008; Tadera et al., 2006; Lévuok, 2016; Yang et al., 2014; Costa et al., 2015 Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline
20. Resultados y discusión
Porcentaje de inhibición de lipasa pancreática con el extracto crudo y la fracción
n-butanol.
Mayor actividad
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21. Resultados y discusión
Correlación por el coeficiente de Pearson con las enzimas lipasa pancreática y α-amilasa.
Correlación para lipasa pancreática Correlación para α-amilasa
***Pvalor: <0.003 *Pvalor: <0.0182
(Buchholz & Melzig, 2015; Lévuok, 2016
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22. Conclusiones
Existe una mayor actividad inhibitoria en la fracción n-butanol sobre las tres enzimas digestivas,
con respecto al extracto y residuo acuoso que solo presentaron inhibición en dos enzimas (α-
amilasa y lipasa pancreática), contrario a la fracción de acetato de etilo que no presento actividad
alguna.
El mayor rendimiento, el perfil más complejo de fenoles y flavonoides junto con la cuantificación
de fenoles totales se dio en la fracción n-butanol, seguido por el extracto, el residuo acuoso y
finalmente la fracción acetato de etilo.
La correlación de Pearson determina un correlación positiva entre las dos enzimas digestivas y el
contenido fenólico, sin embargo hay mayor afinidad por la enzima lipasa pancreática que por α-
amilasa.
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23. Recomendaciones
Se requiere de una curva de concentraciones para conocer el CI50 de la fracción n-butanol
con respecto al ensayo de α-glucosidasa.
Es importante construir cinéticas enzimáticas para reconocer qué tipo de inhibidor es, si es
competitivo, acompetitivo o no competitivo.
Se recomienda continuar con nuevos estudios con el fin de conocer si se puede contribuir
con beneficios sobre estas alteraciones metabólicas.
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25. Referencias
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Referencias
Fuente: https://hiveminer.com/Tags/passifloramanicata/Timeline