Présentation Etude de cas 2011

elgys
trineparib
®

LES LABORATOIRES INNOVANS

1

laboratoires lnnovans

elgys
Sommaire
1. Introduction
2. Etudes de marché
3. Développement non clinique
4. Développement clinique
5. Enregistrement
6. Pharmaco-économie
7. Production et qualité
8. Marketing 2

laboratoires lnnovans Sommaire

elgys
trineparib
®

Sonia BENCHETTO
Samy SERIDI

INTRODUCTION
3


Histoire des elgys
laboratoires Innovans

Laboratories • La
1946 La
Buissoniere
1983 buissoniere
• + Lysos

4

laboratoires lnnovans Introduction

Les laboratoires Innovans
elgys
dans le monde

5


Les Laboratoires Innovans elgys
en France

6


elgys
Nos Valeurs
Innovation

Ambition
Laboratoires Ecoute
Innovans

Diversité
7


elgys
Aires Thérapeutiques

18%
25% Oncologie
Cardiovasculaire
8% Métabolique
Vaccins
7% SNC
Vétérinaire
20%
Autres (OTC..)
12%
10%
8


en bourse
Action en % par catégorie d’actionnaire Action en % par origine géographique

France 45%

Public 83,59% Suisse 22,7%

Nestlé 13,75% Etats-Unis 14%

Reste du monde
Salariés 1,5% 5,9%
Reste de l'Europe
Autocontrôle 4,8%
1,16% Royaume-Uni
4,5%
Allemagne 3,1%

9


en bourse
Evolution du prix des actions des laboratoires Evolution du prix des actions des laboratoires
Innovans au CAC 40 pour 2010 Innovans au NYSE pour 2010

10


elgys
Actions caritatives

• Leurs missions :
• Recherche
• Prévention

• Nos actions :
• Don de 400000$ / an
• Campagnes
d’informations
11


elgys
Actions Caritatives
• Leurs missions :
• Protection de l’enfant
• Education
• Lutte contre le SIDA

• Nos actions :
• Don de 300000$ / an
• Intervention dans les
situations d’urgence
12


elgys
Développement Elgys®

2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011

Dépôt
brevet
Essais précliniques Phases I/II Phase III Pharmacovigilance

Brevet Elgys®

AMM

CEPS
HAS

13


Présidente
Sonia BENCHETTO

Directeur Europe
Samy SERIDI

Directeur
Directeur Financier Pharmacien Responsable
Environnemental
Guillaume Minnaert Catherine Tran
Guillaume Deladalle

R&D AQ/CQ DARG Directeur Business
Production Unit Europe Oncologie
Rosita Eghbali (PDR) Christophe
Conception Clément Daubisse Dommange
Synthèse AQ Enregistrements
Nicolas Lesage Catherine Tran (CP) Céline Laporie (CP)
Hélène Caignault Pierre Boutin Pharmacovigilance
Pharmaco-économie Etude de Marché
Marketing Ventes
Lucie Chasse Caroline Ducret Développement Claire Colpin (CP)
Valentin Moingeon (CP) Harishankar Haritharan
Christophe Dommange Valentine Brouard
Clément Rattier Jean-François Liquière
Développement Keltouma Chebah Hajer Louiti Clinique Pauline Renvoise
Bertrand Paradis Laura Serfati
(cp) Priscille Jacques

Analytique Aziza Hajjaj Magali Lutton Chloé Bost (CP)
Anissa Yousnadj (CP) Kamélia Kessal Susan Yuen Selima Azzouz
Renan Coulon Stratégie
Keltouma Chebah Sara Khezami Christophe Dommange
Marie Dorine Yanga Marie Dorine Yanga Alia Djeraba Thibault Wautier

Anissa Yousnadj Emmanuelle
DAP Makhoul
Stephano Elyas (CP) Héloïse Mignot Opérationnel
Anna Landreau
Pharmacologie Jonathan Cohen Rana Omeish Hocine Lourdani
Marine Meron (CP) CQ Sami Himeur
Abel Check Charles Foenkinos Danièle Kanaan
Lotfi Lekmiti Pauline Larcher
Publicité &
Michel Vandenberghe Communication
Ouided Mnafakh Sonia Benchetto
Samy Seridi
Laura Rocuet
Emmanuel Thibeaud
Toxicologie
Flavie Darcet (CP)
Hélène Clabault
Caroline Crambes
Clélia Florence
Cathy Ignacmouttou
Raphaelle Leclere

Galénique
Pauline Leveleux (CP)
Céline Berard
Céline Camizuli
Marie Hélène Ly

elgys
trineparib
®

Marine MERON
Michel VANDENBERGHE

PARP - IPARP
15


elgys
Qu’est ce que PARP?

 Poly(ADP-ribose) polymérase
 La famille des PARP

 PARP 1 et 2 sont impliquées dans la
réparation de l'ADN

16

laboratoires lnnovans PARP

elgys
PARP - Structure

Domaine de liaison à l'ADN
 Domaine d'automodification
 Domaine catalytique

17

08/12/2010 laboratoires lnnovans PARP

elgys
PARP – Activité enzymatique

 Consommation de NAD+
 Polymérisation sur les protéines acceptrices (histones, XRCC1...)

18


elgys
PARP –Mécanisme d’action

Amé, Spenlehauer & de Murcia, BioEssays (2004) 26, 882-893 19


Les IPARPs – elgys
Mécanisme d’action

Amé, Spenlehauer & de Murcia, BioEssays (2004) 26, 882-893 20


elgys
Les IPARPs – Pourquoi ?

Trineparib
21
NAD

elgys
Les IPARPs – Double intérêt

En association

Inhibiteur PARP: adjuvant de traitements génotoxiques
(médicaments à base de sels de platine ou
Gemcitabine)

SYNERGIE

22


elgys
Les IPARPs – Pourquoi ?

23


elgys
trineparib
®

TRINEPARIB
24


elgys
Vue d’ensemble

• Modélisation réalisée avec Jordi RODRIGO (D3 bureau 421) 25

08/12/2010 laboratoires lnnovans Trineparib

elgys
Vue rapprochée

• Modélisation réalisée avec Jordi RODRIGO (D3 bureau 421) 26


Liaisons H et elgys
interactions avec le récepteur

• Modélisé avec Jordi RODRIGO (tour D3 bureau 421) 27


elgys
Sommaire
1. Introduction
5. Enregistrement
8. Marketing 28


elgys
trineparib
®

Harishankar HARITHARAN
Jean-François LIQUIERE
Laura SERFATI

ÉTUDES DE MARCHÉ
29

laboratoires lnnovans Études de marché

Les cancers du sein elgys
triple négatif (TNBC)

• Ne surexpriment pas les récepteurs
hormonaux (RP- et RE-) ou le bio marqueur
HER2.

• TNBC représentent 10-14% des cancers du
sein.

• 11% des TNBC sont BRCA 1 ou 2 mutés.

• Pronostic lourd : Métastases
osseuses, pulmonaires ou hépatiques.

30


elgys
Diagnostic
• L'examen clinique est essentiel; Il
donne la description de la
tumeur, la taille, la mobilité, la
topographie

• L’imagerie
- Mammographie bilatérale établit
la classification BI-RADS (Breast
Imaging reporting and data
system)
- Si facteur de risque : l'IRM du sein

31


elgys
Diagnostic : Le test BRCA

• Uniquement utilisé chez les personnes à risque et imposé
pour Elgys.

• Test génétique qui met en évidence la présence ou l'absence
d'une mutation génétique prédisposant à TNBC

• Un conseil génétique est généralement recommandé avant et
après les tests génétiques et évalue le risque posé par un
patient de développer un TNBC.
32


Epidémiologie du elgys
cancer du sein en 2008
Incidence et mortalité liée au cancer du
2008 sein
350000 332670
Cas de cancer
Décès % décès
du sein
300000

USA 182460 40481 22% 250000

200000 182460
UE(27) 332670 89801 27% Cas de cancer du sein

150000 Cas de mortalité lié au
cancer du sein

France 51012 11773 23% 100000 89801

51012
50000 40481
11773
Source: http://globocan.iarc.fr/
0
USA UE(27) France 33


Répartition des cas de
elgys
cancer du sein en 2008 selon l’âge
Répartition des cas de cancer du sein en 2008
Cas de cancer du sein selon l'âge
200000
185931
180000
< 65ans ≥ 65ans
160000
146739
140000
USA 104755 77705
120000
104755
100000 Cas de cancer < 65ans
UE(27) 185931 146739 77705 Cas de cancer ≥ 65ans
80000

60000

France 30412 20600 40000 30412
20600
20000

Source: http://globocan.iarc.fr/
0
USA UE(27) France 34


Épidémiologie des elgys
TNBC BRCA-mutés

Globalement selon les dernières études épidémiologiques,
on peut retenir que :

• 14% des cancers du sein sont des TNBC

• 11% des TNBC sont BRCA-mutés

35


Prévision de l’évolution
elgys
des TNBC BRCA-mutés
7000

5730
6000

5124
5237
5289
5503
Evolution
Nombre de cas BRCA-mutés diagnostiqués

5000 prévue
4000
3146
3395 USA USA + 1,7%/an
2905 2956 UE(27)
2810
3000 France
UE (27) + 1,3%/an
2000

806 825 857 895
France + 1,2%/an
1000 701

0
2008 2010 2011 2014 2018 36


Prise en Charge du cancer
elgys
du sein triple négatif
1er ligne métastatique 2ème ligne métastatique
• Taxanes • Sels de platine
• Antracyclines • Capécitabine
• Sels de platine • Bevacizumab

Association : Association :
• Antracyclines + Taxane • Bevacizumab + Docetaxel
• Cisplatine + 5FU • Cisplatine + Cyclophophamide
• Ciplatine + Ifosfamide • Cisplatine + Ifosfamide + Vinorelbine
• Cisplatine + Gemcitabine • Carboplatine + Ifosfamide +Bevacizumab
• Carboplatine + Ifosfamide
• Paclitaxel + Gemcitabine

37


Spécialités Avantages Inconvénients Prix par unité
Cisplatine 1mg/ml • Mécanisme d’action en • Néphrotoxicité très importante elgys
Sol diluée p perf
Fl 10ml  3€
(CIPLATYL®) adéquation avec les iPARP • Ne passe pas la BHE
Fl 50ml 6€

Carboplatine Passage de la BHE 4x moins puissant que le Sol p perf
10mg/ml Prise en charge à domicile Cisplatine Fl 15ml 116,97€
Fl 45ml  299€
(PARAPLATINE®) possible Fortement immunosuppresseur

Gemcitabine Bonne tolérance, facilement Forte toxicité rénale, en association Pdre p sol perf
38 mg/ml associée avec d’autres avec le Cisplatine Fl 200mg21.52€
(GEMZAR®) anticancéreux Toxicité hématologie Fl 1000mg102.91€

Docetaxel 20mg/ml indication en 1erligne Mécanisme d’action inadéquate avec Sol diluée p perf
(TAXOTERE®) métastastique les iPARP Fl 7ml (20mg/ml) 174,6€
Fl 7ml (80mg/4ml) 679€

Bevacizumab 25mg/ml Efficacité importante en Prix élevé (100.000€/ année de vie Sol diluée p perf
(AVASTIN®) association avec les taxanes gagné) Fl 4ml  349 €
Rapport bénéfice risque pas toujours Fl 16ml  1280€
positif en association avec d’autres
anticancéreux

Trinéparib • Efficacité supérieure aux Prix élevé Boite de 28 cp LP 2925,133€
(ELGYS®) autres associations 1cp 700mg LP  104 ,47€

thérapeutiques
Unique dans sa classe

Efficacité clinique
Médiane de survie Médiane de survie Prix de chaque thérapie
sans progression globale (p < 0,05) Par cycle.
elgys
(p < 0,05) Par cout total journalier CTJ.
Protocole utilisé

Gemcitabine1000mg/m2 J1, J8 564.5€/cycle  26.8€/Jour
Carboplatine AUC 2 à J1, J8 3,6 mois 7,7 mois
J1=J21

Gemcitabine 1250 mg/m2 J1, J8 673.9€/cycle48.1€/Jour
Carboplatine AUC 2,5 J1 4.3 mois 10,3mois
J1=J14 (8cycles)

Gemcitabine 1250 mg/m2 J1, J8 852€/cycle 60.8€/Jour
+ Paclitaxel 75 mg/m2 J1, J8 4.8 mois 11mois
J1=J14 (8cycles)

Cisplatine 50 mg/m2 J2, J3 206€/cycle 9.8€/Jour
+ Ifosfamide 1500 mg/m2 J1 à J3 5 mois 11mois
J1=J214 (2-7) cycles N=112

Irinotecan 100mg/m2 J1, J8,J15,J21 5650.29€/cycle 201.7€/Jour
Carboplatine AUC=2,5 J1, J8, J15,J21 Nc 11,2 mois
Cetuximab 400mg/m2 J1, puis 250mg J8, J15, J21
J1=J2 N=39

Gemcitabine1000mg/m2 J1, J8 2968,97€/cycle 141,37€/Jour
Carboplatine AUC 2 à J1, j8 8,7 mois 14 mois
Trineparib 700mg/jour J1à J21 J1=J21

elgys
Etude AD HOC
• Quels sont les principaux traitements utilisés en 1er ligne dans le cancer du
sein métastasique triple négatif ?

• Comment les patients réagissent-ils vis-à-vis de la chimiothérapie ?

• Quelles sont les recommandations actuelles dans la prise en charge des
cancers du sein TN ?

• Que pensez-vous de l’association Carboplatine + Gemcitabine avec
l’inhibiteur PARP ?

• Que pensez-vous de l’utilisation des inhibiteurs PARP dans d’autres types
de cancer ?
40


elgys
Conclusion

En vue du lancement d’Elgys® le 1eravril 2011 en
France, l’estimation du nombre de patients au
diagnostic est de :

1. 825 patients BRCA-mutés sur …
2. … 7414 cas de TNBC pour …
3. … 52954 cas de cancer du sein.
41


elgys
Sommaire
1. Introduction
5. Enregistrement
8. Marketing 42


elgys
trineparib
®

Nicolas LESAGE

SYNTHESE
43


elgys
Réaction de Friedel-Crafts
O
Cl F
Cl 1 : AlCl3 O
+ 1h, 0°C ; 1h, 20°C
HO2C
Cl
F 2 : H2O, 0°C
(86%)
HO2C

• Substitution électrophile aromatique
• Acylation
• Réactif :
• un halogénure d'acyle
• un composé aromatique
• un acide de Lewis
• Aucun solvant
• Etape principale : formation d’un ion acylium 44

laboratoires lnnovans Synthèse

Incorporation d’un elgys
réactif asymétrique
F O
Cl
HO2C SR
Ti(OEt)4 F O N
+ THF Cl
48h, reflux HO2C
O
(73%)
H2N S
R

• Introduction d’un groupement chiral
• Deux étapes successives :
• Addition nucléophile
• Déshydratation
45


Réduction elgys
asymétrique et cyclisation

SR SR
F
F O N 1.1 equiv LiBEt3H O
N
Cl THF, 0°C, 1h puis rt, 20h HO2C S
HO2C
(87%)

• Réduction asymétrique permit par :
• Groupement (Rs)N-Tert-butanesulfinyl
• Triéthylborohydrure de Lithium (ou superhydrure)
• Cyclisation :
• Substitution nucléophile (SN2)
• formation d'un noyau pyrrolidine
• Résultat :
• Excès énantiomérique
• solide incolore 46


Clivage du elgys
groupement sulfinyle chiral

SR 10 equiv dioxane.HCl F
H .HCl
F dioxane, rt, 1h N
O
N HO2C S

HO2C S

(87%)

• Acide chlorhydrique : protone la
sulfinylpyrrolidine
• libère la fonction amine
• régénère acide sulfinique chiral
• Dioxane : Agent complexant
• Stabilise le cation 47


Synthèse de elgys
l’hétérocycle benzimidazole
O NH2
F
H .HCl
HO N NH2
S + 135°C
O
NH2

O NH2 O NH2
F
H .HCl
NH N NH2 F
S OU H .HCl
O N
O S
NH 2 NH

O NH2
F
H .HCl
N N
S
48
N
H
(91%)


elgys
Cristallisation

• 3 formes cristallines identifiées
• Obtention de la forme « optimale » :
• Cristallisation par un mélange acétone / eau
• Température et pression ambiantes
• 99% de pureté

49


elgys
Optimisation de la synthèse
• Remplacement du THF par le n-octyl
tetrahydrofurfuryl éther
• Etape 2 : Incorporation d’un réactif asymétrique
• Etape 3 : Réduction asymétrique et cyclisation

• Purifications intermédiaires
• Fin de la 3ème étape
• Réduction des impuretés
• Meilleur contrôle des réactions
50


elgys
Bilan
• 5 étapes et 2 recristallisation :
• 43% de rendement total
• Pureté énantiomérique de plus de 99%
• Optimisée vers une chimie verte :
• Réaction sans solvant
• Utilisation de solvant moins toxique
• Transposable à l’échelle industrielle
51


elgys
trineparib
®

Keltouma CHEBAH
Marie Dorine YANGA
Anissa YOUSNADJ

DÉVELOPPEMENT
ANALYTIQUE
52


elgys
Identification (1/5)
Informations générales
 Nomenclature:
Masse moléculaire : 324,36 g/mol
Nom de code : A-966492
Nom chimique : (s)-2-(2-fluoro-4-(pyrrolidin-2-
yl)phenyl)-1H-benzimidazole-4-carboxamide.
53

laboratoires lnnovans Développement Analytique

elgys
 Propriétés générales:
Poudre cristalline blanche, hygroscopique, soluble dans l’eau à 65% et
peu soluble dans le
chlorure de méthylène. Sa solubilité est PH-dépendante et augmente
à PH acide.

Densité : 1.335 g/cm3 Log P : 2.26

PKa : 9.33 à 9.80 Solubilité : 64g/L

Pouvoir rotatoire *α+589 : - 6,8 (C= 0,7 dans le méthanol)
54


elgys
• Développement – Élucidation structurale
RMN ¹H
Analyse Spectrométrie Réaction
FT - IR RMN ¹³C Rayons X UV
centésimale de masse des chlorures
RMN 19F
< 0.4 % Groupements MM = 342 g/mol Env. chimique Chlorhydrate 3 formes λ max = 345 nm
fonctionnels cristallines

,HCl

• En routine
En routine : • FT – IR
55
• Réaction des chlorures


elgys
Spectres RMN
RMN ¹H RMN ¹³C

56


elgys

TR =
FT - IR HPLC/UV 13.1min

Principe fini

57


elgys
Essais et titrage

ICH Q3 (R4)

Ph.eur. 7.1.

Essai 2.4.14 Essai 2.4.8

Cendres sulfuriques Métaux lourds Solvants résiduels

<1% SAA Classe 3 : Faible potentiel toxique
Procédures analytiques :
• En développement → CPG
Essai des métaux lourds • En routine → perte à dessiccation
→ < 0.5 %

Conformes aux spécifications 58


elgys
Profil d’impuretés et titrage

HPLC – UV

• Détection, Résolution (Tr), %
Profil d’impuretés • PA (ICH Q3A) et PF (ICH Q3B)

• PA
Titrage • PF

• Etudes de stabilité
Applications • Etudes de pharmacocinétique
59
• Contamination des surfaces…


elgys
Profil d’impuretés
Démarche

Enumération et
classification
HPLC –barrette de
diodes –Tandem mass

Conditions optimales

HPLC - UV

Impuretés : Tr et %

60


elgys
Profil d’impuretés : PA (ICHQ3A)
Impureté Tr Tr relatif Teneur % Identification Qualification
(min) > 0,10% > 0,15%
Brut Déclarée

A 5,4 0,4 0,083 0,09 Non Non
B 10,8 0,8 0,009 0,01 Non Non
C 16,2 1,2 0,065 0,06 Non Non
D 20,2 1,5 0,014 0,01 Non Non
E 25,0 1,9 0,026 0,03 Non Non
Autres 0,071 0,07
Total 0,268 0,27
61


elgys
Profil d’impuretés : Identification

Facteurs de réponse?

Séparation / HPLC Préparative

Elucidation structurale

Synthèse

Propriétés d’absorption

Rf → F
62


elgys
Profil d’impuretés : Facteurs de correction
HO NH2
O NH2 O NH2
F F
H H .HCl
N N N
NH2 F NH S
H S
O N N
S
O
NH NH2

Impureté B : 1,05
Impuretés A et A’ : 1,2

O OH
O F F
H SR
N N H .HCl H
N N F O S N
S
S
N Cl
N HO2C
NH 2

Impureté C : 1,25 Impureté D : 1,02 Impureté E : 1,3
63


elgys
Profil d’impuretés : spécifications
Impureté Tr Tr relatif Facteur de Teneur limite
(min) correction (%)
A et A’ 5,4 0,4 1,2 0,096
B 10,8 0,8 1,05 0,009
C 16,2 1,2 1,25 0,081
D 20,2 1,5 1,02 0,014
E 25,0 1,9 1,3 0,034
Autres <0,07
Total 0,307
64


elgys
Titrage

• HPLC en phase inverse, détection UV, mode gradient

• Principe actif
• Rapport des aires
• 98 et 102%

• Produit fini
• Courbe d’étalonnage
• 95 à 105%
65


elgys
Pureté optique

Polarimétrie
• λ= 589 nm

• Spécifications :
• S > 90 %
- 6,8 < *α+589< -5,4
• R < 10%
66


elgys
Stabilité
• Cadre réglementaire: ICH => Q1A et Q1B
(International Conference on Harmonisation)

• Etude de stabilité du Trineparib:
• stress
• accéléré et à long terme
• Etude de stabilité d’Elgys®:
• accéléré et à long terme
• Paramètres suivis:
• couleur, pH de la solution, cristallinité, pouvoir rotatoire
• temps de dissolution, désagrégation, titre , impuretés
• Conditionnement: 67
• conditionnement primaire prévu pour la commercialisation

elgys
Stabilité Trineparib
Essais de stress

• Dégrader avec certitude le Trineparib
•Voies de dégradation:
•hydrolyse acide
•hydrolyse basique
•oxydation
•photodégradation
•Validation des méthodes:
• HPLC couplée à un UV-Tandem mass en développement
analytique
• HPLC couplée à l’UV en contrôle de routine 68


elgys
Stabilité Trineparib
Essais accélérés et à long terme

• 3 lots pilotes: 17kg/lot
• Evaluation des caractéristiques :
• chimiques : racémisation
• physiques : polymorphisme
• Conditions de stockage:
• essais accélérés: 40°C±2°C, 75% HR±5%HR. Durée: 6mois
• Essais à long terme: 25°C±2°C, 60%HR±5%HR. Durée: 24mois

• Période de recontrôle: 12 mois
69


elgys
Stabilité d’Elgys®

Essais accélérés et à long terme

• 3 lots pilotes:25000 comprimés/lot
• Evaluation des caractéristiques :
• pharmacotechniques: temps de dissolution, désagrégation
• chimiques: racémisation

• Conditions de stockage:
• essais accélérés: 40°C±2°C, 75% HR±5%HR. Durée: 6mois
• essais à long terme: 25°C±2°C, 60%HR±5%HR. Durée: 24mois 70


elgys
Stabilité d’Elgys®

Durée de conservation

•Aucun paramètre ne sort des spécifications
prédéfinies:
Trineparib et Elgys ® stable après 6 mois d’essais accélérés
et 24 mois d’essais à long terme

•Durée de conservation extrapolée à 36 mois
71


elgys
trineparib
®

Abel CHECK
Marine MERON
Michel VANDENBERGHE

PHARMACOLOGIE
72


elgys
Plan
• Pharmacologie in vitro

• Pharmacologie in vivo

• Pharmacocinétique
73

laboratoires lnnovans Pharmacologie

elgys
PHARMACOLOGIE IN VITRO
•Affinité du Trineparib pour les enzymes PARPs.
•Objectif:
•Déterminer la capacité du Trineparib à inhiber PARP.
•Sélectivité du Trineparib.
•Objectif:
•Déterminer la sélectivité d’action de Trineparib sur PARP-1 et 2.
•Activité de Trineparib.
•Objectif:
•Déterminer la capacité du Trineparib à inhiber toute prolifération cellulaire
tumorale seul et en association avec le carboplatine.
•Comparer son activité à un autre inhibiteur PARP, le 3-aminobenzamide.
74


elgys
Affinité du Trineparib
• Déterminer la capacité du Trineparib à inhiber PARP.
• Résultats:

IC50= 0,002 µM pour un Ki= 1 nM.
75


elgys
Sélectivité du Trineparib
• Déterminer la sélectivité d’action de Trineparib sur les enzymes
PARP-1 et 2.
• Résultats:
PARP-1 PARP-2 PARP-3 V-PARP PARP-5 PARP-6 TANK

Ki = 0,001 µM Ki = 0,003 µM Ki = 0,06 µM Ki = 0,2 µM Ki = 0,09 µM Ki = 0,4 µM Ki = 0,6 µM

Forte sélectivité pour PARP-1 et PARP-2.

76


elgys
Activité de Trineparib
• Comparaison Trineparib vs 3-aminobenzamide sur l’inhibition de la
prolifération des cellules tumorales.
• Résultats:

Conc eff: 0,7 µM et IC50= 0,08 µM pour Trinéparib. 77


elgys
Activité de Trineparib
• Déterminer la capacité du Trineparib à induire la mort cellulaire en
administration seul VS associé au carboplatine.
• Resultats:

Meilleure activité du Trineparib quand associé au carboplatine.
78


elgys
PHARMACOLOGIE IN VIVO

• Administrations répétées

• Effet du Trineparib seul sur la croissance tumorale

• Potentialisation de l’effet d’un cytotoxique alkylant par le
Trineparib

79


elgys
Effet du Trineparib seul sur la croissance tumorale

80


elgys
Potentialisation de l’effet d’un cytotoxique alkylant par le
Trineparib

81


elgys
Conclusion

• Le Trineparib est efficace dans un modèle animal de cancer du
sein triple négatif BRCA-1 muté (souris MX1)
• Potentialisation d’un agent alkylant, le carboplatine, pour
l’inhibition de la croissance tumorale
• Dose efficace: 10 mg/kg/jour par voie orale
(Soit 3.6 mg/kg/jour en IV chez la souris)

82


elgys
PHARMACOCINETIQUE
Objectifs
• Etudier le devenir du principe actif dans l'organisme:
• Absorption
• Distribution
• Métabolisation
• Elimination
• Orienter vers une voie d'administration.
• Déterminer un schéma thérapeutique chez l'animal.
• Confirmer l'intérêt du développement du Trineparib.
83


elgys
PHARMACOCINETIQUE
Absorption
• Biodisponibilité par voie orale chez l'animal :

Souris MX-1 Rat Chien
Biodisponibilité 37% 54% 72%

• Biodisponibilité compatible avec une voie orale.
• Grande variabilité inter espèce
Nécessité d'études chez l'Homme pour confirmation.
84


elgys
PHARMACOCINETIQUE
Distribution
• Accumulation dans: Intestin, foie, graisses, poumons, cœur.

Distribution du Trineparib dans la tumeur après injection IV.
85


elgys
PHARMACOCINETIQUE
Métabolisation

86


elgys
PHARMACOCINETIQUE
Élimination

Urine Fèces Total
Rat 36% 57% 94%
Chien 35% 62% 92%

Élimination majoritaire dans les fèces sous forme inchangée.

87


elgys
PHARMACOCINETIQUE

Conclusion

• Orientation vers une voie d'administration orale.
• Bonne distribution dans la tumeur.
• Pas d'interactions médicamenteuses à prévoir.
• Demi-vie faible, forme à libération prolongée ?

88


elgys
trineparib
®

Hélène CLABAULT
Caroline CRAMBES
Clélia FLORENCE
Cathy IGNACIMOUTTOU

TOXICOLOGIE
89


elgys
Plan
• Etude de toxicité unique
• Etude de toxicité réitérée
• Etude sur la toxicité de la reproduction
• Etudes de génotoxicité et cancérogénèse
• Toxicocinétique

• Etudes complémentaires :
• Immunotoxicité
• Phototoxicité 90

laboratoires lnnovans Toxicologie

elgys
Etude de toxicité unique
• Rats Sprague-Dawley (voie orale)

Dose voie orale Témoin 5 205 405 605 805 1005
(mg/kg)
Mortalité % 0 0 0 0 0 0 5

• Dose maximale non létale : 805 mg/kg
• Dose minimale létale : 1005 mg/kg
91


elgys
Stratégie des études réitérées
 Durée des essais :

 Subaigue : 15 jours avec Trineparib seul
 Subchronique : 1 mois avec Trineparib seul
 Chronique : 6 mois avec Trineparib seul
 Chronique : 6 mois: association Trineparib/Carboplatine/Gemcitabine

 Espèces et doses utilisées :

 Rats Sprague-Dawley : 0 (témoin), 5, 130, 250 mg/kg
 Chiens Beagle : 0 (témoin), 4, 115, 225 mg/kg

Utilisation exclusive de femelles quelle que soit l’espèce
92


elgys
Résultats étude Trineparib seul
Doses Effets observés (rat)
(mg/kg)

Lot témoin Aucun effet observé

5 Aucun effet observé

130 EC : ↓ de la prise alimentaire
EB : ↑ ALAT, ASAT
• Étude 6 mois
EA : inflammation de la muqueuse intestinale • EC : examen clinique
250 EC : perte de poids (↓ de + de 10% du gain
poids) • EB : examen biologique
EB :
 ↑ ALAT et ASAT
• EA : examen
↓ diurèse anatomopathologique
Leucopénie, thrombopénie et anémie
légères
EA: ulcération de la muqueuse intestinale
93


elgys
Résultats :
Rat

DMT 180 mg/kg

Système digestif
Lignées hématologiques
Organes cibles
Foie et rein

Réversibilité Oui

NOAEL 50 mg/kg
(No Observed Adverse Effect Level)
LOAEL 70 mg/kg
(Lowest Observed Adverse Effect Level)
Dose réponse oui
94


elgys
Association
Trineparib/Carboplatine/Gemcitabine
• Etude sur 6 mois

• Schéma thérapeutique chez l’Homme

• Effets chimiothérapie seule sur le rat :
• Thrombopénie, leucopénie, anémie
• ↓ prise alimentaire, perte poids et perte poils
• ↑ transaminases
• Atteinte rénale
95


elgys
Association
Trineparib/Carboplatine/Gemcitabine
Doses Effets observés
Lot témoin: Effet de la chimiothérapie
10 mg/kg carboplatine +
20 mg/kg gemcitabine

5 mg/kg Trineparib + Idem lot témoin
chimiothérapie
130 mg/kg Trineparib + EC: ↑ légère diarrhée
chimiothérapie EB : ↑ neutropénie
EC: ↑ diarrhées
EB :
250 mg/kg Trineparib +  ↑ légère ASAT et ALAT
chimiothérapie  ↑ légère leucopénie, thrombopénie et anémie

96
EA: ↑ légère déplétion médullaire


elgys
Première dose à l’Homme
 Rat : espèce la plus sensible
 NOAEL (rat): 50 mg/kg

 HED = 8 mg/kg chez l’adulte

 MRSD = 0,80 mg/kg soit 50 mg par jour

HED : Human Equivalent Dose; MRSD: Maximum Recommanded Starting Dose 97


elgys
Etude de reprotoxicité
• Etapes de la reproduction : 3 segments

• Segment 2 : embryotoxicité, foetotoxicité et tératogénèse
• Association du Trineparib/Carboplatine/Gemcitabine
• Carboplatine : contre-indiqué pour la grossesse
→ le Trineparib : pas utilisé en cas de grossesse 98


elgys
Etude Segment 2
Objectifs :
Mettre en évidence les effets toxiques dus au Trineparib sur l’embryon, le
fœtus et la découverte de malformations.
Résultats : durant l’étude
Chez les rattes : Chez les lapines :

Poids corporel et Diminution de gain de masse pondérale des femelles
consommation alimentaire: traitées.
Diminution significative de la prise de nourriture .
Mortalité: Une femelle dans le groupe Aucun décès
témoin est décédée
Examen en cage: Femelle décédée était Légère agitation chez 2
prostrée femelles dans le groupe à
dose maximale 99


elgys
Examen final
Chez les rattes : Chez les lapines :
Examen RAS (Rien à signaler) RAS
macroscopique
Examen placentaire RAS RAS
Examen ovaires et La femelle décédée a fait une RAS
utérus grossesse extra-utérine.
Examen externe des Retard de développement et
fœtus RAS diminution de poids chez deux
fœtus sur 245 à la dose la plus
élevée.
Examen Léger retard de développement
squelettique et RAS squelettique chez ces deux mêmes
viscéral des fœtus fœtus. 100


elgys
Conclusion Reprotoxicité
• Trineparib ne s’est pas révélé tératogène
• Malgré l’emploi de doses très élevées
• A la fois chez le rat et le lapin

101


elgys
Etude de Génotoxicité
•Objectif: Détecter et évaluer le potentiel mutagène de notre molécule

• Menées avant la phase 1 des essais cliniques.

• Evaluation de la génotoxicité du Trineparib par une batterie standard de 3
tests:
-Un test de mutation génique sur bactéries ou test d’Ames
-Un test de mutation chromosomique in vitro sur cellules de
mammifère
-Un test de mutation chromosomique in vivo: test des micronoyaux

102


elgys
Test d’Ames
Objectif: Evaluer la capacité du Trineparib à induire des mutations
ponctuelles chez différentes souches de bactéries
Nombre de colonies révertantes
Molécules Dose
Activation métabolique TA98 TA100 TA1535 TA1537 WP2uvA
testées (µg/mL)
Avec activation DMSO 100µL/boîte 15 ± 6 94 ± 1 9±2 5±2 20 ± 4
(S9 mix) Trineparib 0,1 15 ± 4 94 ± 8 10 ± 3 5±0 19 ± 2
1000 19 ± 4 93 ± 5 11 ± 8 8±3 18 ± 3

Témoin positif 2,5/10 1577 1498 210 80 380

Sans activation DMSO 100µL/boîte 16 ± 2 93 ± 2 8±2 7±1 17 ± 4
Trineparib 0,1 15 ± 4 93 ± 4 9±4 6±2 16 ± 5
1000 20 ± 4 99 ± 3 12 ± 5 9±3 15 ± 3
Témoins
2 505 562 438 813 722
positifs

Résultats: pas de potentiel mutagène observé
103


Test in vitro elgys
d’aberrations chromosomiques
Objectif: Evaluer l’éventuelle capacité du Trineparib à induire des aberrations
chromosomiques structurales dans des cultures cellulaires de lymphocytes
humains.
Molécule testée Concentration Index mitotique Nombre de cellules
(µg/mL) (% du contrôle) aberrantes

DMSO 10 µL/mL 12.3 ± 0.4 2.0 ± 0.6

Trineparib 50 11.6 ± 0.2 3.0 ± 0.5
500 10.5 ± 0.2 3.7 ± 0.4
5000 10.0 ± 0.2 4.1 ± 0.5
Cyclophosphamide 4 7.7 ± 0.3** 37 ± 1.9**

Résultats: Pas d’induction d’aberrations chromosomiques dans les cellules de
mammifères utilisées.
104


Test des micronoyaux
elgys
in vivo
Objectif: Mettre en évidence un éventuel effet clastogène/aneugène du
Trineparib → formation de micronoyaux

% érythrocytes % éythrocytes
Molécule Dose (mg/kg)
observés micronucléés
Véhicule 180 mg 51 ± 1.3 0.18 ± 0.15

Trineparib 5 54 ± 2.7 0.19 ± 0.10

90 52 ± 3.3 0.13 ± 0.12

180 53 ± 2.7 0.14 ± 0.16

Cyclophosphamide 7 52 ± 2.5 2.60 ± 0.24**

Résultats: Pas d’induction de la formation de micronoyaux dans les
érythrocytes de rat.
105


elgys
Etudes de cancérogénèse
• Objectif:
Identifier le potentiel carcinogène du Trineparib

• Etudes requises:
- Etude long terme (24 mois) chez le rat Sprague-Dawley
- Etude long terme chez une autre espèce de rongeur, la souris CD1

• Débutent en cours de phase 3.

• Soumission après l’obtention de l’AMM.

• Résultats obtenus: Pas de potentiel carcinogène mis en évidence.
106


elgys
Toxicocinétique
• Réalisée durant les études de :
• toxicité par administration réitérée
• toxicité sur les fonctions de reproduction
• cancérogénèse

• Résultats:
• cinétique du Trineparib linéaire
• pas de phénomène d’inhibition enzymatique
• pas de phénomène d’induction enzymatique 107


elgys
Autres études

• Immunotoxicité Trineparib seul
• Standard Toxicity Studies 28 jours
Non immunotoxique

• Phototoxicité
• 2 tests in vitro
Non phototoxique
108


elgys
Conclusion générale

• Passage en développement clinique
non remis en cause

• Vigilance requise
Association Trineparib/Carboplatine/Gemcitabine

109


elgys
trineparib
®

Flavie DARCET
Raphaëlle LECLERE

PHARMACOLOGIE DE
SÉCURITÉ
110


elgys
Etudes menées sur le Trineparib
• Core Battery : ICH S7
• Système cardiovasculaire
• Système nerveux central
• Système respiratoire

• Etudes complémentaires :
• Système gastro-intestinal
• Système rénal
111

laboratoires lnnovans Pharmacologie de Sécurité

Core Battery : elgys
Système Cardiovasculaire (1)
Etude in vitro sur des fibres de Purkinje de chien:
Objectif
• Identifier le risque potentiel pour le Trineparib d’allonger l’espace QT

Résultats
Produits Durée du potentiel d’action
Véhicule 258,6 ± 21,0 ms
Cisapride 0,1 μM Allongement de 163 ms
Trineparib 2 – 20 - 200 μM Pas d’allongement
Trineparib 2000 μM Allongement de 25 ms

Conclusion
• le Trineparib n’entraine pas de défaut de repolarisation
112


Etude in vitro : « Voltage clamp assay »
Objectif
• Mesurer la puissance inhibitrice du Trineparib sur les canaux
potassiques hERG

Modèle et doses
• Cellules rénales embryonnaires exprimant hERG
• Doses: 1 – 10 – 100 – 1 000 – 10 000 mM

Résultats
•Inhibition des canaux hERG pour une concentration de : 10 000 mM
•Pas d’action du Trineparib sur les canaux hERG aux doses efficaces
113


Etude in vivo: Etude télémétrique chez le chien
Répartition des lots
Type de groupe Nombre de chiens Administration
Contrôle négatif 1 Placebo
Dose efficace 1 Trineparib 4 mg/kg
Dose intermédiaire 1 Trineparib 90 mg/kg
Dose maximale tolérable 1 Trineparib 190 mg/kg

Résultats
• Absence d’effet significatif sur:
• la fréquence cardiaque
• la durée des intervalles PQ, QRS et QT
• la pression artérielle 114


Système nerveux central (SNC) (1)
Objectif
• Détecter les effets potentiels du Trineparib sur le SNC

Méthode
• Irwin test chez le rat Sprague-Dawley conscient
• Dose unique par voie orale

Evaluation et paramètres observés
• Fonctions autonome et comportementale
• Activité locomotrice, réflexes sensoriels et moteurs
• Température rectale
• Observations à t=15’, 30’, 60’, 120’, 180’puis 24h en cage/après stimulation
115


Système nerveux central (2)
Résultats

Trineparib (mg/kg) par voie orale
5 90 180

Réactivité au toucher diminuée
Rats Pas de (1/ 3) à 24h
Pas de modification
femelles modification
Défécation/Diarrhées (1/3) à 24h

Conclusion

• Rares effets non spécifiques observés à la plus haute dose testée
• Pas de toxicité sur le SNC
116


Système respiratoire (1)
Objectif
• Mettre en évidence d’éventuelles modifications de la fonction
respiratoire induites par le Trineparib

Méthode
• Pléthysmographie chez le rat conscient non restreint
• Dose unique de Trineparib par voie orale

Paramètres observés
• Fréquence respiratoire (FR)
• Volume courant (VC)
• Volume minute
• Temps d’inspiration et d’expiration
• Temps de pause augmentée (=bronchoconstriction)
117


Système respiratoire (2)
Résultats
• Pas de différence significative par rapport au lot témoin
• Théophylline (Témoin positif) : ↗ FR et ↘ VC significativement

Trineparib 5 mg/kg
Trineparib 5 5 mg/kg
Trineparib mg/kg
Trineparib 90 mg/kg
Trineparib 90
Trineparib 90
mg/kg
mg/kg
Trineparib 180 mg/kg

Véhicule
Véhicule
Théophylline
Théophylline

118


Tests complémentaires:
elgys
Système gastro-intestinal
Objectif
• Déterminer les effets potentiels du Trineparib sur la motilité intestinale

Principe
• « Charcoal Meal Test »
• Mesure du temps de transit intestinal chez le rat Sprague-Dawley

Résultats
Véhicule 5 50 100 Morphine
100
Pourentage de transit

80
60 *
40
(%)

20
0
Véhicule 5 50 100 Morphine 119
Doses (mg/kg)
• Pas de différence significative par rapport au lot témoin

Tests complémentaires:
elgys
Système rénal
Paramètres observés Répartition des lots
• Diurèse
Type de groupe Nombre de rats Administration
• pH urinaire
• Osmolalité Contrôle négatif 6 Femelles placebo

• Ionogramme urinaire Contrôle positif 6 Femelles Cisplatine 8mg/Kg
• Protéinurie Dose efficace 6 Femelles Trineparib 5 mg/kg
• Concentration de créatinine
Dose intermédiaire 6 Femelles Trineparib 90
et d’urée dans le sérum et mg/kg
les urines
Dose maximale 6 Femelles Trineparib 180
tolérable mg/kg

Résultats
• Aucune modification significative des paramètres
mesurés 120


elgys
Conclusion

SNC: pas de toxicité
CV: pas de toxicité cardiaque
neurologique

Passage du Trineparib
en phase clinique

Système rénal et gastro- Système respiratoire: pas de
intestinal: pas de toxicité toxicité pulmonaire

121


elgys
trineparib
®

Hejer LAOUITI

BREVET
122


elgys
Plan
• Qu’est ce qu’un brevet?

• Ce qui a été breveté

• Durée d’un brevet

• Demande PCT

• Chronologie PCT
123

laboratoires lnnovans Brevet

elgys
Qu’est ce qu’un brevet?

• Une exclusivité commerciale temporaire

• Retour sur investissement

Trois critères: -Nouveauté
-Activité inventive
-Application industrielle 124


elgys
Ce qui a été breveté:
• La molécule: Trineparib

• Le procédé d’obtention

• L’indication: première intention dans le
traitement du cancer du sein métastatique
triple négatif chez les femmes présentant une
mutation du gène BRCA 1 ou 2 en association
avec le Carboplatine et la Gemcitabine . 125


elgys
Durée d’un brevet
• Durée limitée à 20 ans à partir de la date de
dépôt
• Possible extension de 5 ans max (C.C.P)
Brevet 20 ans
CCP: 5ans

R&D Commercialisation

2000 2009 2010 2020 Expiration 2025
Dépôt Demande Obtention du Brevet: Debut Expiration
du brevet AMM AMM effectif du CCP du CCP
126
Période d’exclusivité: 15 ans


Demande PCT elgys
(Patent Cooperation Treaty)

• Demande internationale

• Permet la délivrance de plusieurs brevets
nationaux ou régionaux

 comporte deux phases successives dites
“internationale” et “nationale”
127


elgys
Chronologie du PCT
Publication du
12 Avril 2000 brevet (ISA)
Ouverture des demandes Demande d’examen préliminaire
nationales international

12 16 18 22 30
Rapport de recherche USA  2003
international (ISA) et avis France  2004
Ouverture des
Demande procédures nationales
internationale

Phase internationale Phase nationale

Brevet tombera dans le domaine publique le 12 avril 2025.
128


elgys
trineparib
®

Céline BERARD
Céline CAMIZULI
Pauline LEVELEUX
Marie-Hélène LY

GALENIQUE
129


elgys
Plan

• Pré-formulation
• Formulation
• Process
• Points critiques du process

130

laboratoires lnnovans Galénique

elgys
Pré-formulation
Trineparib: solubilité faible et pH-dépendante

formation d’un sel
chlorhydrate de Trineparib

↗ solubilité et non pH-dépendante
solubilité = 64 g/L
131


elgys
Pré-formulation
• Granulométrie par tamisage à sec
Répartition granulométrique des particules de chlorhydrate de Trineparib
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
Fréquence 0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 30 60 90 120 150 180 210 240
Taille des particules mesurées (µm)
Taille moyenne des particules = 150 µm 132


elgys
Pré-formulation
• Aptitude au tassement
Volume de la poudre en fonction du nombre de chutes appliquées
120

100

80
Volume de la
60
poudre (ml)
40

20

0
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

Nombre de chutes successives
V10 – V500 = 97 – 80 = 17 mL < 20mL 133


elgys
Pré-formulation
• Ecoulement

Si θ < 30° : bon écoulement
Si θ > 30° : mauvais écoulement
angle de repos sel de Trineparib= 29°

• Comprimabilité: bonne 134


elgys
Pré-formulation
• Classification biopharmaceutique
- perméabilité élevée
Classe I
- solubilité élevée

• Pharmacocinétique
Absorption par diffusion active
PA ionisé PA non ionisé
Absorption 135


elgys
Formulation
Choix de la voie d’administration: voie orale
• voie de 1ère intention
• coût moindre
• meilleure qualité de vie
2 critères: log P ≥ 1,8 et MM < 500 g/mol
chlorhydrate de Trineparib : log P = 2,26
MM = 324 g/mol

Choix de la forme: comprimé
136


elgys
Formulation
½ vie chlorhydrate de Trineparib = 6h forme LP

Avantages:
• réduction nombre de prises journalières
• accroissement du confort du malade
• amélioration observance traitement
• augmentation de la durée d'action
137


elgys
Formulation
Choix des excipients
• Matrice: Methocel™ K4M DC (HPMC)
→ matrice hydrophile permettant la
compression directe
• libération uniforme non pH-dépendante
• faible quantité d’excipient
• rôle de liant
138


elgys
Formulation
Effet de la proportion de HPMC K4M DC dans la matrice sur la libération
du chlorhydrate de Trineparib
120

100

80
Pourcentage de HPMC 5%
libération du 60 HPMC 10%
principe actif HPMC 20%
40
HPMC 30%
20

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

Temps (heures) 139


elgys
Formulation
• Glidant: silice colloïdale
→ meilleur écoulement de la poudre
→ distribution uniforme et poids constant

• Lubrifiant: stéarate de magnésium
→ limite le collage et le grippage

140


elgys
Formulation
Pelliculage
Avantages :
• Administration plus facile
• Reconnaissance du comprimé, meilleure
observance
• Protection contre l’humidité
• Lutte contre la contrefaçon
141


elgys
Formulation
OPADRY® fx™ : poudre prête à l’emploi (à diluer)
Contient des pigments nacrés :
→ comprimés facilement différenciables

Exemples de comprimés pelliculés avec OPADRY® fx™
142


elgys
Formulation
Effet du pelliculage sur la vitesse de dissolution
Cinétique de libération du principe actif avec ou sans enrobage
120

100

80
Libération du
principe actif 60
comprimé nu
(%) 40
comprimé pelliculé
20

0
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
Temps (heures)
→ le pelliculage par OPADRY® fx™ n’influence pas
significativement la vitesse de dissolution de la matrice
143


elgys
Formule galénique d’Elgys®
Fonction Proportion (%) Masse (mg)
Chlorhydrate principe actif 79 700
de Trineparib
HPMC K4M DC matrice 20 175
Stéarate de lubrifiant 0,5 4,5
magnésium
Silice colloïdale glidant 0,5 4,5
OPADRY® fx™ pelliculage 2 18

Masse totale du comprimé: 902 mg 144


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