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Southern blot
Préparé par:
HAMIDOU Selma
HADJERSI Amina
Introduction:
 Les blots sont des techniques de transfert d'ADN, d'ARN
et de protéines sur un support de sorte qu'ils peuvent
être séparés
 C'est une technique indirecte d'hybridation de l'ADN
mise au point en 1975 par le biochimiste Edwrad
Southern.
 La technique est connue comme le transfert d'ADN ou
«Southern blot »
 Le Southern est une technique longue qui est la base de
l'essor de la biologie moléculaire mais qui est souvent
remplacée par la PCR.
Le but de southern blot:
 Elle permet de détecter une séquence
d'ADN génomique dite unique
 Cette technique permet de localiser
une séquence d’ADN parmi les
fragments ayant migrés, grâce à une
sonde marquée
Principe :
 La clé de ce procédé est l'hybridation.
Hybridation: Il est le processus de formation
d'une molécule d'ADN double brin entre une
sonde d'ADN simple brin et un ADN cible
simple brin.
 Il ya 2 éléments importants de l'hybridation:
◦ Les réactions sont spécifiques à des sondes vont
seulement se lier à des cibles avec une
séquence complémentaire.
◦ La sonde peut trouver une molécule de cible
dans un mélange de millions de molécules
apparentées mais non complémentaires.
Protocole :
 Extraction de l’ ADN
 Restriction de l’ADN
 l’électrophorése
 Transfert
 Hybridation
 autoradiographie
Les outils :
EXTRACTION D’ADN:
Traitement par l’ARNase
PouréliminerlesARNs
précipitation de l’ADN
=addition d'éthanol ou d'isopropanol dans la phase aqueuse
déprotéinisationde la solution
=extraction / solvants organiques, en général du phénol +/-
chloroforme
Lyse des cellules ou des tissus
=broyage ou pas + extraction/détergents
Restriction de l'ADN génomique:
Champ d’application :
 Pour identifier l'ADN spécifique dans un
échantillon d'ADN
 Pour isoler l'ADN désiré pour la construction
d'ADNr
 Identifier les mutations, délétions et des
réarrangements de gènes
 Utilisé dans le pronostic du cancer,EX:MYCN
 Le diagnostic de VIH-1 et les maladies
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 Dans RFLP Restriction Fragment Length
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 le diagnostic prénatal et des maladies
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Southern blot

  • 2. Introduction:  Les blots sont des techniques de transfert d'ADN, d'ARN et de protéines sur un support de sorte qu'ils peuvent être séparés  C'est une technique indirecte d'hybridation de l'ADN mise au point en 1975 par le biochimiste Edwrad Southern.  La technique est connue comme le transfert d'ADN ou «Southern blot »  Le Southern est une technique longue qui est la base de l'essor de la biologie moléculaire mais qui est souvent remplacée par la PCR.
  • 3. Le but de southern blot:  Elle permet de détecter une séquence d'ADN génomique dite unique  Cette technique permet de localiser une séquence d’ADN parmi les fragments ayant migrés, grâce à une sonde marquée
  • 4. Principe :  La clé de ce procédé est l'hybridation. Hybridation: Il est le processus de formation d'une molécule d'ADN double brin entre une sonde d'ADN simple brin et un ADN cible simple brin.  Il ya 2 éléments importants de l'hybridation: ◦ Les réactions sont spécifiques à des sondes vont seulement se lier à des cibles avec une séquence complémentaire. ◦ La sonde peut trouver une molécule de cible dans un mélange de millions de molécules apparentées mais non complémentaires.
  • 5. Protocole :  Extraction de l’ ADN  Restriction de l’ADN  l’électrophorése  Transfert  Hybridation  autoradiographie
  • 7. EXTRACTION D’ADN: Traitement par l’ARNase PouréliminerlesARNs précipitation de l’ADN =addition d'éthanol ou d'isopropanol dans la phase aqueuse déprotéinisationde la solution =extraction / solvants organiques, en général du phénol +/- chloroforme Lyse des cellules ou des tissus =broyage ou pas + extraction/détergents
  • 8. Restriction de l'ADN génomique:
  • 9.
  • 10.
  • 11.
  • 12.
  • 13.
  • 14.
  • 15. Champ d’application :  Pour identifier l'ADN spécifique dans un échantillon d'ADN  Pour isoler l'ADN désiré pour la construction d'ADNr  Identifier les mutations, délétions et des réarrangements de gènes  Utilisé dans le pronostic du cancer,EX:MYCN  Le diagnostic de VIH-1 et les maladies infectieuses  Dans RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism:  Dans empreintes génétiques  le diagnostic prénatal et des maladies génétiques

Notes de l'éditeur

  1. empreintes génétiques: