production et l'utilisation des anticorps monoclonaux en thérapie et en diagnostique.

1.  Présenté par :
Dirigé par :
HAMDIKEN Souad
BEN RAIS Amina Dr MEZIOUG
BOUACHIBA Hadjira
BOUKHALF Hakima
DJELLIEL Nabila
Année universitaire :2015/2016
M1/BPM Groupe:02
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2. Plan :1-Introduction
 Définition
 Historique
 structure
 Différents types
2-Production d’hybridome
3-Mécanisme d’action
4-Fonction des ACM
6- domaines d’utilisations
 Utilisation des ACM dans la diagnostic
 Utilisation des ACM dans le thérapie
 Utilisation des ACM dans la recherche
7-Pharmacologie
8-Effets secondaire
9-Commercialisation
10- Conclusion
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3. Introduction
3

4. La biotechnologie permet de créer les médicaments de
demain comme la synthèse de molécule naturelle :
anticorps monoclonaux largement utilisés en biologie
et en médecine à la fois comme outil de diagnostic et
dans des buts thérapeutiques.
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5. Objectifs
Étudier la production des biomolécules à partir de
systèmes eucaryotes.
utilisation des biomolécules dans le diagnostique et
dans la thérapie.
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6. Définition :
• Les anticorps monoclonaux sont immunoglobuline(IgG) caractérisées
par un poids moléculaire important (environ 150.000 daltons) Ils ne
reconnaissent qu’un seul type d’épitope sur un antigène donné. Ils sont
tous identiques et produits par un seul clone de plasmocyte.
Anticorps monoclonal Anticorps polyclonal
6

7. ACM ACP
Temps et cout de
fabrication
Rapide et moins
cher
Lent et plus cher
Reproductibilité Variable Constante
Affinité Variable Constante
Concentration et
degré de pureté
Faible Elevé
Stabilité de pH Plus stable Moins stable
Disponibilité Limitée Illimitée
Comparaison des principales caractéristiques des ACM et ACP
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8. Historique:
Sérothérapie
Antibiotiques
Anticorps
Anticorps
monoclonaux
1888
1928
1959
1975
8

9. 1975 199419891984
Murin
« MOMAB »
100%
Chimérique
« XIMAB »
25% murin
Humanisé
« ZUMAB »
10%
Humain
« MUMAB »
100%
les différents types des anticorps monoclonaux:
les anticorps monoclonaux sont de quatre types, selon leur
nature animale ou humaine.
Immunogénicité
9

10. Anticorps monoclonal chimérique:
Technique d’ADN recombinant
10

11. Anticorps monoclonal humanisé:
Greffe des régions hypervariables
murine
11

12. Anticorps monoclonal humain:
2 techniques
In vivo : souris
transgénique
In vitro: phage
display
12

13. Les souris transgéniques:
13

14. Phage display14

15. Mode d’action
15

16. Mode d’action des anticorps monoclonaux:
• Les anticorps monoclonaux peuvent fonctionner selon trois
principaux modes d’action :
1
• blocage
2
• signalisation
3
• ciblage
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17. signalisation
ciblage
blocage
CDC
ADCC
17

18. phagocytose18

19. Production des AcM
19

20. Production des anticorps monoclonaux
(in vitro /in vivo )
Afin de produire des lignées stables de cellules produisant l'anticorps désiré,
Kohler et Milstein ont élaboré l'idée et la méthode de fusion de deux types de
cellules. Ainsi, des cellules B (produisant les anticorps), dont l'incapacité de se
reproduire est palliée par des myélomes (des cellules cancéreuses immortelles)
résulte en un hybridome secrétant des anticorps et ayant à la fois la propriété de
se reproduire indéfiniment.
20

21. FUSION
DES
CELLULES
SELECTION
DES
HYBRIDOMES
ISOLEMENT
DES
HYBRIDOMES
TEST
DES
HYBRIDOMES
PRODUCTION
DES
HYBRIDOMES
déroulement de la production des hybridomes
OBTENTION
DES
CELLULES
21

22. la fusion : formation d’hybridome
Fusion chimique:
En présence de
polyéthylène-glycol
(PEG), ce qui favorise
la fusion des
membranes,
Fusion physique:
fusion des
membrane par
Electroporation
22

23. La sélection des hybridomes
Lymphocyte B
HGPRT+
Cellule myélomateuse
HGPRT-
HYBRIDOME
SELECTIONNE
Mort cellulaire
Disparition aprés quelques
divisions
MORT CELLULAIRE
Impossibilité de se diviser
Fusion des des cellules
Milieu HAT
23

24. Sur milieu gélosé Par dilution limite
Une colonie = une cellule
initiale
Une cellule par puit
On visualise directement les
colonies cellulaires dans
l ’agar, que l ’on remet en
culture après dilution
Clonage:
Test sur le surnageant de chaque puit:
-La présence des ACM par la méthode d’ELISA
-Type d’AC produit par la méthode
d’immunoprécipitation
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25. Amplification des ACM
Cultiver "industriellement"
les cellules ( in vitro ) dont
la production d'anticorps est
modeste (1 μg/ml).
Cultiver les cellules in vivo, en injectant la cellule
dans la cavité péritonéale de la souris : une tumeur
se développe et on prélève le liquide d'ascite, qui
contient 1 à 10 mg/ml d'anticorps monoclonal,
soit 1000 fois plus.
Production en ascites des anticorps monoclonaux
(in vivo )
la culture des hybridomes(in vitro):
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26. Purification et conservation des anticorps monoclonaux
La conservation des anticorps monoclonaux est
obtenue par congélation d’une partie du clone dans
une ampoule placée dans l’azote liquide. L’autre
partie du clone est maintenue en activité ; sa durée de
vie est de plus de 20 ans.
La purification peut se faire de différentes manières,
comme par exemple la chromatographie par filtration
sur gel, chromatographie par échange d’ions ou par
précipitation au sulfate d’ammonium.
26

27. Utilisation des AcM
27

28. Anti IgE:
Thérapie par les anticorps monoclonaux
28

29. 29

30. Anti CD20:
30

31. Mécanisme d’action.
31

32. Anti HER2
32

33. Anti VEGF
33

34. Anti Tn
Tn est exprimé à la surface des cellules
tumorales.
Tn n’est pas détecté dans les cellules normales.
 Les AcM anti-Tn possèdent l’avantage de cibler uniquement
les cellules tumorales
 L’AcM Chi-Tn n’affecte pas la viabilité et la prolifération des
cellules tumorales in vitro
 L’AcM Chi-Tn inhibe la croissance des cellules tumorales in
vivo par un mécanisme dépendant des récepteurs FcγR
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35. Diagnostic des infections respiratoires :
Recherche des antigène viraux dans les cellules du nez , la
gorge.
Les virus s’accumulent dans le cytoplasme des cellules
infectée.
Visualisation des antigènes viraux par immunofluorescence.
diagnostic
35

36. 36

37. Recherche des anticorps : sérologie virale:
ELISA
agglutination
western blot et immunoblot
37

38. 38

39. Les effets secondaires :
 Une hausse de la pression artérielle.
 Des maux de tête.
 Une présence de protéine dans les urines.
 Des réactions allergiques.
 Une confusion.
 Des douleurs musculaires légères.
 La formation de caillots de sang (rare)
 Une perforation de l’intestin (rare).
N.B: Ces effets secondaires sont temporaires et disparaissent à la
fin du traitement.
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40. Pharmacologie:
L'administration se fait par voie parentérale
(intraveineuse, sous-cutanée ou intramusculaire)
 Les anticorps monoclonaux diffusent dans tout
l'organisme mais ne passent pas la barrière hémato-
encéphalique.
L'élimination se fait soit après fixation à l'antigène
cible (endocytose du complexe anticorps-antigène et
dégradation par les lysozomes), soit de manière non
spécifique par le système réticulo-endothélial.
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41. Biosimilaire des AcM
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42. ACM biosimilaires:
En 2011 aucun anticorps monoclonal biosimilaire n’étaient autorisé
mais elle ne représentent actuellement que 1% du marché des produits
biologiques au niveau mondial et leur croissance reste conditionnée
par plusieurs facteurs.
Comme pour tout médicament issu des biotechnologie, il est
possible de développer un ACM biosimilaire à un ACM de référence.
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43. Exemple des ACM biosimilaires
 Reditux est un biosimilaire de rituximab (Mabthera ™) approuvé
en Inde en 2007.
 Clotinab est un biosimilaire de abciximab est approuvé en Corée
du Sud.
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44. Commertilisation des ACM
La commercialisation du premier anticorps monoclonal remonte à 1986.
Evalué à 18 milliards de dollars en 2006, le marché des anticorps monoclonaux avait
atteint 40 milliards en 2010.
Sur la période 2010- 2016, le taux de croissance annuel moyen devrait dépasser les 8%,
ce qui en fait le segment le plus dynamique du marché des médicaments.
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45.  Au niveau de l'Institut Pasteur d'Algérie dés 1996, les
chercheurs ont crée le Laboratoire de Biochimie des
Antigènes et anticorps monoclonaux
Les ACM en Algérie
45

46. conclusion
46

47. Le succès des ACM est le résultat d’un long cheminement depuis la
découverte de leur technique de fabrication.
Les anticorps monoclonaux sont donc une voie d'avenir précieuse
notamment pour des pathologies qui n'ont pas de traitement ou des
traitements peu satisfaisants. Certains sont aujourd'hui en cours de
développement notamment dans le rejet de greffe de rein, les leucémies
aiguës myéloïdes et les leucémies lymphoïdes chroniques.
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