Les anticorps monoclonaux (mAb) sont produits par des lymphocytes B identiques et sont essentiels dans le traitement ciblé de diverses maladies, améliorant l'efficacité tout en réduisant les effets indésirables. La production de mAb implique la technologie des hybridomes, qui combine des lymphocytes B avec des cellules de myélome pour créer des cellules qui se divisent indéfiniment et produisent des anticorps spécifiques. Pour surmonter les problèmes d'immunogénicité des mAb murins, des anticorps chimériques et humanisés ont été développés, offrant de meilleures réponses thérapeutiques avec moins d'effets secondaires.

1. LES ANTICORPS
MONOCLONAUX
Dr A. NOURI

2. ANTICORPS MONOCLONAUX
➤ Les anticorps monoclonaux (Mab)
sont des anticorps identiques entre
eux car ils sont produits par des
lymphocytes B identiques. Ces LB sont
des clones d’une même cellule mère.
➤ Mab font partie intégrante de
l'approche thérapeutique ciblée pour
diverses maladies, ce qui entraîne une
diminution des effets indésirables et
une augmentation de l’efficacité.
➤ Mab ciblent divers récepteurs et
déterminants de la surface cellulaire,
altérant ainsi ses fonctions vitales et
causant sa sénescence par différents
mécanismes.

5. FONCTIONS DE L’ANTICORPS
Deux majeures fonctions:
•Reconnaitre et se lier a l’antigène.
•Induire une réaction immunitaire après la liaison.
La région variable assure la liaison:
•Affinité élevée pour l’antigène.
•Spécificité absolue pour l’antigène.
La partie constante interagit avec le système immunitaire après la liaison:
•Les différents Fc génèrent des isotopes différents.
•Les isotopes différents des Ac ont des propriétés différentes.

6. PRODUCTION DES ANTICORPS MONOCLONAUX
➤ 1980: le premier succès dans la formation de Mab humains
avec une spécificité prédéfinie via la fusion de LB de la rate
humaines avec des cellules de myélome humain.
➤ Dans le myélome, les cellules plasmatiques deviennent
anormales, se multiplient de façon incontrôlable et libèrent
un seul type d'anticorps connu sous le nom paraprotéine, qui
n'a aucune spécificité antigenique.
➤ C’est “la technologie des hybridomes”

7. Technologie conventionnelle des hybridomes

8. 1- IMMUNISATION
➤ Les souris sont immunisées plusieurs fois avec une préparation (antigène+adjuvant).
➤ L’antigène peut être une cellule entière, un fragment de membrane ou bien un
complexe de molécules.
➤ Un dépistage des sérums de souris est réalisé a la recherche d’anticorps a haute
affinité et spécificité a l’antigène.
➤ Lorsqu'un titre suffisant est atteint, les souris sont euthanasiées et la rate est
récupérée en tant que source de cellules pour la fusion cellulaire

9. 2- SÉLECTION DES LB DE LA RATE ET LES CELLULES DU MYELOME
➤ les cellules de myélome sont des LB
immortalisées avec un pouvoir de
division continu.
➤ cultivées dans un milieu contenant
8-azaguanine pour assurer le caractère
hypoxanthine guanine
phosphoribosyl transferase-négatif
(HGPRT-).
➤ les cellules HGPRT+ intègrent 8-
azaguanine dans leur ADN via la
synthese de-novo des nucleotides= mort
cellulaire.
➤ les cellules HGPRT- recyclent les
rhibonucleotides du milieu et survivent.

10. 3- HYBRIDATION DES CELLULES DU MYÉLOME AVEC LES LB SPÉCIFIQUES
➤ les LB de la rate sont fusionnés avec
les LB myelome via une co-
centrifugation en présence de
PolyEthylene Glycol (PEG).
➤ PEG permiabilise les membranes
cellulaires et facilite la fusion des
noyaux.
➤ l’excès d’ADN est éliminé.

11. 4- SÉLECTION DES HYBRIDOMES
➤ le milieu HAT (hypoxanthine aminopterin thymidine medium) est utilisé pour la
sélection des cellules fusionnées.
➤ dans HAT la synthèse de novo des nucleotides est est permise, le recyclage est bloqué.
➤ HGPRT- meurent car elles n’arrivent pas a fabriquer leurs acides nucléiques.
➤ les LB synthétisent l’ADN mais meurent par vieillissement.
➤ les hybridomes survivent dans HAT

12. 5- SÉLECTION DES HYBRIDOMES PRODUCTEURS DU MAB D’INTÉRÊT
➤ les hybridomes survivants sont cultivés individuellement: 1 cellule par
puis culture de clones.
➤ chaque cellule se divise en un clone de cellules identiques entre elles.
D’avantage de dépistage peut être entrepris afin d’identifier le clone
d’intérêt.

13. 6- DEPISTAGE DU MAB D’INTÉRÊT
➤ les cellules hybridomes sont mis en contact avec une plaque sensibilisée
avec l’Ag d’intérêt.
✴ Différents anticorps réagissent avec différents épitopes du même Ag.

14. 7- CULTURE DU CLONE D’INTÉRÊT
➤ les clones sécréteurs du Mab d’intérêt sont mis en culture de masse
pour la production et le stockage.

16. ““humanized” antibodies, antibodies
that look more human to the patient’s
immune system

17. ➤ Au début des années 1980 et 1990, la technologie des
hybridomes de souris pour le développement
d'anticorps monoclonaux était la principale source de
Mab.
➤ Cependant, comme cela a été démontré par plusieurs
Mab, l'utilisation d'anticorps de souris pour des
traitements humains a des problèmes importants avec
des réponses immunitaires contre “l’anticorps
antigène”.
PROBLÈMES DES MAB MURINS

18. PROBLÈMES DES MAB DE MURINS
•l’usage thérapeutique des Mab de
rongeurs chez l’humain est limité par
sont immunogenicité, sa durée de demi-
vie de circulation courte et l’incapacité a
déclencher les mécanismes effecteurs de
l’immunité
•les Mab murins causent des réactions
allergiques pares le premier contact,
pouvant aller au choque anaphylactique
suite a des contact ultérieurs.
•les Mab murins n’interagissent pas
efficacement avec les molécules
effectrices humaines: complément,
récepteurs Fc…

19. LES ANTICORPS CHIMÉRIQUES
➤ le développement du séquençage en
masse a permis de localiser la séquence
d’ADN responsable de la spécificité des
Ac (V-J).
➤ les Ac chimeriques sont obtenus par
l’association génétiques du fragment Fab
murin avec le fragment Fc humain.
➤ Fab: assure la reconnaissance spécifique
de l’antigène
➤ Fc: assure une activation efficace des
mecanismes de neutralisation et
d’élimination du système immunitaire
de l’hôte.
➤ Fc: considéré comme ‘soi’ et ne
déclenche pas de réactions immunitaires
anti-isotyoe

20. LES ANTICORPS CHIMÉRIQUES
‣Fab murin+ Fc humain
‣Réactions allergiques moins fréquentes et
d’anticorps
‣Mais anti-isotypiques ont été retrouvés

21. LES ANTICORPS CHIMÉRIQUES

22. LES ANTICORPS HUMANISÉS
‣d’autres avancées dans le séquençage de l’ADN ont permis
de déterminer la région hypervariable comme responsable
de la reconnaissance de l’antigène ( CDR:complimentary
determining region).

23. ‣les gènes de CDR de souris immunisées ont été clonés
associés aux gènes de la chaine lourde et la chaine légère
de l’anticorps humain.
‣rares réactions anti-anticorps sont enregistrées contre les
amrocorps humanisés.
‣ MAIS: apparition de réactions anti-idiotypiques
LES ANTICORPS HUMANISÉS

24. LES ANTICORPS HUMAINS La capacité de production
d'anticorps de ces souris a été
reconstituée en remplaçant
les gènes de la chaine lourde
et la chaine légère humaine
déjà réarrangées.
Ces souris chimériques sont
ensuite élevées pour établir
une ligne de souris
transgéniques pure portant
les Loci humains de la
chaîne lourde et légère.
L'immunisation de ces souris
conduit à la production d'un
anticorps humain spécifique

25. NOMENCLATURE
Suffix
Human: -umab
‣ Humanized: -zumab
‣ Murine: -momab
‣ Chimeric: -ximab

26. PHARMACOCENETIQUE DES MAB
➤ Voies d’administration:
✓ Sous cutanée (Rituximab, Trastuzumab, Adalimumab)
✓ Intramusculaire ( Palivizumab)
✓ Intraveineuse
• La voie intraveineuse est préférable pour une biodisponibilité de 100%.
‣ Voie d’élimination: la liaison aux cibles biologiques accélère l’elemination des
Mab. La dégradation par le système reticuloendoplasmique est la voie majeure
d’élimination..
‣ Demi-Vie:
➡ Mab chimerique: 5-15 jours
➡ Mab Humanisé: 3- 24 jours
➡ Mab humain: 11-30 jours

27. APPLICATIONS DES ANTICORPS MONOCLONAUX

28. Le système immunitaire ne reconnaît pas toujours les cellules cancéreuses
comme des antigènes étrangers.
Un anticorps monoclonal peut être dirigé pour s’attacher à certaines parties
d'une cellule cancéreuse. L'anticorps marque la cellule cancéreuse par
opsonisation et facilite l’élimination par le systeme immunitaire par
ADCC,CDCC, activation du complément, phagocytose dépendante du
complément….