l'exemple de cette culture c'est la cellule nerveuse embryonnaire du cortex de rat

1. Université Mohamed-Khaider Biskra
Faculté des sciences exactes es des sciences de la nature et de la vie
Département des sciences de la nature et de la vie
Filière : Biologie
Spécialité: Biochimie master 1
Préparée par :
Lemsara ibtissam
Guercif ilham
Lamamra aya
Leuli yousra
Meddas khaoula
Année universitaire :2021 /2022
Dirigé par :
Dr ATHAMENA Ahmed
Groupe : 07

2. 1- la culture cellulaire
2-Les techniques d'obtention des cellules.
3- les types des cultures.
4-Les besoins nutritionnels
5-les conditions de culture.
6-les matériels .
7-l'exemple.
8-conclusion.
Plan de travaille:

3. La culture cellulaire est devenue un des outils majeurs utilise aujourd'hui dans les
sciences de la vie. Ce guide est conçu pour servir d'introduction basique à la culture de
cellules animales. Il convient parfaitement aux personnels de laboratoire qui utilisent
cette technique pour la première fois, ainsi qu'à ceux qui collaborent avec les
chercheurs en culture cellulaire et qui désirent mieux comprendre les concepts clés et la
terminologie de ce domaine passionnant et en pleine expansion.
La culture cellulaire ou culture in vitro est un
ensemble de techniques qui combinent
l’asepsie à un environnement parfaitement
contrôlé (milieu défini). Ces méthodes
s’appliquent aux plants, aux cellules animales
mais aussi aux tissu et bien entendu à des
cellules plus ou moins isolées.

4. Les technique d’obtention des cellules
Les cellules
organisées en tissu,
en cohésion les unes
avec les autres.
Les cellules libres et
circulants ex les cellules
du sang
Obtention
Peuvent être devisée en
2 méthodes :
la méthode de dissection
 la méthode enzymatique

5. les types des cultures
Culture stationnaire ou
monocouche:
Ce type de culture est basé sur
l’affinité des cellules pour un
support . Celui-ci peut être du
verre ou du plastique , il peut
être recouvert ou non de
collagène , de gélatine
Culture en suspension:
Sont généralement cultivées:
Dans des flacons spinner ou
dans Erlenmeyers agité dans
lesquels les cellules sont
activement gardées en
suspension dans le milieu

6. Les conditions de culture
la
température
• La température optimale de croissance est de 37 °C pour les cellules de
mammifères et de 27 °C pour les cellules d’insectes
PH
• Les cellules animales ne tolèrent que de faibles variations de pH et doivent
ainsi être cultivées dans un milieu dont le pH reste compris entre 6,5 et 7,8
selon les cellules, la valeur optimale se situant généralement autour de 7,3
OS
• L’osmolarité optimale pour la culture de cellules animale est de l’ordre de
300 mOsm . kg-1

7. Les besoins nutritionnels
La partie "nourriture" du milieu de culture est Constituée
Ils permettent aux cellules de
construire de nouvelles protéines et
autres composants essentiels à la
croissance et aux fonctions et
apportent l'énergie nécessaire au
métabolisme
Acides
amines
Vitamines
Sel
minéraux
glucides

8. Le matériel utilisées
Bioréacteur en verre 5l
Un post de
sécurité(hotte stérile
Un Microscope
Une centrifugeuse Un bain-marie à 37 ° C

9. Exemple: Culture de neurones corticaux de rat
•Les cultures de cellules neuronales corticales constituent un système modèle
important pour l'étude du développement et de la fonction neuronale, la découverte de
médicaments et les mécanismes des maladies neurologiques. Ce protocole fournit des
instructions étape par étape pour disséquer et cultiver des neurones corticaux à partir
de ratons embryonnaires
Milieu de culture:
.PBS, antibiotique
• Cultrex® Poly-D-Lysine
• (milieu de base neuronal
•Cultrex poly D_lysine
•Cultrex® Mouse Laminin I

10. Expérience
Jour 1
Préparer les plaques de
culture cellulaire en les
enduisant de poly-D-
Lysine et de laminine
de souris.I
Jour 2
Récupérer les
embryons de rat.
Décapiter.
Retirer les cerveaux des
têtes et les placer sur de
la glace dans du PBS
froid.
petits ciseaux
chirurgicaux
Séparez les hémisphères
corticaux et jeter le tronc
cérébral et le cervelet.
éliminer
le tronc
cérébral
et le
cervelet

11. Enlevez les méninges des
deux hémisphères et
jetez-les.
Découpez l'hippocampe en
deux hémisphères
et le jeter.
Couper le tissu cortical
isolé.
isolé en petits morceaux
#5 Pinces fines
rejeter
hippocampe

12. Pour les tissus
embryonnaires
Tissu cortical
Transférez le tissu cortical.
Triturer délicatement. Centrifuger.
Décanter le surnageant.
Remettre les cellules en suspension.
Centrifuger. Décanter le
surnageant.
5 mL
chauffés
Neuronal
de base
5 mL
chauffés
Neuronal
de base
Laver les cellules
deux fois.
Centrifuger.
Décanter le
surnageant
10ml chauffés
neuronal de base

13. Reconstituer les neurones corticaux
avec milieu de culture complet pour
neurones corticaux milieux de culture
Ensemencer les neurones sur
plaques de culture cellulaire revêtues
Culture de neurones corticaux
pendant la durée souhaitée
Changer de milieu tous les
3-4 jours
suspension de cellules

14. On conclure que la culture des cellules
animales jouent un grand rôle dans l’étude des
mécanismes de la physiologie cellulaire, dans
la médicine humaine, et dans l’industrie
pharmaceutique. Leur études se faire à l’aide
de plusieurs moyennes, comme la microscope
de fluorescence.

15. Merci pour votre attention