La culture du pommier est l’un des secteurs les plus importants au Maroc, et joue un rôle prépondérant dans le développement durable ; puisqu’elle se place au deuxième rang après l’amandier. Le pommier est sujet de plusieurs attaques parasitaires et maladies causant ainsi des pertes en rendement. Face à cette situation, les producteurs marocains utilisent des produits phytosanitaires, toutefois, l’utilisation irrationnelle et le non respect des délais de carences de ces produits pourraient être à l’origine de l’accumulation des résidus dans les pommes. C'est dans ce contexte que s'inscrit notre étude, elle consiste à faire doser et à analyser les résidus de carbamates présents dans les pommes prises de différentes régions marocaines, par chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC –UV) qui est un instrument d’analyse de très grande sensibilité utilisé pour la séparation des molécules polaires et thermolabiles. IL s’agit aussi de prouver la fiabilité et l’efficacité de la méthode d’extraction utilisée. Parmi ces carbamates, six molécules sont étudiées : le Carbaryl, le Carbofuran, l’Aldicarb, le Bendiocarb, le Propoxur et le Méthomyl. Les résultats de l’analyse des échantillons de pommes, par HPLC –UV, ont montré l’absence des résidus de carbamates, ce qui explique qu’il y a eu dégradation rapide de ces composés. Pour vérifier l’efficacité et la fiabilité de la méthode d’extraction, on a fortifié nos échantillons de pommes avec une certaine concentration de carbamates. Pour cela, on a travaillé sur deux paramètres ; Le temps de rétention et le taux de récupération. Chaque carbamate a un temps de rétention (Tr) spécifique qui nous permet de l’identifier dans un échantillon contaminé ou dopé. Les résultats de cette étude ont montré que les taux de récupération des carbamates testés étaient satisfaisants, exceptés le Carbofuran et le propoxur dont les taux dépassent 100%, car ils ont un temps de rétention identiques.

1. UNIVERSITE HASSAN II MOHAMMEDIA-CASABLANCA
Faculté des Sciences et Techniques Mohammedia
MASTER SCIENCES ET TECHNIQUES
Spécialité : Sécurité Alimentaire et Démarche Qualité
MEMOIRE DE STAGE DE FIN D’ETUDES
Intitulé
Analyse et dosage des résidus de Carbamates
dans la pomme par HPLC
Présenté par : Imane HACHOUMI
Encadrée par:
- Pr F. ZKHIRI
- Mme N.RHADDIOUI
Les membres des jury :
- Pr. A. AMMAR
- Pr. N. MESKINI
- Pr. F. ZKHIRI
- Mme. N.RHADDIOUI
2011-2013

2. Présentation du lieu de stage
Introduction
Plan du travail
Synthèse bibliographique
Matériel et méthodes
Résultats et discussion
Conclusion et perspectives

3. Présentation du lieu du stage
Pôle Biologie
Médicale
Pôle Biologie
Environnementale
Organe national
diagnostic médical
le contrôle de la qualité
d'hygiène au Maroc

4. Mon stage

5. Introduction générale
Les pesticides
Améliorer la qualité des produits
Augmenter le rendement des cultures
l’environnement
la qualité des produits agricoles
la santé des populations

6. Contrôler les teneurs en
résidus de pesticides
Vérifier qu’ils ont été
effectués de manière
correcte
Aucun risque pour la santé
du consommateur

7. Objectif du travail
L’objectif de ce travail est de
doser les résidus de carbamates dans les pommes par
la chromatographie liquide à haute performance (HPLC).

8. Pesticides
Directive européenne
91/414/CE du 15 juillet 1991
substances chimiques
= la protection des plantes
cultivées et des produits récoltés
- Les attaques de champignons
de parasites, d’insectes,
d’acariens;
- Détruire les mauvaises herbes.
.

9. Classification des pesticides
Classification
la nature de l’espèce à
combattre
la nature chimique
- insecticides,
- herbicides,
- les fongicides.
- organochlorés,
- organophosphorés,
- carbamates

10. Carbamates
Esters de l'acide N-méthylcarbamique
Structure générale d’un carbamate
Alkyle, aryle,
un dérivé
d'oxime..
(H) ou
(CH3)
(CH3)

11. Utilisations des carbamates

12. l’impact des carbamates sur l’environnement
Solubilité dans l'eau
Absorbés par les racines
Absorbés par les
feuilles des plantes

13. Comportement des carbamates dans l’environnement
Pesticide Solubilité dans
l’eau
Solubilité dans
les
graisses
Biodégradabilités
Dégradation
Aldicarbe forte Faible forte
Carbofuran forte Faible moyenne
Méthomyl moyenne Faible forte

14. l’impact des carbamates sur la santé
Voie digestive
Inhalation
Voie cutanée
Carbamates peuvent absorbés
L’apparition d’effets cliniques
Dose
Voie d’exposition
Le type de
carbamates impliqué
L’ individu

15. Inhibition de
l’Acétylcholinestérase

16. Symptomatologie
Intoxication aigue
Effets muscariniques
Effets nicotiniques
Signes muscariniques
Nausée, Diarrhée
Salivation, transpiration, sécrétion
bronchique. Singes nicotiniques
Faiblesse musculaire voir
paralysie, Hypertention.

17. Résidus
Quantité laissée
par un pesticide
dans ou sur les aliments
les métabolites
Produits de réaction

18. Les résidus de carbamates dans la
pomme
Le Maroc est le second producteur africain des pommes avec
30% de la production du continent.
la culture du
pommier est sujette
de nombreuses
attaques parasitaires
la lutte chimique
causant ainsi des pertes
remarquables en
rendement.

19. Puisque on vise à doser les résidus de carbamates dans la
pomme
La question qui se pose est ce que les carbamates sont utilisés
dans la culture du pommier au Maroc?

20. (ONSSA) liste des pesticides à usage agricole homologués au Maroc le
04 février 2013
Numéro
Homologation
Classe Formulat-
ion
Matière (s)
Active (s)
Type de
traitement
Ennemis DAR*
(jour)
E11-6-003 Fongicide WP Mancozèbe Parties
aériennes
Tavelure 45 j
B09-7-008 Insecticide WP Azinphos-méthyl
(OP)
Parties
aériennes
Carpocapse 30j
D09-3-003 Insecticide WP Méthomyl Parties
aériennes
Carpocapse 21 j
E11-9-019 Insecticide EC Chlorpyriphos-
éthyl (OP)
Parties
aériennes
Cochenilles 30j
E02-9-007 Fongicide SC Carbendazime Parties
aériennes
Tavelure 15j
0827 Insecticide EC Fenthion Parties
aériennes
Carpocapse 15j
1020 Insecticide EC Malathion Parties
aériennes
Carpocapse 7j
0526 Insecticide WP Carbaryl Parties
aériennes
Carpocapse 15j
les matières actives utilisées sur la culture du pommier au Maroc.

21. Le dosage des résidus de carbamates dans
la pomme
Le pré-traitement des échantillons
L’extraction des pesticides
La purification des extraits
Analyse par Chromatographie en phase liquide(HPLC)

22. Matériel et Méthodes

23. NF EN 12393-2, 1998
Notre objectif:
doser et à analyser
les résidus de
carbamates
Déterminer des résidus présents
dans les végétaux par HPLC
Carbamates polaires et thermolabiles
méthodes sensibles
et fiables
nécessite

24. Prélèvement des échantillons
Dayaat Aoua, de Midelt et Arbor Oulmes

25. Préparation des solutions standards
Les standards analytiques des carbamates utilisés
(Carbaryl, Carbofuran, Aldicarb, Bendiocarb,
Baygon et Méthomyl)
SM
Carbamates
Acétonitrile – eau
(50:50, v/v)
Concentration
de 100 ppm
chacunDilutions de 5 ppm

26. Méthode d’extraction

27. Technique de Dopage
PJNP+ Carbaryl (5 ppm)
PJNP + Bendiocarb
PJNP+ mélange 1 (Carbofuran, Carbaryl, Aldicarb)
PJNP+ mélange 2 (Baygon, Méthomyl, Carbofuran)

28. Résultats

29. Le dosage des résidus de carbamates dans
la pomme
Chromatogramme HPLC-UV d‘un échantillon de pomme jaune non
pelée à 280 nm.

30. Les paramètres à déterminer:
Le temps de rétention
Le taux de récupération

31. Le dopage avec du mélange 1 (5 ppm)
Chromatogramme HPLC-UV du mélange 1 de carbamates
Chromatogramme HPLC-UV d’un échantillon de PJNP dopé avec un mélange 1
6,521min
5,514min
6,588 min
5,598 min
8,757 min
8,777 min

32. Le dopage avec du mélange 2 (5 ppm)
Chromatogramme HPLC-UV d’un mélange de carbamate (Méthomyl,Carbofuran, et
Baygon)
Carbofuran= 6,521min
Baygon= 6,500 min

33. Le taux de récupération
Mélanges Carbamates Tr (min) Astd Aech
(R%)
Carbaryl 8,757
5181 4862
93,84
Bendioacarb 6,482
797385 706639
88,61
Mélange 1
Carbaryl 8,757
60273 50100
83,12
Carbofuran 6,521
709385 607605
85,56
Aldicarb 5,514
41035 37962
92,51
Mélange 2
Baygon 6,500
90657 93476
103,10
Méthomyl 3,357
69273 59100
85,31
Carbofuran 6,521
90657 96231
106,14

34. Discussion

35.  L’analyse des échantillons effectuée par HPLC-UV = aucun
résidus de carbamates.
1) la période de stockage ou à leur dégradation dans l’environnement.
L’absence des résidus de composés carbamates dans les pommes
2) les échantillons de pommes ne contenaient probablement que de
faibles traces qui restent en dessous de la limite de détection
par l’HPLC.

36. CRRAM
Mettre en évidence deux biopesticides contre
les pathogènes de maladies de post-récolte
des pommes
Aureobasidiwnpullulon
Ach1-1
A. pullulons var.
Pullulons 1113-5
3) Nouvelles techniques de lutte biologique

37. le taux de récupération
(R%)
Evaluer la fiabilité et la conformité de la méthode
d’extraction utilisée
la méthode d’extraction adoptée au laboratoire est
performante.
2 carbamates ont montré un rendement qui
dépassent les 100% ; Baygon et Carbofuran.

38. Temps de rétention identiques pour les deux derniers composés
une contamination
méthode d’extraction adoptée n’est pas si efficace pour
extraire le carbofuran et le propoxur
Zrostlikova et al., en 2003: taux de récupération du
Carbofuran n'était pas satisfaisant dans la pomme en
raison de sa perte dans l'étape de filtration.

39. Conclusion

40. Aucun résidus de
carbamates
Dopage
Carbamates testés peuvent être
extraits avec une efficacité
importante
Satisfaisants, sauf 2 composés
Echantillons de pommes
l’efficacité de la méthode
d’extraction
le taux de récupération

41. Perspectives

42. l’HPLC-MS
Mettre en place un appareillage
plus performants au Laboratoire
Amélioration de la récupération des composés de carbamates
Améliorer la performance de la méthode en faisant
varier l’équipement utilisé, l’extraction, les conditions
chromatographiques.

43. Merci de votre attention