1. MrMrMrMr BoutouilBoutouilBoutouilBoutouil SalimSalimSalimSalim
CoursCoursCoursCours dededede BactBactBactBactéééériologieriologieriologieriologie MMMMéééédicaledicaledicaledicale
TechniquesTechniquesTechniquesTechniques dededede colorationcolorationcolorationcoloration dededede GramGramGramGram
PrPrPrPrééééparationparationparationparation dudududu FFFFrottisrottisrottisrottis
Le frottis pour la coloration de Gram est préparé soit directement à partir du
prélèvement du patient exemple un pus ou par application des micro-organismes à
partir d’une culture d’un milieu liquide ou solide. La préparation du frottis comprend
l'application d'une certaine partie des germes sur une lame de verre propre. Il faut
émulsionné dans une goutte d'eau stérile ou une solution saline sur la lame. Un
applicateur en bois bâton stérile peut être utilisé ou un l’anse de platine pour bien
étaler les bactéries sur la lame pour qu’ils peuvent être facilement observer au
microscope. On sèche le frottis et le fixer par la chaleur soit directement par le bec
bezen ou en le plaçant sur une plaque plus chaud (60 °C) pendant au moins 10
minutes en évitant de faire brûler le frottis, ou en l'inondant de méthanol 95 %
pendant 1 minute. Pour examiner les organismes cultivés en milieu liquide, un
échantillon aspiré du bouillon de culture est appliqué sur une lame puis le mettre sur
une plaque chaud pour séchée et fixée avant la coloration. La préparation des frottis
varie en fonction du type d'échantillon en cours de traitement et sur les méthodes de
coloration utilisé.
Un frottis à partird'un écouvillon de pus Un frottis à partird'un milieu liquide

2. MrMrMrMr BoutouilBoutouilBoutouilBoutouil SalimSalimSalimSalim
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LaLaLaLa colorationcolorationcolorationcoloration
1. Couvrir la lame avec du cristal violet (violet) et laisser agir pendant 10
à 30 secondes. Rincer la lame avec de l'eau du robinet, secouer tout excès.
2 Recouvrir la lame avec de l'iode pour augmenter l'affinité de cristal
violet et lui permettre de rester sur la surface sans séchage deux fois tant
que le cristal violet ( 20 secondes d' iode pour 10 secondes de cristal
violet , par exemple). Rincer à l'eau du robinet , secouer tout excès.
3 Recouvrir la lame avec décolorant pendant 10 secondes et rincez
immédiatement à l'eau du robinet. Répétez cette procédure jusqu'à ce que
la décoloration du colorant. Un Frottis plus épaisses nécessite une
décoloration plus prolongée . Rincer avec de l'eau du robinet et secouer
l’excédent.
4 Recouvrir la lame avec contre colorant la fushine de zhiel et laisser
sans séchage pendant 30 secondes. Rincer doucement avec de l'eau de
robinet, sécher avec des serviettes en papier ou du papier absorbant ou de
l'air sec. Pour frottis délicats, comme certains liquides organiques, séchage
à l'air est le meilleur procédé. Examiner au microscope sous un objectif à
immersion à 100 x .