1. Présentée par: Mme LIAMANI Ouafia
Doctorante en biologie
Option: biologie de la reproduction

2. Cryodécapage
Technique Etude des l'observation
moderne de membranes avec un
cytologie cellulaires (MET)

3. • congélation ou
utilisation de
Cryo froid
• élimination de la
partie superficielle
Décapage d’un objet
Enlever la partie superficielle d’un objet par
congélation

4. Intérêt
éviter une fixation
chimique
éviter tout artefact
étudier la morphologie
ou l’ultra-structure

5. ETAPES DE CRYODECAPAGE
Coupe ou Isolement
Congélation Décapage Ombrage Observation
cryofracture des
métallique au MET
répliques

6. 1- Congélation

7. Définition:
• Un processus de fixation très rapide
• Action de soumettre au froid un échantillon
But:
• Assure une bonne conservation de la moindre
petite structure.
Méthode:
• congelé dans l’azote liquide à -196 C jusqu'à
-200 C par le biais du fréon

8. Azote liquide

9. Congélation dans l’azote liquide

10. 2- Coupe ou cryofracture

11. Définition:
• Coupe au froid.
But:
• Une légère cryodessiccation ou cryofracture
décape la surface de l’échantillon
Méthode:
• Lame d’acier refroidie par l’azote liquide, permet
une coupe faite de manière à obtenir une surface
lisse

12. Détails des 2 feuillets membranaires dénudés

13. 3-Décapage

14. Définition:
• élimination de la partie superficielle d’un objet
But:
• Augmenter le pouvoir de résolution
• une étape de sublimation
Méthode:
• se fait sous vide élevé (10-6 Barr).En approchant à 2 mm
environ de la surface de l’échantillon qui est à -100 C
une plaque portée elle-même à une température de
126 C

15. Plaque chauffante à 126°C
2mm
La glace est éliminée de la
-100°C
surface par sublimation
Membrane nucléaire à nu, avec ses protéines et ses particules

16. 4- Ombrage métallique

17. Définition:
• Transformation d'un élément transparent en
un élément opaque pour l'observation au
microscope
But:
• Faire ressortir tous les détails superficiels de la
cellule
Méthode:
• 1ère vaporisation verticale d’une mince couche de carbone, c’est
la réplique carbonée ; cette dernière est ombrée par 2ème
vaporisation oblique de platine

18. carbone
Dépôt d’un film continu de carbone à la surface
platine
Ombrage de la surface par un film de platine

19. 5- Isolement des répliques

20. Elimination de la partie
organique par un acide minéral
•H2SO4
•HCL

21. Réplique carbone-métal
Isolement de la réplique

22. 6- Observation au MET

23. Microscope électronique à transmission

24. Cellule végétale (Euglena gracilis )observer au MET
après cryodécapage

25. Appareil de Golgie observer au MET après
cryodécapage

26. Une portion de chloroplaste de chlamydomonas (algue
unicellulaire) observer au MET après cryodécapage