Culture embryonnaire Madkour-SMFC-2019
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Protocoles de Culture embryonnaire Evaluation morphologique de l'ovocyte et l'embryon en FIV Systèmes de diagnostic embryonnaire
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- 2. 2
- 3. Taille de l’ovocyte Ovocyte géant Machtinger et al., 2011; Rosenbusch and Hancke, 2012 Frome de l’ovocyte Forme du GP GP aplati Vacuole EP anormal Cytoplasme granuleux J0
- 4. Le score du pronucléi 16-17h Classification Scott et Smith (1998) Le halo cytoplasmique J1
- 5. Alter et al., 2014 Clivage précoce 24-26h Multinucléation J1
- 6. J2 J3 Compaction précoce Nombre et Régularité des blastomères de l’embryon et compaction précoce à Jour 3
- 7. J5
- 8. Glucose LactatePyruvate Composés majeurs issus du sérum et des cellules tubulaires Pyruvate Citrate Malate Glucose Avant activation génomique Pas à priori indispensable L’embryon utilise surtout le pyruvate et lactate Après activation génomique Métabolite clef nécessaire à la synthèse des lipides, aminoacides et acides nucléiques Détoxification embryonnaire de l’amoniac par transamination Favorables au développement embryonnaire au stade de transition morula-blastocyste Effet bénéfique des métabolites intermédiaires
- 9. 9
- 10. • Composition ionique= le ratio Ca/Mg • EDTA présent pour la pré-compaction mais pour le stade post- compaction • Sources d’énergie: Ca Lactate • (Lactate présent sous Ca Lactate) • Citrate de Sodium pour la fécondation et clivage • pH: Défini avec un % CO2 • Osmolarité: 265-280 • Vitamines: jusqu’au stade blastocyste • Pantothenate, choline, inositol …. Lane and Bavister, 1998; Rogers and Yanagimachi, 1976
- 11. • Sels inorganiques: • NaCL, KCL, MgSO4, KH2PO4, NaHCO3, EDTA • avec variation en Ca/Mg durant la fécondation et le développement embryonnaire • Sources d’énergie: • Pyruvate de Sodium, Calcium-L+-lactate, Glucose, Citrate de Sodium. • Acides Aminés: • Essentiels et non-essentiels, taurine, alanyl gutamine • pH: • 7,3 pour la fécondation et le milieu du blastocyste • 7,2 pour le milieu du clivage • Osmolarité: • 265mosmoles/Kg • Vitamines: • pour le milieu du blastocyste • Antibiotique: • Gentamicine
- 12. • Sels inorganiques: • NaCL, KCL, MgSO4, KH2PO4, NaHCO3, EDTA • avec variation en Ca/Mg durant la fécondation et le développement embryonnaire • Sources d’énergie: • Pyruvate de Sodium, Calcium-L+-lactate, Glucose, Citrate de Sodium. • Acides Aminés: • Essentiels et non-essentiels, taurine, alanyl gutamine • pH: • 7,3 pour la fécondation et le milieu du blastocyste • 7,2 pour le milieu du clivage • Osmolarité: • 265mosmoles/Kg • Vitamines: • pour le milieu du blastocyste • Antibiotique: • Gentamicine
- 13. Présence des facteurs embryotrophiques Pas d’EDTA dans le milieu au stade blastocyste Milieu Séquentiel Milieu One Step Changement du milieu de culture à J3 ph équilibré Élimination des facteurs embryotoxiques Un seul milieu Présence d’EDTA qui peut diminuer la glycolyse au stade blastocyste Déséquilibre du ph
- 14. Présence des facteurs embryotrophiques Pas d’EDTA dans le milieu au stade blastocyste Milieu Séquentiel Milieu One Step Changement du milieu de culture à J3 ph équilibré Élimination des facteurs embryotoxiques Un seul milieu Présence d’EDTA qui peut diminuer la glycolyse au stade blastocyste Déséquilibre du ph Mais y a-t-il une différence du point de vue embryologique et clinique??? NON
- 15. Présence des facteurs embryotrophiques Pas d’EDTA dans le milieu au stade blastocyste Milieu Séquentiel Milieu One Step Changement du milieu de culture à J3 ph équilibré Élimination des facteurs embryotoxiques Un seul milieu Présence d’EDTA qui peut diminuer la glycolyse au stade blastocyste Déséquilibre du ph Mais y a-t-il une différence du point de vue embryologique et clinique??? NON
- 16. Embryotropines autocrines au cours de la culture individuelle Embryotropines autocrines au cours de la culture en groupe ✓Production et sécrétions des facteurs autocrines qui agissent sur l'embryon lui-même et sur les embryons voisins. ✓La concentration des facteurs autocrines est plus élevée pendant la culture en groupe, ➔ Taux plus élevé de développement du blastocyste.
- 17. Kelley and Gardner, 2017 2017 • Le système de group-culture a donné les meilleurs blasto
- 18. Groupe 1 : 2 à 4 E- 25 uL Groupe 2 : 5–6 E -25 uL Groupe 3 : 7–9 E- 25uL la faible densité d'embryon peut être aussi efficace que la moyenne modérée
- 19. Blocage de l’apoptose embryonnaire en régulant les gènes apoptotiques CSF2
- 21. Nécessaire pour le développement FGF-2 GH et IGF-1, 2 uPA 2017
- 22. Module l’immunité nécessaire pour l’adhésion et l’invasion Facteur pré- implantatoire
- 23. Action sur le transport du Glc et la consommation des AA une protection antioxidante L’insuline, transférine, Sodium Sélénite Glc AA
- 24. Système Statique • Tubes et boites de Polystyrène • Accumulation des toxines et des radicaux libres Systèmes qui miment plus le “in vivo” ➔ Dynamique • Microfluidiques- technologie des petite volumes du liquide “Lab on a chip” • Application en co-culture (Mizuno 2007) • Dynamic micro-funnel device (Heo 2010)
- 25. permet de passer de 50% de blastulation à 70% Chang et al., 2016 Co-cultureTapis cellulaire Co-culture dans le système microfluidique
- 26. AFF-IVM HFF-IVM HFF- CGC-IVM S-IVM Milieu de MIV MIV GV MII Culture du CGC pendant 72-76h (Madkour et al., 2018; FS)
- 27. 27
- 28. 28
- 29. 29 Free Radicals Antioxidants Cell membrane
- 32. Profil transciptomique/protéomique Prédiction du Potentiel Implantatoire Besoin de Validation G-CSF miR-29a PROK1
- 34. Pr MADKOUR Aicha Faculté des Sciences de Rabat Université Mohammed V Adresse email : Madkouraicha.ivf@gmail.com