SlideShare une entreprise Scribd logo
1  sur  27
Page 1Free Powerpoint Templates
UNIVERSITE CADI AYYAD
FACULTE DES SCIENCES SEMLALIA -
MARRAKECH
Département de Chimie
2014/2015
Préparé par :
Ahmed AIT KHOUYA
Idir BENAISSA
Encadré par:
Mr. Aziz BENYAICH
Page 2
Page 3
Plan:
Définition d’électrophorèse
L’Histoire d’électrophorèse
Principe d’électrophorèse
Différents types d’électrophorèse
Les application de l’électrophorèse
Page 4
L'électrophorèse est une technique permettant la
séparation de molécules porteuses de charges
électriques comme les acides aminés, les
protéines, les acides nucléiques dont l'ADN...
Page 5
Cette technique a été imaginée en 1892 par S.E. Linder et H. Picton qui sont
inspirés des travaux d’Hermann Von Helmholtz sur l’électro-osmose. En effet,
ce dernier constata qu’il était possible de déplacer des particules chargées
sous l’effet d’un champ électrique.
Page 6
Page 7
Principe
Le principe consiste à soumettre un mélange de
molécules à un champ électrique ce qui entraine la
migration des molécules chargées. En fonction de
différents paramètres (charge, masse, forme, nature
du support, conditions physico-chimiques) la vitesse
de migration va être variable, ce qui permet la
séparation des différentes molécules.
Page 8
Les différents types d’électrophorèse
électrophorèse en veine liquide
Le champ électrique est fourni par un
générateur de courant continu. Le support de
ce champ est constitué par une solution
tampon de pH et de concentration
convenables dont les ions conduisent le
courant d'un pôle à un autre.
Page 9
Electrophorèse de zone
On distingue plusieurs types électrophorèse de zone:
 Sur Papier
Il servait surtout à séparer des acides aminés ou d'autres
petites molécules chargées. Le dépôt et la migration des
échantillons se font en surface. Puis détermination du point
isoélectrique d’un acide aminé. On a une mesure de mobilité
par détermination de mobilité d’un acide aminé à différent
pH
Page 10
 acétate de cellulose
l'agarose est utilisé à des concentrations de 0,5 % à 2
% (masse/volume) et permet de séparer des molécules
de très grande taille, principalement de l'ADN ou de
l'ARN.
Page 11
 Electrophorèse sur gel
L'électrophorèse en gel d'agarose
est une technique de base au
laboratoire de biologie moléculaire.
Elle est utilisée
•Soit à des fins analytiques: pour
séparer et identifier des fragments
d'ADN, pour déterminer leur taille,
pour en estimer la quantité,
•Soit à des fins préparatoires, pour
purifier un fragment d'ADN de
taille connue.
Page 12
 Sur gel de polyacrylamide
C'est une méthode très fine de séparation par simple électrophorèse sur support. Est
réalisée en présence de SDS
Page 13
Révélation des protéines
séparées présentant un gel par
coloration avec comme colorant
possible :
•le bleu noir naphtol
•le nitrate d'argent (qui est plus
sensible)
•le bleu de Coomasie
Ex : Gel coloré au bleu de Coomassie
Page 14
 Électrophorèse en champ pulsé
en utilisant un champ électrique discontinu ou bien en modifiant périodiquement la
direction du champ. Dans ces conditions, le temps mis par la molécule d'ADN pour
se positionner dépend de sa longueur. Ainsi, une molécule d'ADN très longue (2
000 kb) passera plus de temps à se réorienter qu'à se déplacer, tandis qu'une plus
petite molécule (200 kb) passera plus de temps à migrer. Le repérage des
fragments, après leur positionnement, fait appel à la technique d'hybridation
moléculaire.
Page 15
 Electrophorèse bidimensionnelle
Lorsqu'il est existé des bandes protéiques très proches, on a un
chevauchement. Par les méthodes unidimensionnelles la résolution et
bon pour moins de 50 protéines. Grâce à l'électrophorèse
bidimensionnelle, on combine deux modes de séparation différents. La
résolution peut être appliquée pour plus de 1000 protéines différentes.
Page 16
Electrophorèse bidimensionnelle
Selon le pHi (modifications de la charge )
focalisation isoélectrique
DIMENSION 1
DIMENSION 2
Selon le PM (durant cette migration, faite à un pH
où les anticorps sont électriquement neutres)
Page 17
Séparation des acides aminés
Séparation des protéines
Séparation des fragment d’ADN
Domaine d’industrie
Domaine médicale
Les application de l’ électrophorèse :
Page 18
pH > pHi
l'acide aminé a
une charge
globale négative
Anode
pH = pHi
l'acide aminé a
une charge
globale nulle
(zwitterion)
ne migre pas et
reste au point de
départ.
pH < pHi
l'acide aminé a
une charge
globale positive
Cathode
Séparation des acides aminés
Chaque acide aminé caractérisé par une valeur de pH isoélectrique, pHi
auquel les acides aminés sont électriquement neutres.
Page 19
Page 20
Electrophorèse des protéines (protéines sériques
comme exemple) :
Les protéines sériques sont des protéines contenues dans le sérum ou le plasma sanguin. Les
protéines sériques jouent différentes fonctions de transport, de défense de l'organisme.
Elle repose sur la capacité des protéines chargées à migrer au travers des pores d'un gel
lorsqu'on applique un courant électrique.
Principe :
Page 21
 2µl de sérum sont disposés dans un endroit
convenable de la bande d’acétate de cellulose imbibée
de tampon sodique de pH 8,6.
Technique :
 Les protéines chargés négativement à ce pH
lorsqu’elles sont soumises à un champs électrique se
déplacent vers l’anode (électrode positive) avec des
vitesses dépendant de leur charge.
Page 22
Détection d'anomalies immunitaires :
Sérum humain normal :
Page 23
Sérums pathologiques
Page 24
Électrophorèse de l’ADN (sur gel d'agarose) :
Page 25
Page 26
Page 27

Contenu connexe

Tendances

Cours 2 physiologie microbienne
Cours 2 physiologie microbienne Cours 2 physiologie microbienne
Cours 2 physiologie microbienne SenouciKhadidja
 
Les examens bactériologiques
Les examens bactériologiquesLes examens bactériologiques
Les examens bactériologiquesMeriamme Oue
 
PCR : Polymerase chain reaction : classique et en temps réel
PCR : Polymerase chain reaction : classique et en temps réelPCR : Polymerase chain reaction : classique et en temps réel
PCR : Polymerase chain reaction : classique et en temps réelNadia Terranti
 
Tp1 industriel :criblage des souches productrices des substances antibectérie...
Tp1 industriel :criblage des souches productrices des substances antibectérie...Tp1 industriel :criblage des souches productrices des substances antibectérie...
Tp1 industriel :criblage des souches productrices des substances antibectérie...sara saidi
 
La Chimie des urines
La Chimie des urinesLa Chimie des urines
La Chimie des urinesS/Abdessemed
 
Cours de techniques d'analyse
Cours de techniques d'analyseCours de techniques d'analyse
Cours de techniques d'analyseFaiza Hamini
 
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiquesRéaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiquesAsmae LGUENSAT
 
Tout sur la bactériologie
Tout sur la bactériologieTout sur la bactériologie
Tout sur la bactériologieS/Abdessemed
 
la Culture cellulaire
 la Culture cellulaire la Culture cellulaire
la Culture cellulaireabir
 
Copie de Etudes_Biomoles_S6.pptx
Copie de Etudes_Biomoles_S6.pptxCopie de Etudes_Biomoles_S6.pptx
Copie de Etudes_Biomoles_S6.pptxMedMohamed35
 
Les milieux de culture en Bactériologie
 Les milieux de culture en Bactériologie Les milieux de culture en Bactériologie
Les milieux de culture en BactériologieS/Abdessemed
 
La vitesse de sédimentation (méthode de westergren)
La vitesse de sédimentation (méthode de westergren)La vitesse de sédimentation (méthode de westergren)
La vitesse de sédimentation (méthode de westergren)S/Abdessemed
 
Rapport de stage final(eau)
Rapport de stage final(eau)Rapport de stage final(eau)
Rapport de stage final(eau)mejdida
 
8. LES TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES.pptx
8. LES TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES.pptx8. LES TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES.pptx
8. LES TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES.pptxMohamedHATRAF
 
Metabolisme des lipides
Metabolisme des lipidesMetabolisme des lipides
Metabolisme des lipideskillua zoldyck
 
Exposeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeee
ExposeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeExposeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeee
ExposeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeMiraj Microbio
 
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTIONDIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTIONDr Taoufik Djerboua
 

Tendances (20)

Cours 2 physiologie microbienne
Cours 2 physiologie microbienne Cours 2 physiologie microbienne
Cours 2 physiologie microbienne
 
Cours Microbio
Cours Microbio Cours Microbio
Cours Microbio
 
Les examens bactériologiques
Les examens bactériologiquesLes examens bactériologiques
Les examens bactériologiques
 
PCR : Polymerase chain reaction : classique et en temps réel
PCR : Polymerase chain reaction : classique et en temps réelPCR : Polymerase chain reaction : classique et en temps réel
PCR : Polymerase chain reaction : classique et en temps réel
 
Tp1 industriel :criblage des souches productrices des substances antibectérie...
Tp1 industriel :criblage des souches productrices des substances antibectérie...Tp1 industriel :criblage des souches productrices des substances antibectérie...
Tp1 industriel :criblage des souches productrices des substances antibectérie...
 
La Chimie des urines
La Chimie des urinesLa Chimie des urines
La Chimie des urines
 
Cours de techniques d'analyse
Cours de techniques d'analyseCours de techniques d'analyse
Cours de techniques d'analyse
 
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiquesRéaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
 
Spectrophotomètre
SpectrophotomètreSpectrophotomètre
Spectrophotomètre
 
Tout sur la bactériologie
Tout sur la bactériologieTout sur la bactériologie
Tout sur la bactériologie
 
la Culture cellulaire
 la Culture cellulaire la Culture cellulaire
la Culture cellulaire
 
Copie de Etudes_Biomoles_S6.pptx
Copie de Etudes_Biomoles_S6.pptxCopie de Etudes_Biomoles_S6.pptx
Copie de Etudes_Biomoles_S6.pptx
 
Les milieux de culture en Bactériologie
 Les milieux de culture en Bactériologie Les milieux de culture en Bactériologie
Les milieux de culture en Bactériologie
 
La vitesse de sédimentation (méthode de westergren)
La vitesse de sédimentation (méthode de westergren)La vitesse de sédimentation (méthode de westergren)
La vitesse de sédimentation (méthode de westergren)
 
Rapport de stage final(eau)
Rapport de stage final(eau)Rapport de stage final(eau)
Rapport de stage final(eau)
 
8. LES TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES.pptx
8. LES TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES.pptx8. LES TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES.pptx
8. LES TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES.pptx
 
Metabolisme des lipides
Metabolisme des lipidesMetabolisme des lipides
Metabolisme des lipides
 
Exposeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeee
ExposeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeExposeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeee
Exposeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeee
 
5 les examens hématologiques
5 les examens hématologiques5 les examens hématologiques
5 les examens hématologiques
 
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTIONDIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
 

Similaire à L'éLectrophorèse et l'analyse medicale

Immuno Electochemical biosenseor
Immuno Electochemical biosenseorImmuno Electochemical biosenseor
Immuno Electochemical biosenseorMariem Khalfaoui
 
Reaction-Precipitation-Et-Agglutination.pdf
Reaction-Precipitation-Et-Agglutination.pdfReaction-Precipitation-Et-Agglutination.pdf
Reaction-Precipitation-Et-Agglutination.pdfabdallahnsr06
 
Republique algerienne democratique populaire 1
Republique algerienne democratique populaire 1Republique algerienne democratique populaire 1
Republique algerienne democratique populaire 1besmabachir
 
LES TECHNIQUES ET METHODES EN BIOLOGIE MEDICALES.pptx
LES TECHNIQUES ET METHODES EN BIOLOGIE MEDICALES.pptxLES TECHNIQUES ET METHODES EN BIOLOGIE MEDICALES.pptx
LES TECHNIQUES ET METHODES EN BIOLOGIE MEDICALES.pptxbouabid6
 
technique d'analyses par induction couplee plasma ICP.pdf
technique d'analyses par induction couplee plasma ICP.pdftechnique d'analyses par induction couplee plasma ICP.pdf
technique d'analyses par induction couplee plasma ICP.pdfhamido8
 

Similaire à L'éLectrophorèse et l'analyse medicale (8)

Immuno Electochemical biosenseor
Immuno Electochemical biosenseorImmuno Electochemical biosenseor
Immuno Electochemical biosenseor
 
Reaction-Precipitation-Et-Agglutination.pdf
Reaction-Precipitation-Et-Agglutination.pdfReaction-Precipitation-Et-Agglutination.pdf
Reaction-Precipitation-Et-Agglutination.pdf
 
Republique algerienne democratique populaire 1
Republique algerienne democratique populaire 1Republique algerienne democratique populaire 1
Republique algerienne democratique populaire 1
 
LES TECHNIQUES ET METHODES EN BIOLOGIE MEDICALES.pptx
LES TECHNIQUES ET METHODES EN BIOLOGIE MEDICALES.pptxLES TECHNIQUES ET METHODES EN BIOLOGIE MEDICALES.pptx
LES TECHNIQUES ET METHODES EN BIOLOGIE MEDICALES.pptx
 
technique d'analyses par induction couplee plasma ICP.pdf
technique d'analyses par induction couplee plasma ICP.pdftechnique d'analyses par induction couplee plasma ICP.pdf
technique d'analyses par induction couplee plasma ICP.pdf
 
Southern blot
Southern blotSouthern blot
Southern blot
 
éXposé omb
éXposé ombéXposé omb
éXposé omb
 
Clonage
ClonageClonage
Clonage
 

L'éLectrophorèse et l'analyse medicale

  • 1. Page 1Free Powerpoint Templates UNIVERSITE CADI AYYAD FACULTE DES SCIENCES SEMLALIA - MARRAKECH Département de Chimie 2014/2015 Préparé par : Ahmed AIT KHOUYA Idir BENAISSA Encadré par: Mr. Aziz BENYAICH
  • 3. Page 3 Plan: Définition d’électrophorèse L’Histoire d’électrophorèse Principe d’électrophorèse Différents types d’électrophorèse Les application de l’électrophorèse
  • 4. Page 4 L'électrophorèse est une technique permettant la séparation de molécules porteuses de charges électriques comme les acides aminés, les protéines, les acides nucléiques dont l'ADN...
  • 5. Page 5 Cette technique a été imaginée en 1892 par S.E. Linder et H. Picton qui sont inspirés des travaux d’Hermann Von Helmholtz sur l’électro-osmose. En effet, ce dernier constata qu’il était possible de déplacer des particules chargées sous l’effet d’un champ électrique.
  • 7. Page 7 Principe Le principe consiste à soumettre un mélange de molécules à un champ électrique ce qui entraine la migration des molécules chargées. En fonction de différents paramètres (charge, masse, forme, nature du support, conditions physico-chimiques) la vitesse de migration va être variable, ce qui permet la séparation des différentes molécules.
  • 8. Page 8 Les différents types d’électrophorèse électrophorèse en veine liquide Le champ électrique est fourni par un générateur de courant continu. Le support de ce champ est constitué par une solution tampon de pH et de concentration convenables dont les ions conduisent le courant d'un pôle à un autre.
  • 9. Page 9 Electrophorèse de zone On distingue plusieurs types électrophorèse de zone:  Sur Papier Il servait surtout à séparer des acides aminés ou d'autres petites molécules chargées. Le dépôt et la migration des échantillons se font en surface. Puis détermination du point isoélectrique d’un acide aminé. On a une mesure de mobilité par détermination de mobilité d’un acide aminé à différent pH
  • 10. Page 10  acétate de cellulose l'agarose est utilisé à des concentrations de 0,5 % à 2 % (masse/volume) et permet de séparer des molécules de très grande taille, principalement de l'ADN ou de l'ARN.
  • 11. Page 11  Electrophorèse sur gel L'électrophorèse en gel d'agarose est une technique de base au laboratoire de biologie moléculaire. Elle est utilisée •Soit à des fins analytiques: pour séparer et identifier des fragments d'ADN, pour déterminer leur taille, pour en estimer la quantité, •Soit à des fins préparatoires, pour purifier un fragment d'ADN de taille connue.
  • 12. Page 12  Sur gel de polyacrylamide C'est une méthode très fine de séparation par simple électrophorèse sur support. Est réalisée en présence de SDS
  • 13. Page 13 Révélation des protéines séparées présentant un gel par coloration avec comme colorant possible : •le bleu noir naphtol •le nitrate d'argent (qui est plus sensible) •le bleu de Coomasie Ex : Gel coloré au bleu de Coomassie
  • 14. Page 14  Électrophorèse en champ pulsé en utilisant un champ électrique discontinu ou bien en modifiant périodiquement la direction du champ. Dans ces conditions, le temps mis par la molécule d'ADN pour se positionner dépend de sa longueur. Ainsi, une molécule d'ADN très longue (2 000 kb) passera plus de temps à se réorienter qu'à se déplacer, tandis qu'une plus petite molécule (200 kb) passera plus de temps à migrer. Le repérage des fragments, après leur positionnement, fait appel à la technique d'hybridation moléculaire.
  • 15. Page 15  Electrophorèse bidimensionnelle Lorsqu'il est existé des bandes protéiques très proches, on a un chevauchement. Par les méthodes unidimensionnelles la résolution et bon pour moins de 50 protéines. Grâce à l'électrophorèse bidimensionnelle, on combine deux modes de séparation différents. La résolution peut être appliquée pour plus de 1000 protéines différentes.
  • 16. Page 16 Electrophorèse bidimensionnelle Selon le pHi (modifications de la charge ) focalisation isoélectrique DIMENSION 1 DIMENSION 2 Selon le PM (durant cette migration, faite à un pH où les anticorps sont électriquement neutres)
  • 17. Page 17 Séparation des acides aminés Séparation des protéines Séparation des fragment d’ADN Domaine d’industrie Domaine médicale Les application de l’ électrophorèse :
  • 18. Page 18 pH > pHi l'acide aminé a une charge globale négative Anode pH = pHi l'acide aminé a une charge globale nulle (zwitterion) ne migre pas et reste au point de départ. pH < pHi l'acide aminé a une charge globale positive Cathode Séparation des acides aminés Chaque acide aminé caractérisé par une valeur de pH isoélectrique, pHi auquel les acides aminés sont électriquement neutres.
  • 20. Page 20 Electrophorèse des protéines (protéines sériques comme exemple) : Les protéines sériques sont des protéines contenues dans le sérum ou le plasma sanguin. Les protéines sériques jouent différentes fonctions de transport, de défense de l'organisme. Elle repose sur la capacité des protéines chargées à migrer au travers des pores d'un gel lorsqu'on applique un courant électrique. Principe :
  • 21. Page 21  2µl de sérum sont disposés dans un endroit convenable de la bande d’acétate de cellulose imbibée de tampon sodique de pH 8,6. Technique :  Les protéines chargés négativement à ce pH lorsqu’elles sont soumises à un champs électrique se déplacent vers l’anode (électrode positive) avec des vitesses dépendant de leur charge.
  • 22. Page 22 Détection d'anomalies immunitaires : Sérum humain normal :
  • 24. Page 24 Électrophorèse de l’ADN (sur gel d'agarose) :