2. Introduction:
Les blots sont des techniques de transfert d'ADN, d'ARN
et de protéines sur un support de sorte qu'ils peuvent
être séparés
C'est une technique indirecte d'hybridation de l'ADN
mise au point en 1975 par le biochimiste Edwrad
Southern.
La technique est connue comme le transfert d'ADN ou
«Southern blot »
Le Southern est une technique longue qui est la base de
l'essor de la biologie moléculaire mais qui est souvent
remplacée par la PCR.
3. Le but de southern blot:
Elle permet de détecter une séquence
d'ADN génomique dite unique
Cette technique permet de localiser
une séquence d’ADN parmi les
fragments ayant migrés, grâce à une
sonde marquée
4. Principe :
La clé de ce procédé est l'hybridation.
Hybridation: Il est le processus de formation
d'une molécule d'ADN double brin entre une
sonde d'ADN simple brin et un ADN cible
simple brin.
Il ya 2 éléments importants de l'hybridation:
◦ Les réactions sont spécifiques à des sondes vont
seulement se lier à des cibles avec une
séquence complémentaire.
◦ La sonde peut trouver une molécule de cible
dans un mélange de millions de molécules
apparentées mais non complémentaires.
5. Protocole :
Extraction de l’ ADN
Restriction de l’ADN
l’électrophorése
Transfert
Hybridation
autoradiographie
7. EXTRACTION D’ADN:
Traitement par l’ARNase
PouréliminerlesARNs
précipitation de l’ADN
=addition d'éthanol ou d'isopropanol dans la phase aqueuse
déprotéinisationde la solution
=extraction / solvants organiques, en général du phénol +/-
chloroforme
Lyse des cellules ou des tissus
=broyage ou pas + extraction/détergents
15. Champ d’application :
Pour identifier l'ADN spécifique dans un
échantillon d'ADN
Pour isoler l'ADN désiré pour la construction
d'ADNr
Identifier les mutations, délétions et des
réarrangements de gènes
Utilisé dans le pronostic du cancer,EX:MYCN
Le diagnostic de VIH-1 et les maladies
infectieuses
Dans RFLP Restriction Fragment Length
Polymorphism:
Dans empreintes génétiques
le diagnostic prénatal et des maladies
génétiques