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Département des sciences de vie
Module : biotechnologie animale
Plan :
• 1- les anticorps monoclonaux : vue générale
• 2-la technique d’hybridation cellulaire
A- Matériel biologique utilisé dans la technique d’hybridation
cellulaire
B-Etapes pré-hybridation cellulaire
C- la technique d’hybridation cellulaire,proproment dit.
D- étapes post-hybridation
• Les Anticorps monoclonaux sont une population
homogène d’anticorps issus d’un «seul et
unique» clone de cellules B.
• Ils sont :
Spécifiques
on peut diriger
l’anticorps vers un
épitope donné de la
protéine
Affines
on peut créer des
anticorps
extrêmement
affines
Production
massive et
constante
de ces anticorps
Des cellules B
extraites des
organes
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Des cellules
Myélomateu
ses
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s)
polyéthylène
glycol (PEG)
Facteurs
de
croissance
SVF Milieu
HAT
Et autres
A- Matériel utilisé dans la technique d’hybridation cellulaire:
• Immunisation :
 Les antigènes que l’on injecte à la souris pour créer
l’anticorps peuvent être des haptènes ou des protéines
porteuses.
Cette injection a pour effet de produire des plasmocytes
libérant des anticorps polyclonaux contre cet antigène
• Extraction des cellules B de la sourie
• Des partenaires de fusion:
Cellules B extraites d’organes lymphoïdes secondaires
(rate, ganglions)+ cellules myélomateuses ayant perdus
l’HGPRT ; Cette enzyme impliquée dans la synthèse des
nucléotides dans la voie de sauvetage
• Une méthode de fusion:
Nous allons utiliser soit la fusion chimique grâce à PEG
ou la Fusion physique qui se fait par électro fusion
• Sélection du milieu :
Nous devons sélectionner un milieu où l’on doit
retrouver du HAT (Hypoxanthine Aminopterine
Thymidine), des facteurs de croissance (IL6 b
mercaptoethanol), du sérum de veau fœtal, des
fibroblastes, sous atmosphère CO2 .
 Dans ces conditions, seuls les hybridomes se
développent à hauteur de 1 x 105 cellules/ml
• Le clonage :
• Il peut se faire par 2 méthodes:
Soit dans l’Agarose où l’on visualise directement les
colonies cellulaires dans l’agar, que l’on remet en culture
après dilution
Soit par dilution limite où le clonage est réalisé
directement dans une plaque de microtitration.
• Production :
Production en grande quantité : production en batch ou
microencapsulation
• Production en micro particules: technique de capture des
hydridomes dans des billes d’alginate sans
contamination et avec une purification simplifiée
D- étapes post-hybridation
Références:
• http://fr.wikipedia.org/wiki/Anticorps_monocl
onal
• http://coursl3bichat2012-
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Production des anticorps monoclonaux

  • 1. Département des sciences de vie Module : biotechnologie animale
  • 2. Plan : • 1- les anticorps monoclonaux : vue générale • 2-la technique d’hybridation cellulaire A- Matériel biologique utilisé dans la technique d’hybridation cellulaire B-Etapes pré-hybridation cellulaire C- la technique d’hybridation cellulaire,proproment dit. D- étapes post-hybridation
  • 3. • Les Anticorps monoclonaux sont une population homogène d’anticorps issus d’un «seul et unique» clone de cellules B. • Ils sont : Spécifiques on peut diriger l’anticorps vers un épitope donné de la protéine Affines on peut créer des anticorps extrêmement affines Production massive et constante de ces anticorps
  • 4. Des cellules B extraites des organes lymphatiques secondaires Des cellules Myélomateu ses (immortelle s) polyéthylène glycol (PEG) Facteurs de croissance SVF Milieu HAT Et autres A- Matériel utilisé dans la technique d’hybridation cellulaire:
  • 5. • Immunisation :  Les antigènes que l’on injecte à la souris pour créer l’anticorps peuvent être des haptènes ou des protéines porteuses. Cette injection a pour effet de produire des plasmocytes libérant des anticorps polyclonaux contre cet antigène • Extraction des cellules B de la sourie
  • 6. • Des partenaires de fusion: Cellules B extraites d’organes lymphoïdes secondaires (rate, ganglions)+ cellules myélomateuses ayant perdus l’HGPRT ; Cette enzyme impliquée dans la synthèse des nucléotides dans la voie de sauvetage • Une méthode de fusion: Nous allons utiliser soit la fusion chimique grâce à PEG ou la Fusion physique qui se fait par électro fusion
  • 7. • Sélection du milieu : Nous devons sélectionner un milieu où l’on doit retrouver du HAT (Hypoxanthine Aminopterine Thymidine), des facteurs de croissance (IL6 b mercaptoethanol), du sérum de veau fœtal, des fibroblastes, sous atmosphère CO2 .  Dans ces conditions, seuls les hybridomes se développent à hauteur de 1 x 105 cellules/ml
  • 8. • Le clonage : • Il peut se faire par 2 méthodes: Soit dans l’Agarose où l’on visualise directement les colonies cellulaires dans l’agar, que l’on remet en culture après dilution Soit par dilution limite où le clonage est réalisé directement dans une plaque de microtitration.
  • 9. • Production : Production en grande quantité : production en batch ou microencapsulation • Production en micro particules: technique de capture des hydridomes dans des billes d’alginate sans contamination et avec une purification simplifiée D- étapes post-hybridation