L'atelier sur le paludisme en 2007 a examiné la structure de l'ADN, ses techniques de génotypage, et l'importance de sa variabilité génétique pour le diagnostic et le contrôle du paludisme. Des méthodes comme l'hybridation, le séquençage, la PCR et le RFLP ont été discutées pour leur rôle dans l'identification des génotypes. Le génotypage s'avère essentiel pour améliorer les traitements, évaluer l'efficacité des programmes de lutte contre le paludisme et comprendre la dynamique épidémiologique.

1. Atelier Paludisme - IPM - 2007
ADN ET GENOTYPAGE
Razafinjato Célestin
INSPC ANTANANARIVO
MADAGASCAR
EVALUATION
par les FACILITATEURS

2. Atelier Paludisme - IPM - 2007
PLAN
• Définition et historique
• Rappel sur la structure de l’ADN
• Diversité
• Outils de génotypage
Hybridation
Séquençage
PCR
RFLP
• Paludisme et génotypage
• Conclusion

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Définition et historique (1)
• Acide désoxyribonucléique (ADN) : hérédité.
• Watson et Crick- 1953
• ADN: le support de l'information génétique :
• longues molécules agglomérées sous forme de
CHROMOSOMES
• Unité d’information(transcription) = gène.

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Définition et historique (2)
• Ensemble gènes = génome
• Génotype: forme allélique d’un gène(jeu de gène ).
• ADN = diverses formes.
• Génotypage = technique pour différencier les génotypes.

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Rappel sur la structure de l’ ADN (1)
• La biologie moléculaire permet d’explorer l’ADN par
diverses méthodes.
• Sa structure moléculaire
– sorte d'échelle constituée de 2 brins;
– une double chaîne de nucléotides en forme
hélicoïdale.

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Rappel sur la structure de l’ ADN (2)
L'ADN = 3 éléments:
• un groupe phosphate
• un sucre, le désoxyribose
• Les quatre nucléotides, sous-unités de l'ADN: 2 groupes de
bases azotées :
– les bases PURIQUES: guanine (G) et adénine (A),
– les bases PYRIMIDIQUES: cytosine (C) et thymine (T).

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Rappel sur la structure de l’ ADN (3)
La synthèse de l’ADN
Les protéines sont assemblés à partir des acides aminés en
fonction de l’information présente dans les gènes.
2.Etapes:
Transcription
Traduction
Chaque étapes a 3 phases:
– Initiation
– Élongation
– terminaison
• bases azotées attachées / liaisons faibles. cassées par une
enzyme l'ADN polymérase thermostable la chaîne ouverte 2
ADN (2 brins nouvellement formés)..

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http://fr.wikipedia.org/wiki/Image:R%C3%A9plicationdelADN.png

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Diversité (1)
• Le développement des techniques de biologie a permis
la mise en évidence d'une très importante variabilité de
l'ADN = polymorphisme.
• Le polymorphisme génétique a été défini comme
l'existence, dans un même génome, d’un gène sous
deux ou plusieurs formes alléliques.

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Diversité (2)
Génération du polymorphisme
– Mutations ponctuelles.
– Délétions et duplication.
– Conversion génique.
– Insertions de séquences mobiles.
– L'excision de boucles chromatiniennes.
– Le glissement intra-chromatidien (VNTR).
– Recombinaisons.

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Outils de génotypage (1)
• Hybridation:
– technique particulière d’hybridation moléculaire qui
permet de déterminer la ressemblance entre les
séquences de deux brins d’ADN que l’on veut
comparer.
– Degré de parenté
• Séquençage:
fragmentation d’un génome et vérifier l'ordre
d'enchaînement des nucléotides de l’ADN: détection
des maladies génétiques.

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Outils de génotypage (2)
PCR ou réaction de polymérisation en chaîne de l’ADN
la production de grandes quantités de l ’ADN en utilisant
une réaction enzymatique.
• l 'amplification in vitro de l'ADN.
• technique est basée sur la combinaison de 2 facteurs :
les propriétés de synthèse enzymatique et d’initiation.
• analyse quantitative et qualitative pour la détection du
polymorphisme génétique.
• utilisé en général pour diagnostic.

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Outils de génotypage (3)
RFLP ou polymorphisme de longueur des fragments de restriction:
• Couper l'ADN en morceaux, à l'aide d'enzyme de restriction :
– pour distinguer les unes des autres les molécules d’ADN,
– technique de laboratoire pour différencier ou comparer des
molécules d'ADN = empreintes génétiques et dans les tests de
paternité
séparation des fragments de restriction
ÉTAPES DE LA TECHNIQUE RFLP
extraction de l'ADN
hydrolyse de l'ADN
Dénaturation de l'ADN transfert sur membrane
renforcement de la fixation

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Outils de génotypage (4)
L’application :
Diagnostic.
Thérapie.
Dépistage systématique.
Médecine légale: Typage d’un individu, recherche criminelle, test
de paternité.
Organismes génétiquement modifiés en agronomie: plantes;Les
animaux.

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Le génotypage permet:
de déterminer l’efficacité thérapeutique (recrudescence
et nouvelle infection).
Ex: MSP 1- MSP2 ( PCR, hybridation, RFLP) .
de diagnostic pour le traitement adéquat.
analyse épidémiologique moléculaire (prévalence de tel
ou tel allèle ou génotype dans une région donnée).
de guider de stratégies de lutte contre le paludisme.
indicateur pour évaluer les programmes de lutte contre
le paludisme (diminution des clones parasitaires).
Paludisme et génotypage

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Conclusion
Génotypage :
– Diverses techniques puissantes.
– Amélioration de notre connaissance.
– Un outil très utile à la gestion de la santé de la population.
– Bon diagnostic pour traitement adéquat.
– Moyen de lutte efficace

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Référence
• http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/genophenotype/phenotype.html
• http://www.cns.fr/externe/Francais/Presentation/ADN_historique.ht
ml
• http://wcentre.tours.inra.fr/sfpar/bulletin/2000/affiches/thellier.htm
• http://www.pathexo.fr/pdf/Articles-bull/2004/2004n4/T97-4-2648-
2p.pdf
• http://fr.wikipedia.org/wiki/Adn
• http://www.proadn.com/fr/communique_communique_18

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