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FASES DE LA PCR <ul><ul><ul><ul><li>2. FASE LINEAL </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>Los componentes de la reac...
FASES DE LA PCR <ul><ul><ul><ul><li>3. FASE HORIZONTAL </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>Corresponde al punto f...
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  1. 1. PCR EN TIEMPO REAL (Real-Time PCR) (RT-PCR) Benjamín Paz Aliaga UCSM-2004 Mientras la PCR tradicional detecta la amplificación en el punto final de la reacción con RT-PCR se detecta la amplificación mientras ocurre la reacción
  2. 5. PCR
  3. 8. KARY B MULLIS , EL DESCUBRIDOR DE LA PCR PREMIO NOBEL EN QUIMICA EN 1993
  4. 9. PCR EN TIEMPO REAL (Real-Time PCR) (RT-PCR) Benjamín Paz Aliaga UCSM-2004 Mientras la PCR tradicional detecta la amplificación en el punto final de la reacción con RT-PCR se detecta la amplificación mientras ocurre la reacción
  5. 10. LIMITACIONES DE MEDIR LA AMPLIFICACION EN EL PUNTO FINAL DE LA REACCION EN LA PCR TRADICIONAL (I) <ul><li>Los resultados que se analizan en el gel de agarosa son obtenidos del punto final de la reacción. </li></ul><ul><li>Toma mucho tiempo, algunas veces hasta varios días. </li></ul><ul><li>No es muy precisa la discriminación en cuanto al tamaño </li></ul><ul><li>El punto final de la reacción varía de muestra a muestra </li></ul>
  6. 11. LIMITACIONES DE MEDIR LA AMPLIFICACION EN EL PUNTO FINAL DE LA REACCION EN LA PCR TRADICIONAL (II) <ul><li>5. En el gel de agarosa la resolución es muy pobre, las diferencias en cuanto a la amplificación tienen que ser de más de 10 veces para poder diferenciar la intensidad de la banda; en RT-PCR se pueden diferenciar amplificaciones tan pequeñas como del doble. </li></ul>
  7. 12. REAL TIME PCR <ul><li>kinetic approach </li></ul><ul><li>early stages </li></ul><ul><li>while still linear </li></ul>www.biorad.com
  8. 15. www.biorad.com 2a. excitation filters 2b. emission filters 1. halogen tungsten lamp 4. sample plate 3. intensifier 5. ccd detector 350,000 pixels
  9. 16. FASES DE LA PCR <ul><li>LA REACCION DE AMPLIFICACION EN LA PCR TIENE 3 FASES: </li></ul><ul><ul><li>Fase exponencial </li></ul></ul><ul><ul><li>Fase lineal </li></ul></ul><ul><ul><li>Fase horizontal (plateau) </li></ul></ul>
  10. 17. FASES DE LA PCR <ul><ul><ul><ul><li>FASE EXPONENCIAL </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><ul><li>Corresponde al inicio de la reacción </li></ul></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><ul><li>En cada ciclo se dobla el producto </li></ul></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><ul><li>La eficiencia es del 100% </li></ul></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><ul><li>Es muy específica y precisa </li></ul></ul></ul></ul></ul>
  11. 18. FASES DE LA PCR <ul><ul><ul><ul><li>2. FASE LINEAL </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>Los componentes de la reacción se están consumiendo </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>La reacción se hace más lenta </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>Los productos comienzan a ser degradados </li></ul></ul></ul></ul>
  12. 19. FASES DE LA PCR <ul><ul><ul><ul><li>3. FASE HORIZONTAL </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>Corresponde al punto final </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>Es cuando se hace la detección por gel en el PCR tradicional </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>La reacción está detenida, no se forman más productos </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>Si dejamos más tiempo los productos comienzan a degradarse </li></ul></ul></ul></ul>
  13. 20. SERIES OF 10-FOLD DILUTIONS
  • deliaeugeniachoquepari

    Jun. 6, 2018

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