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Anticorps thérapeutiques
- 2. PLAN Introduction Historique Techniques de production Modesd’action Applications Cas particulier : Abzymes Conclusion
- 3. Depuis plusd’une vingtaine d’année les anticorps thérapeutiques ont permis de grandes avancées en recherche biomédicale . Ils sont très largement utilisés en biologie et en médecine, à la fois comme outils de diagnostic et dans des buts thérapeutiques.
- 4. macromolécules protéiques(PM > 150 000 Da) Issu d’ un clone unique de lymphocyte B Reconnaissent le même épitrope d’un antigène mélange d'anticorps reconnaissant différents épitopes sur un antigène donné sécrété par un clone de plasmocytes différent.
- 5. ACM ACP Temps etcout de fabrication Rapide et moins cher Lent et plus cher Reproductibilité Variable Constante Affinité Variable Constante Concentration et degré de pureté Faible Elevé Stabilité de pH Plus stable Moins stable Disponibilité Limitée Illimitée
- 6. Introduction Historique Techniques de production Modesd’action Applications Cas particulier : Abzymes Conclusion
- 7. 1891 1975 1984 1989 1994 Première révolution thérapeutique desanticorps par Paul Ehrlich Production des anticorps murins monoclonaux par KÖHLER et MILSTEIN anticorps chimériques monoclonaux Anticorps humanisés Anticorps humains balles magiques
- 8. Introduction Historique Techniques de production Modesd’action Applications Cas particulier : Abzymes Conclusion
- 9. Culture sur milieuHAT (Hypoxanthine Aminoptérine Thymidine) Méthodes D’IMMUNOPRECIPITATION Une ou zéro cellules par puit Par méthode PHYSIQUE Fusion des membranes cellulaires Par ELECTROPORATION HYBRIDOME SELECTIONNE Dès que la croissance est suffisante, il faut propager les cultures d'hybridomes productrices de l'anticorps désiré, les conserver et les cloner. Deux méthodes sont utilisées pour obtenir un clone à partir d'une cellule Conservation Des hybridomes Amplification des hybridomes La présence d’ANTICORPS MONOCLONAUX Type D’ANTICORPS produits Test sur le surnageant de chaque puie Méthode ELISA Sur milieu gélosé Par dilution limite Une colonie = une cellule initiale Lymphocyte BPar méthode CHIMIQUE Fusion des membranes Cellulaires avec du PEG (poly éthylène glycol) IMMUNISATION DE LA SOURIS AVEC L’ANTIGÈNE ÉTUDIÉ produits par la technique des Hybridomes Cellule myélomateuse MORT CELLULAIRE disparition après quelques divisions MORT CELLULAIRE Impossibilité de se diviser OBTENTION DES ANTICORPS MONOCLONAUX Production dans les liquides d'ascites Production par cultures cellulaires Les premiers anticorps développés.
- 10. correspond àla greffe des parties variables (VH et VL) d’un anticorps murin sur les parties constantes des chaines lourdes et légères (CH et CL) d’anticorps humain humains a 60%
- 11. correspond àla greffe des parties hypervariables (CDR)) d’un Anticorps murin sur une immunoglobuline (Ig) humaine. humain a 90% Ils sont mieux tolérés par l’organisme. Une demi-vie plus longue
- 12. Immortalisation descellules B mémoires humaines Techniques des phages display Techniques des souris transgéniques
- 16. Introduction Historique Techniques de production Modesd’action Applications Cas particulier : Abzymes Conclusion
- 17. Toxine Cellule cible Anticorps thérapeutiquesneutralisants
- 18. Ex. Infliximab •Chimérique •Anticorps monoclonalIgG1 •Liaison TNF-alpha : grande specificité et affinité Traitement de la polyarthrite rhumatoïde et de la maladie de Crohn
- 19. Cytotoxicité cellulaire dépendantedes anticorps(ADCC) l'interaction domaine Fc-récepteurs FcγRs FcγR : trois sous-groupes FcγRI (CD64), FcγRIIa, b, c (CD32a, b, c) FcγRIIIa, b (CD16a, b), Cellule dendritique
- 20. • Anticorps antiCD 20 • Chimérique • Spécifique des cellules B, par intermédiaire du CD 20 • Toxicité faible • Activité importante dans les lymphomes B folliculaires et le rejet humoral de greffe • Induction de l’apoptose (voies de signalisation) + Activation de l’ADCC et CDC • Très prometteur Signalisation Ex. Rituximab
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- 23. Introduction Historique Techniques de production Modesd’action Applications Cas particulier : Abzymes Conclusion
- 24. Applications • Immunologie fondamentale –Etude des lignées cellulaires – Etude des marqueurs des cellules non lymphocytaire – Etudes des cellules pathologiques – Protéomique – Drug discovery • Thérapie – Traitement de cancer (cancer du sein) – Traitement des rejets de greffes – Anticorps catalytiques : enzymothérapie – Vaccin ? • Fusion avec de nombreux ligands – Radioisotopes Imagerie médicale (RAIT) – Enzymes Thérapie – Toxines Destruction de cellules (Immuntoxines) – Virus Thérapie génique – Lipides Libération de médicaments – Biocapteurs Détection en temps réel • Diagnostic Chromatographie – Phénotypage – Cytométrie en flux – Imagerie médicale – Ligands pour la chromatographie
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- 27. Introduction Historique Techniques de production Modesd’action Applications Cas particulier : Abzymes Conclusion
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- 29. Genèse d’anticorps catalytiques: la voie des TSA
- 30. Genèse d’anticorps catalytiques: exploitation du réseau idiotypique
- 31. Exploitation du potentieldes anticorps catalytiques Protection contre le VIH Lutte contre la maladie d’ Alzheimer Lutte contre l’addiction Application en oncologie avec l’adaptation du système ADEPT (pour Antibody Directed Enzyme Prodrug Therapy). Cette stratégie à été nommée ADAPT (pour Antibody Directed Abzyme Prodrug Therapy)
- 32. Introduction Historique Techniques de production Modesd’action Applications Cas particulier : Abzymes Conclusion
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Notes de l'éditeur
- #14 Les cellules B mémoires (CD22 + IgM, IgD, IgA) sont isolées à partir de cellules mononuclées du sang périphérique, Elles sont immortalisées par l'EBV en présence d'oligodésoxynucléotide CpG qui stimulent la prolifération lymphocytaire B par l’intermédiaire des récepteurs TLR9. Les surnageants de cultures sont ensuite testés afin de sélectionner les clones cellulaires produisant des anticorps humains spécifiques de la cible d’intérêt.
- #15 Introduction des genes humaines des igG pour obtenir des souris transgéniques possèdant à la place des loci de gènes d’immunoglobulines murines des loci de gènes d’immunoglobulines humaines. après immunisation avec un antigène-cible on va récupérer les LB et les fusionnées aves des cellules myeloides pour obtenir des hybridomes. Après les étapes de criblage et de sélection, des hybridomes humains sont obtenus. Des étapes de clonage par dilution limite permettent alors de produire un anticorps monoclonal contre l’antigène d’intérêt.