SlideShare une entreprise Scribd logo
Introduction
 La biotechnologie: Technologies
impliquant l’obtention et/ou l’utilisation
d’organismes génétiquement modifiés.
Introduction
 La Biotechnologies végétales:
Développement et utilisation de
techniques de cultures in vitro dans
différents domaines relatifs au végétal et
à l’amélioration variétale.
Introduction
 Les domaines abordés de la
biotechnologie végétale: Ensemble des
pratiques faisant appel aux cultures in
vitro de plantes et aux techniques de
biologie moléculaire dans les domaines
de l’agronomie, l’industrie et la recherche
fondamentale.
A Suivre…
 Totipotence de la cellule végétale
 Etapes callogenèse
 Techniques de culture in vitro de
 Balance hormonal et minérale
Totipotence
 Chez les plantes, la totipotence peut se
définir comme la propriété qu’ont
certaines cellules de pouvoir régénérer un
individu lorsqu’elles sont placées dans des
conditions appropriées, en passant
éventuellement par une étape de
dédifférenciation.
Pourquoi les cellules végétales
sont totipotentes ???
 Petit nombre de types cellulaires.
 Seulement 3 ou 4 types d’organes fondamentaux
(racine, tige, feuilles) dont les fleurs, vrilles, épines, fruits et
tubercules sont des dérivés.
 Grande plasticité génomique: la croissance peut
rester presque normale malgré de profonds
remaniements chromosomiques.
01
01
01
01
01
01
01
01
01
01
01
01
01
01
 Une hormone :est une molécule synthétisée par un
organisme et qui, à très faible concentration, va avoir
une action sur le développement de certains tissus de
cet organisme.
 les phytohormone: sont des Produits de types divers,
d’origine synthétique ou végétale (naturelle),qui
peuvent circuler plus ou moins loin selon le cas ,
susceptibles d’exercer une action physiologique sur le
végétal dont ils vont agir sur des cellules cibles
possédants les récepteurs qui leurs correspondants
 ils peuvent agir :
o sur la dimension des cellules : accélération de la
germination des graines, augmentation de croissance,
réduction de croissance.
o sur la multiplication des cellules : inhibition de la
germination, bouturage, mise à fleur.
o modification du métabolisme : augmentation de la
précocité, de la productivité, effets divers.
Parmi les principaux
phytohormone :
L’auxine
Les cytokinines
Les gibbérellines
•La synthèse de l'auxine s'effectue dans les apex méristématiques des
tiges, et dans les jeunes feuilles des bourgeons terminaux.
•Le transport de l'auxine s'effectue de façon polarisée, de l'apex vers
la base dans la tige par la sève
1)l’auxine
1.1)Mode de production des auxines
Site de production:
bourgeon apical
Diffusion des
hormones
•dominance apicale
• stimulation de la
rhizogenèse
-
1.2 ) role de l’auxine
 Elle inhibe les bourgeons qu’elle rencontre. ( dominance apicale )
 Elle stimule la croissance primaire ( en longueur des cellules de la
tige).
 Elle stimule la croissance secondaire ( en épaisseur ) en provoquant
la division des cellules du cambium et en influençant sur la
différenciation du xylème secondaire.
 Lorsque la plantule est jeune, la concentration en auxine arrivant
aux niveau de l’apex racinaire est forte et elle stimule la
rhyzogénèse .
 Puis en grandissant, la distance entre les bourgeons terminaux et les
racines augmente; La concentration en auxine diminue. Elle stimule
alors l’élongation des cellules au niveau de la racine.
 elles inhibent l'abscission (chute) des feuilles et des fruits.
 L'auxine induit également le phototropisme d'un végétal
 L’auxine synthétisée par les graines en
développement favorise la maturation du fruit.
 Variation de
l’élongation des
cellules de racine en
fonction de la
concentration en
auxine
Applications en culture in vitro
 A partir d’un vitro plant
 On coupe un fragment de tige
d’environ 1,5 cm portant 2 feuilles.
 Les feuilles sont enlevées en
prenant soin de laisser intact les
bourgeons axillaires.
On réalise 3 milieux de cultures
différents :
Milieu de culture Résultats
Milieu MS ½
Sans auxine
Pas d’enracinement
Milieu MS ½
Avec auxine 0,5 μmol.L-1
Formation de racine
Photo A
Milieu MS ½
Avec auxine 2 μmol.L-1
Formation d’un cal
Photo B
Photo A
Photo
B
2) Cytokine
Synthèse dans les racines puis migrent
dans la plante via la sève brute (xylème)
2.1)Mode de production des cytokinines
Site de production:
Racines
Transport vers les
sites d ’action :
- levée de dominance
apicale
- débourrement des
bourgeons axillaires
1.2 ) role de l’auxine
 Elle inhibe les bourgeons qu’elle rencontre. ( dominance apicale )
 Elle stimule la croissance primaire ( en longueur des cellules de la
tige).
 Elle stimule la croissance secondaire ( en épaisseur ) en provoquant
la division des cellules du cambium et en influençant sur la
différenciation du xylème secondaire.
 Lorsque la plantule est jeune, la concentration en auxine arrivant
aux niveau de l’apex racinaire est forte et elle stimule la
rhyzogénèse .
 Puis en grandissant, la distance entre les bourgeons terminaux et les
racines augmente; La concentration en auxine diminue. Elle stimule
alors l’élongation des cellules au niveau de la racine.
 elles inhibent l'abscission (chute) des feuilles et des fruits.
 L'auxine induit également le phototropisme d'un végétal
 L’auxine synthétisée par les graines en
développement favorise la maturation du fruit.
 Variation de
l’élongation des
cellules de racine en
fonction de la
concentration en
auxine
les effets de l’auxine dans la plante en
fonction de sa concentration
Elle stimule la rizhogénèse
à forte concentration
Elle stimule la
différenciation de
bourgeon à très faible
concentration
A forte concentration,
elle inhibe le
développement des
bourgeons = inhibition
apicale.
Elle inhibe la chute
des feuilles et des
fruits
Elle active la
formation de la chaire
des fruits
Elle active l’élongation
des racines mais à très
faible concentration.
Applications en culture in vitro
 A partir d’un vitro plant
 On coupe un fragment de tige
d’environ 1,5 cm portant 2 feuilles.
 Les feuilles sont enlevées en
prenant soin de laisser intact les
bourgeons axillaires.On réalise 3 milieux de cultures
différents :
Milieu de culture Résultats
Milieu MS ½
Sans auxine
Pas d’enracinement
Milieu MS ½
Avec auxine 0,5 μmol.L-1
Formation de racine
Photo A
Milieu MS ½
Avec auxine 2 μmol.L-1
Formation d’un cal
Photo B
Photo A
Photo
B
2) Cytokine
Synthèse dans les racines puis migrent
dans la plante via la sève brute (xylème)
2.1)Mode de production des cytokinines
Site de production:
Racines
Transport vers les
sites d ’action :
- levée de dominance
apicale
- débourrement des
bourgeons axillaires
2.2) rôle de cytokinines
 Stimule l’élongation cellulaire et l’organogenèse
 Les cytokinines en présence d'auxine stimulent la
division cellulaire, leur rôle précis portant sur la
duplication des chromosomes et le
recloisonnement cellulaire.
 Elles favorisent l'extension radiale des tiges et des
racines.
 Elles activent la production de chlorophylle
Expérience réalisée sur un morceau de parenchyme prélevé dans une tige
Culture sans aucun ajout d’hormone Les cellules deviennent très grosses
mais ne se divisent pas
+ cytokinines Pas d’effet
+ cytokinines + auxines Les cellules se divisent
Régulation de la dominance apicale :
L’auxine est fabriquée au niveau des
bourgeons terminaux
Les cytokinines sont fabriquées
au niveau de la racine
• Dans la tige, L’auxine
inhibe le développement
des bourgeons axillaires.
• Mais les cytokines
bloquent l’effet de l’auxine
qui arrive vers le bas.
• Les rameaux du bas se
développent en premier…
Et descend par le
phloème
Et remonte par le
xylème
• Dans la racine, Les
cytokinines inhibent la
formation de racines
secondaires,
• Mais l’auxine
bloquent l’effet des
cytokines.
• Les racines
secondaires les plus
3)Gibberllienes
 Les sites de synthèse des gibbérellines sont les jeunes
feuilles, les fruits, les graines, les apex des tiges et des
racines
 Elles ont une influence sur la levée ou interruption de la
dormance.
 elles interviennent sur l'initiation de la floraison et le
débourrement des bourgeons.
 Elles stimulent l’élongation des tiges et des limbes des
feuilles. Stimulation ainsi stimule la croissance internodale
 Elle stimule la germination des graines.
 Elle stimule la maturation des fruits.
 Inhibition de la croissance racinaire à la lumière et
Favorise au contraire la croissance racinaire à l’obscurité
BALANCE HORMONALE
 Les auxines et les cytokinines sont les plus
importantes, elles assurent le
grandissement et l’activité mitotique;
dont le rapport auxines / cytokinines
détermine le devenir des tissus en culture
Auxine
cytokinines
Faible Intermédiaire
Forte
Caulogenèse
(formation
des feuilles et
tige )
Callogeèse
(formation
des cals
:amas de
cellule non
différencie)
Rhizogenése
(formation
des racines)
Le rapport des concentrations des 2
hormones a son importance
-Pour se développer et fructifier, une plante a besoin d'eau, de
lumière et d'éléments nutritifs.
- Elle fabrique sa matière organique à partir de sels minéraux, d'eau
et de gaz carbonique (CO2) en exploitant l'énergie solaire : c'est le
phénomène de la photosynthèse.
- Elle puise dans le sol les éléments minéraux et l'eau, nécessaires à
sa croissance. Les principaux éléments nutritifs dont elle a besoin
pour sa croissance sont l'azote, le phosphore et la potassium,
désignés respectivement par leurs symboles chimiques : N, P, K.
Il y a des éléments minéraux qui constituent environ 1% de la
matière sèche de la plante comme le manganèse (Mn), fer (Fe),
cuivre (Cu) … ; sont les microéléments ou oligoéléments
L’azote (N):
 L’azote (N) est l'engrais de la croissance :
il participe au développement du
feuillage et des parties aériennes des
plantes. Si les plantes manquent d’azote,
elles sont lentes à se développer, leur
feuillage est vert clair ou jaunâtre.
Le phosphore (P):
 Le phosphore (P) stimule le
développement des racines, la floraison
et la fructification. Si les plantes manquent
de phosphore, leur feuillage est foncé,
rouge ou marqué de taches rouges, la
floraison est peu abondante et la
maturation des fruits est longue.
Le Potassium (k):
 Le potassium (K) est utile à la circulation de la sève
et à l’assimilation des éléments nutritifs par les
plantes. Il améliore leur résistance au gel, aux
ravageurs et maladies, ainsi que la couleur et la
qualité gustative des fruits.
Genre Fragaria
Nombre d’espèces Une cinquantaine
Ploïdie diploïde, tétraploïde,
hexaploïde et
Octoploïde
Nombre
chromosomique de
base
7 chromosomes
Espèce Fragaria X ananassa Duch
Ploïdie octoploïde (2n =8x =
56)
issu d’un hybride spontané entre deux espèces
octoploïdes
originaires d’Amérique : Fragaria chiloensis Duch.
et F. virginiana L
Culture in vitro
 La technique in vitro est un mode de
multiplication végétative artificielle des
plantes.
 Il s’agit d’un ensemble de méthodes
faisant intervenir d'une part l'asepsie
(stérilisation du matériel, désinfection des
explants)
 d'autre part des conditions de culture parfaitement
contrôlées (milieux de culture définis pour chaque
type de plante, température, lumière, humidité,...)
Milieu Knop: Milieu MS:
 La solution de Knop (ou
liquide de Knop) a été
inventée par le chimiste
allemand wilhelm Knop
(1817-1891).
 Utilisé plus particulièrement
dans la culture des plantes
à chlorophylle.
 Il existe différentes types.
Ces différentes solutions ne
possèdent pas de source de
carbone. Elles permettent
d'expérimenter les
exigences des plantes en
faveur de tel ou tel élément
non carbonaté
 Le milieu de Murashige
et Skoog (ou Milieu MS
ou MSO).
 inventé par les
physiologistes
végétalistes Toshio
murashige et Folke K
Skoog.
 utilisé dans les
laboratoires de biologie
végétale pour la culture
de cellules ou de tissus
de plantes.
Liquide de Knop complet:
 1 g de nitrate de calcium
 0,25 g de nitrate de potassium
 0,25 g de sulfate de magnésium
 0,25 g de phosphate monopotassique ou
dihydrogénophosphate
 0,05 g de sulfate ferrique
 1000ml d'eau distillée
Liquide de Knop sans phosphate:
 1 g de nitrate de calcium
 0,5 g de nitrate de potassium
 0,25 g de sulfate de magnésium
 0,10 g de sulfate ferrique ou sulfate de fer
(III)
 1 litre d'eau distillée
Liquide de Knop sans potassium:
 1,25 g de nitrate de calcium
 0,25 g de sulfate de magnésium
 0,25 g de sulfate ferrique
 1 litre d'eau distillée
Liquide de Knop sans azote:
 1 g de chlorure de calcium
 0,25 g de phosphate mono potassique
 0,1 g de sulfate ferrique
 0,5 g de chlorure de potassium
 0,25 g de sulfate de magnésium
 1 litre d'eau distillée
Milieu MS:
Macroéléments (mg/l)
 nitrate d'ammonium
(NH4NO3) 1.650 mg/l.
 acide borique(H3BO3) 6,2
mg/l.
 chlorure de
calcium(CaCl2*H2O) 440
mg/l.
 chlorure de
cobalt(CoCl2*6H2O)
0,025 mg/l.
 sulfate de magnésium
(MgSO4*7H2O) 370 mg/l.
 sulfate de
cuivre(CuSO4*5H2O)
0,025 mg/l.
 phosphate de potassium
(KH2PO4) 170 mg/l.
 Sulfate de fer(FeSO4*7H2O)
27,8 mg/l.
 Nitrate de Potassium(KNO3)
1.900 mg/l.
 Sulfate de manganèse
(MnSO4*4H2O) 22,3 mg/l.
 iodure de potassium (KI)
0,83 mg/l.
 molybdate d'ammonium
(Na2MoO4*2H2O) 0,25 mg/l.
 Sulfate de zinc(ZnSO4*7H2O)
8,6 mg/l.
 EDTA (Na2EDTA*2H2O)
37,2mg/l.
 1- choix du matériel végétal
 2- Milieux de culture
 3-Protocole expérimentale
 4-Résultats
Matériel végétal utilisé
Fragments foliaires Cotylédons
 Fragments foliaires :
 Dimension : 5 × 5 mm
 Origine:
Feuilles de jeunes
plantules âgées de 8
semaines issues de la
germination in vitro
d’akènes stockés à
l'obscurité à 4°C
pendant au moins 4
mois
Des pousses issues de la
culture d’apex sur un milieu
de multiplication.
 Cotylédons :
Cotylédons
embryonnaires
Cotylédons non
embryonnaires
prélevés à partir
d’akènes ayant subi une
stérilisation par NaOCl (10
%) pendant 10 minutes, 3
rinçages à l'eau distillée
stérile suivis d'une
imbibition de 24 heures
pour
ramollir les téguments.
prélevés sur de jeunes
plantules âgées de
4 semaines issues de la
germination in vitro
d’akènes afin de
comparer leur
réponse callogène avec
celle des cotylédons
embryonnaires.
 Le plus utilisé pour la callogenèse : milieu Murashige et
Skoog
 Composition :
 D’autres éléments :
 2,4 D : Acide 2,4-dichlorophénoxyacétique
 BA: BenzylAdenine
sels minéraux
(essentiellem
ent des
macroélémen
ts)
des
sucres
des vitamines
B
auxines cytokinine
s
 L’induction des cals a été réalisée sur le milieu MS
additionné de :
 30 g/l de saccharose
 Diverses combinaisons de BA (0,5 ; 1 ; 2 ; 2,5 ;5 mg/l)
 2,4-D (0,5 ; 1 ; 2 ; 2,5 ; 5 mg/l)
 phytohormones appropriées pour l’initiation des
cals chez plusieurs variétés de Fraisier [3,6,10,15].
 Le milieu solidifié par 8 g/l d'agar est autoclavé
pendant 20 minutes à 120°C.
 Matériel :
 6 boites de pétri contenant 30ml du milieu pour chaque
traitement
 Manipulation:
Fragments foliaires Cotylédons
- Les fragments foliaires ont
été déposés face supérieure
en contact avec le milieu
(Les explants sont placés à
raison de 4 par boîte de Petri
)
La même chose pour es
fragments
Cotylédonaires.
On répète l’experience 3 fois Même chose
 Incubation
 Les cultures ont été soumises deux semaines à l'obscurité
et à 20±2°C pour une meilleure induction des cals
 Ensuite, et dans les expériences ultérieures, les cultures
ont été transférées dans une salle de culture à 24±1°C et
75 % d'humidité relative, l'éclairement, d'une intensité de
4000 lux (0,54 W.m-2), est fourni 16 heures par jour par
des tubes fluorescents
 Le pourcentage d’explants formant des cals et l’aspect
des cals ont été notés après 4, 6 et 8 semaines de
culture.
Effet des
phytohormones
La combinaison 2 mg/l de 2,4-D et 1 mg/l de BA
donne la meilleure
callogenèse pour les deux types d’explants chez
les deux cultivars et a été retenue.
Effet de la source des
explants
-Le taux de callogenèse est de 100 % pour les
cotylédons embryonnaires de 2 cultivars.
95 et 98 % des fragments foliaires prélevés sur
des feuilles de plantules de 8 semaines issues de
germination sont callogènes contre seulement
72,4 et 57,3 % pour les fragments foliaires de
pousses de la phase
de multiplication, respectivement pour
‘Chandler’ et ‘Tudla’.
Effets de milieu de culture sur
les cals de fraisier:
 Pennell a étudier chez cette variété l’effet des
solutions MS,Knop,B5,Heller… et remarqué que :
 Le milieu Knop favorise l’apparition de bourgeons
individualisés
 Le milieu MS donne, au contraire un bon
développement des bourgeons axilliaires mais
avec des signes de vitrifivation.
Conclusion
Meristème
Apex caulinaire
Nœud
Culture de
méristème
Enracinement
Plantules
Tige feuillée
Morphogenèse
indirecte
Callogenèse
ca
l
Suspensions
cellulaires
Caulogenèse
indirecte
Embryogenèse
somatique
indirecte
Morphogenès
e directe
Caulogenèse
directe
Embryogenèse
somatique
directe
Semences
artificielles
Schéma récapitulatif de la régénération de la plante
Explants divers
(racines, tige,
feuilles…)

Contenu connexe

Tendances

Chapitre 02 amélioration des plantes
Chapitre 02 amélioration des plantesChapitre 02 amélioration des plantes
Chapitre 02 amélioration des plantes
SELLANI Halima
 
la Culture cellulaire
 la Culture cellulaire la Culture cellulaire
la Culture cellulaire
abir
 
Rapport de stage; analyse microbiologique de l'eau
Rapport de stage; analyse microbiologique de l'eauRapport de stage; analyse microbiologique de l'eau
Rapport de stage; analyse microbiologique de l'eau
Elyakine Benmebkhout
 
Les mutations
Les mutationsLes mutations
Les mutations
SELLANI Halima
 
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTIONDIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
Dr Taoufik Djerboua
 
L'Electrophorèse et l'analyse médicale
L'Electrophorèse et l'analyse médicale L'Electrophorèse et l'analyse médicale
L'Electrophorèse et l'analyse médicale
ahmed AIT KHOUYA
 
Évaluation des activités anticancéreuses de quelques plantes utilisées dans ...
Évaluation des activités anticancéreuses de quelques  plantes utilisées dans ...Évaluation des activités anticancéreuses de quelques  plantes utilisées dans ...
Évaluation des activités anticancéreuses de quelques plantes utilisées dans ...
Université de Dschang
 
Livre des cours+tp microbiologie
Livre des cours+tp microbiologieLivre des cours+tp microbiologie
Livre des cours+tp microbiologie
arezki sadoudi
 
Rapport de microbiologie
Rapport de microbiologieRapport de microbiologie
Rapport de microbiologie
Hassan NAIT-SI
 
these tres iooooopmm.pdf
these tres iooooopmm.pdfthese tres iooooopmm.pdf
these tres iooooopmm.pdf
MOHAMED SLIM
 
MICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE.pptx
MICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE.pptxMICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE.pptx
MICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE.pptx
ZINEBAGOURRAM1
 
Interactions plantes microbiotes-sol_c_mougel_vegenov_29062017
Interactions plantes microbiotes-sol_c_mougel_vegenov_29062017Interactions plantes microbiotes-sol_c_mougel_vegenov_29062017
Interactions plantes microbiotes-sol_c_mougel_vegenov_29062017
VEGENOV-BBV
 
Présentation mémoire Master de Recherche en Biologie Fonctionnelle Parcours: ...
Présentation mémoire Master de Recherche en Biologie Fonctionnelle Parcours: ...Présentation mémoire Master de Recherche en Biologie Fonctionnelle Parcours: ...
Présentation mémoire Master de Recherche en Biologie Fonctionnelle Parcours: ...
rihem kasmi
 
Rapport de sortie des étudiants de l'université de zinder département de géog...
Rapport de sortie des étudiants de l'université de zinder département de géog...Rapport de sortie des étudiants de l'université de zinder département de géog...
Rapport de sortie des étudiants de l'université de zinder département de géog...
mahamane manirou abdou
 
Tout sur la bactériologie
Tout sur la bactériologieTout sur la bactériologie
Tout sur la bactériologie
S/Abdessemed
 
Parasitologie médicale..pdf
Parasitologie médicale..pdfParasitologie médicale..pdf
Parasitologie médicale..pdf
S/Abdessemed
 
Chapitre 01 amélioration génétique
Chapitre 01 amélioration génétiqueChapitre 01 amélioration génétique
Chapitre 01 amélioration génétique
SELLANI Halima
 
Rapport du tp ; tqpa groupe 2 2
Rapport du tp ; tqpa groupe 2 2Rapport du tp ; tqpa groupe 2 2
Rapport du tp ; tqpa groupe 2 2
souhaila ennakhli
 
Hydropriming et Evolution des métabolites
Hydropriming et Evolution des métabolites Hydropriming et Evolution des métabolites
Hydropriming et Evolution des métabolites
Lilya BOUCELHA
 

Tendances (20)

Chapitre 02 amélioration des plantes
Chapitre 02 amélioration des plantesChapitre 02 amélioration des plantes
Chapitre 02 amélioration des plantes
 
la Culture cellulaire
 la Culture cellulaire la Culture cellulaire
la Culture cellulaire
 
Rapport de stage; analyse microbiologique de l'eau
Rapport de stage; analyse microbiologique de l'eauRapport de stage; analyse microbiologique de l'eau
Rapport de stage; analyse microbiologique de l'eau
 
Les mutations
Les mutationsLes mutations
Les mutations
 
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTIONDIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE D'UNE INFECTION
 
L'Electrophorèse et l'analyse médicale
L'Electrophorèse et l'analyse médicale L'Electrophorèse et l'analyse médicale
L'Electrophorèse et l'analyse médicale
 
Évaluation des activités anticancéreuses de quelques plantes utilisées dans ...
Évaluation des activités anticancéreuses de quelques  plantes utilisées dans ...Évaluation des activités anticancéreuses de quelques  plantes utilisées dans ...
Évaluation des activités anticancéreuses de quelques plantes utilisées dans ...
 
Livre des cours+tp microbiologie
Livre des cours+tp microbiologieLivre des cours+tp microbiologie
Livre des cours+tp microbiologie
 
Rapport de microbiologie
Rapport de microbiologieRapport de microbiologie
Rapport de microbiologie
 
these tres iooooopmm.pdf
these tres iooooopmm.pdfthese tres iooooopmm.pdf
these tres iooooopmm.pdf
 
MICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE.pptx
MICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE.pptxMICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE.pptx
MICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE.pptx
 
Interactions plantes microbiotes-sol_c_mougel_vegenov_29062017
Interactions plantes microbiotes-sol_c_mougel_vegenov_29062017Interactions plantes microbiotes-sol_c_mougel_vegenov_29062017
Interactions plantes microbiotes-sol_c_mougel_vegenov_29062017
 
Présentation mémoire Master de Recherche en Biologie Fonctionnelle Parcours: ...
Présentation mémoire Master de Recherche en Biologie Fonctionnelle Parcours: ...Présentation mémoire Master de Recherche en Biologie Fonctionnelle Parcours: ...
Présentation mémoire Master de Recherche en Biologie Fonctionnelle Parcours: ...
 
La culture cellulaire
La culture cellulaireLa culture cellulaire
La culture cellulaire
 
Rapport de sortie des étudiants de l'université de zinder département de géog...
Rapport de sortie des étudiants de l'université de zinder département de géog...Rapport de sortie des étudiants de l'université de zinder département de géog...
Rapport de sortie des étudiants de l'université de zinder département de géog...
 
Tout sur la bactériologie
Tout sur la bactériologieTout sur la bactériologie
Tout sur la bactériologie
 
Parasitologie médicale..pdf
Parasitologie médicale..pdfParasitologie médicale..pdf
Parasitologie médicale..pdf
 
Chapitre 01 amélioration génétique
Chapitre 01 amélioration génétiqueChapitre 01 amélioration génétique
Chapitre 01 amélioration génétique
 
Rapport du tp ; tqpa groupe 2 2
Rapport du tp ; tqpa groupe 2 2Rapport du tp ; tqpa groupe 2 2
Rapport du tp ; tqpa groupe 2 2
 
Hydropriming et Evolution des métabolites
Hydropriming et Evolution des métabolites Hydropriming et Evolution des métabolites
Hydropriming et Evolution des métabolites
 

Similaire à La callogenèse

Technique culture in vitro vegetale. Et biotechnologie végétale.pdf
Technique culture in vitro vegetale. Et biotechnologie végétale.pdfTechnique culture in vitro vegetale. Et biotechnologie végétale.pdf
Technique culture in vitro vegetale. Et biotechnologie végétale.pdf
nouairiissam
 
BV cours.pdf
BV cours.pdfBV cours.pdf
BV cours.pdf
MOHAMED SLIM
 
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pdf
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pdfcultureinvitro-130225021317-phpapp02.pdf
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pdf
HICHAM215202
 
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pptx
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pptxcultureinvitro-130225021317-phpapp02.pptx
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pptx
MounirSaggai1
 
Le développement des plantes
Le développement des plantesLe développement des plantes
Le développement des plantes
SELLANI Halima
 
Green Aesthetic Thesis Defense Presentation (4).pptx
Green Aesthetic Thesis Defense Presentation (4).pptxGreen Aesthetic Thesis Defense Presentation (4).pptx
Green Aesthetic Thesis Defense Presentation (4).pptx
soumiabasry8
 
M1-Agroécologie-interaction-plante-milieu.ppsx
M1-Agroécologie-interaction-plante-milieu.ppsxM1-Agroécologie-interaction-plante-milieu.ppsx
M1-Agroécologie-interaction-plante-milieu.ppsx
NesrineLaradji
 
Les plantes. maría, sara, jorge, dani y elena
Les plantes. maría, sara, jorge, dani y elenaLes plantes. maría, sara, jorge, dani y elena
Les plantes. maría, sara, jorge, dani y elena
jlealleon
 
Gemmothérapie
GemmothérapieGemmothérapie
Gemmothérapie
Bertrand Guillemot
 
La reproduction des champignons
La reproduction des champignonsLa reproduction des champignons
La reproduction des champignonsmicro bio
 
Les êtres vivants
Les êtres vivantsLes êtres vivants
Les êtres vivants
jlealleon
 
Introduction a la mycologie medicale DR BENLARIBI IMANE HALIMA
Introduction a la mycologie medicale DR BENLARIBI IMANE HALIMAIntroduction a la mycologie medicale DR BENLARIBI IMANE HALIMA
Introduction a la mycologie medicale DR BENLARIBI IMANE HALIMA
IMANE HALIMA BENLARIBI
 
Zakaria, alvaro, angel y javier
Zakaria, alvaro, angel y javierZakaria, alvaro, angel y javier
Zakaria, alvaro, angel y javier
jlealleon
 
Champignons et plantes
Champignons et plantesChampignons et plantes
Champignons et plantes
Francisco de la Flor
 
Les cellules !!
Les cellules !!Les cellules !!
Les cellules !!niknad0173
 

Similaire à La callogenèse (16)

Technique culture in vitro vegetale. Et biotechnologie végétale.pdf
Technique culture in vitro vegetale. Et biotechnologie végétale.pdfTechnique culture in vitro vegetale. Et biotechnologie végétale.pdf
Technique culture in vitro vegetale. Et biotechnologie végétale.pdf
 
BV cours.pdf
BV cours.pdfBV cours.pdf
BV cours.pdf
 
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pdf
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pdfcultureinvitro-130225021317-phpapp02.pdf
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pdf
 
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pptx
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pptxcultureinvitro-130225021317-phpapp02.pptx
cultureinvitro-130225021317-phpapp02.pptx
 
Le développement des plantes
Le développement des plantesLe développement des plantes
Le développement des plantes
 
Green Aesthetic Thesis Defense Presentation (4).pptx
Green Aesthetic Thesis Defense Presentation (4).pptxGreen Aesthetic Thesis Defense Presentation (4).pptx
Green Aesthetic Thesis Defense Presentation (4).pptx
 
M1-Agroécologie-interaction-plante-milieu.ppsx
M1-Agroécologie-interaction-plante-milieu.ppsxM1-Agroécologie-interaction-plante-milieu.ppsx
M1-Agroécologie-interaction-plante-milieu.ppsx
 
Les plantes. maría, sara, jorge, dani y elena
Les plantes. maría, sara, jorge, dani y elenaLes plantes. maría, sara, jorge, dani y elena
Les plantes. maría, sara, jorge, dani y elena
 
Gemmothérapie
GemmothérapieGemmothérapie
Gemmothérapie
 
La reproduction des champignons
La reproduction des champignonsLa reproduction des champignons
La reproduction des champignons
 
Les êtres vivants
Les êtres vivantsLes êtres vivants
Les êtres vivants
 
Introduction a la mycologie medicale DR BENLARIBI IMANE HALIMA
Introduction a la mycologie medicale DR BENLARIBI IMANE HALIMAIntroduction a la mycologie medicale DR BENLARIBI IMANE HALIMA
Introduction a la mycologie medicale DR BENLARIBI IMANE HALIMA
 
Zakaria, alvaro, angel y javier
Zakaria, alvaro, angel y javierZakaria, alvaro, angel y javier
Zakaria, alvaro, angel y javier
 
Les cellules
Les cellulesLes cellules
Les cellules
 
Champignons et plantes
Champignons et plantesChampignons et plantes
Champignons et plantes
 
Les cellules !!
Les cellules !!Les cellules !!
Les cellules !!
 

Plus de Asmae LGUENSAT

Animal models of depression and anxiety
Animal models of depression and anxiety Animal models of depression and anxiety
Animal models of depression and anxiety
Asmae LGUENSAT
 
Interraction gène-environnement en psychiatrie
Interraction gène-environnement en psychiatrie Interraction gène-environnement en psychiatrie
Interraction gène-environnement en psychiatrie
Asmae LGUENSAT
 
Analysis gpcr-dimerization
Analysis gpcr-dimerization Analysis gpcr-dimerization
Analysis gpcr-dimerization
Asmae LGUENSAT
 
Poster final-yuhasi et al
Poster final-yuhasi et alPoster final-yuhasi et al
Poster final-yuhasi et al
Asmae LGUENSAT
 
Microdialyse et quantification des neurotransmetteurs
Microdialyse et quantification des neurotransmetteursMicrodialyse et quantification des neurotransmetteurs
Microdialyse et quantification des neurotransmetteurs
Asmae LGUENSAT
 
Nociceptors the sensors of the pain pathway
Nociceptors the sensors of the pain pathway   Nociceptors the sensors of the pain pathway
Nociceptors the sensors of the pain pathway
Asmae LGUENSAT
 
Neurotensin presentation
Neurotensin presentationNeurotensin presentation
Neurotensin presentation
Asmae LGUENSAT
 
La régulation du cycle cellulaire
La régulation du cycle cellulaireLa régulation du cycle cellulaire
La régulation du cycle cellulaire
Asmae LGUENSAT
 
Production des anticorps monoclonaux
Production des anticorps monoclonauxProduction des anticorps monoclonaux
Production des anticorps monoclonaux
Asmae LGUENSAT
 
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiquesRéaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Asmae LGUENSAT
 
Présentation final m.bennis
Présentation final m.bennisPrésentation final m.bennis
Présentation final m.bennis
Asmae LGUENSAT
 
Le diabète néonatal
Le diabète néonatalLe diabète néonatal
Le diabète néonatal
Asmae LGUENSAT
 
Les malformations congénitales du système nerveux central
Les malformations congénitales du système nerveux centralLes malformations congénitales du système nerveux central
Les malformations congénitales du système nerveux central
Asmae LGUENSAT
 

Plus de Asmae LGUENSAT (16)

Animal models of depression and anxiety
Animal models of depression and anxiety Animal models of depression and anxiety
Animal models of depression and anxiety
 
Interraction gène-environnement en psychiatrie
Interraction gène-environnement en psychiatrie Interraction gène-environnement en psychiatrie
Interraction gène-environnement en psychiatrie
 
Analysis gpcr-dimerization
Analysis gpcr-dimerization Analysis gpcr-dimerization
Analysis gpcr-dimerization
 
Poster final-yuhasi et al
Poster final-yuhasi et alPoster final-yuhasi et al
Poster final-yuhasi et al
 
Microdialyse et quantification des neurotransmetteurs
Microdialyse et quantification des neurotransmetteursMicrodialyse et quantification des neurotransmetteurs
Microdialyse et quantification des neurotransmetteurs
 
Nociceptors the sensors of the pain pathway
Nociceptors the sensors of the pain pathway   Nociceptors the sensors of the pain pathway
Nociceptors the sensors of the pain pathway
 
Poster Alzheimer
Poster AlzheimerPoster Alzheimer
Poster Alzheimer
 
Neurotensin presentation
Neurotensin presentationNeurotensin presentation
Neurotensin presentation
 
La régulation du cycle cellulaire
La régulation du cycle cellulaireLa régulation du cycle cellulaire
La régulation du cycle cellulaire
 
Production des anticorps monoclonaux
Production des anticorps monoclonauxProduction des anticorps monoclonaux
Production des anticorps monoclonaux
 
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiquesRéaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
Réaction antigène-anticorps appliquée en techniques immunologiques
 
Présentation final m.bennis
Présentation final m.bennisPrésentation final m.bennis
Présentation final m.bennis
 
La narcolepsie
La narcolepsie La narcolepsie
La narcolepsie
 
Le diabète néonatal
Le diabète néonatalLe diabète néonatal
Le diabète néonatal
 
Les malformations congénitales du système nerveux central
Les malformations congénitales du système nerveux centralLes malformations congénitales du système nerveux central
Les malformations congénitales du système nerveux central
 
Pfe final lundi matin
Pfe final lundi matinPfe final lundi matin
Pfe final lundi matin
 

La callogenèse

  • 1.
  • 2. Introduction  La biotechnologie: Technologies impliquant l’obtention et/ou l’utilisation d’organismes génétiquement modifiés.
  • 3. Introduction  La Biotechnologies végétales: Développement et utilisation de techniques de cultures in vitro dans différents domaines relatifs au végétal et à l’amélioration variétale.
  • 4. Introduction  Les domaines abordés de la biotechnologie végétale: Ensemble des pratiques faisant appel aux cultures in vitro de plantes et aux techniques de biologie moléculaire dans les domaines de l’agronomie, l’industrie et la recherche fondamentale.
  • 5. A Suivre…  Totipotence de la cellule végétale  Etapes callogenèse  Techniques de culture in vitro de  Balance hormonal et minérale
  • 6. Totipotence  Chez les plantes, la totipotence peut se définir comme la propriété qu’ont certaines cellules de pouvoir régénérer un individu lorsqu’elles sont placées dans des conditions appropriées, en passant éventuellement par une étape de dédifférenciation.
  • 7. Pourquoi les cellules végétales sont totipotentes ???  Petit nombre de types cellulaires.  Seulement 3 ou 4 types d’organes fondamentaux (racine, tige, feuilles) dont les fleurs, vrilles, épines, fruits et tubercules sont des dérivés.  Grande plasticité génomique: la croissance peut rester presque normale malgré de profonds remaniements chromosomiques.
  • 8.
  • 9.
  • 10. 01
  • 11. 01
  • 12. 01
  • 13. 01
  • 14.
  • 15.
  • 16. 01
  • 17. 01
  • 18. 01
  • 19. 01
  • 20. 01
  • 21. 01
  • 22. 01
  • 23. 01
  • 24.
  • 25. 01
  • 26.
  • 27. 01
  • 28.
  • 29.  Une hormone :est une molécule synthétisée par un organisme et qui, à très faible concentration, va avoir une action sur le développement de certains tissus de cet organisme.  les phytohormone: sont des Produits de types divers, d’origine synthétique ou végétale (naturelle),qui peuvent circuler plus ou moins loin selon le cas , susceptibles d’exercer une action physiologique sur le végétal dont ils vont agir sur des cellules cibles possédants les récepteurs qui leurs correspondants
  • 30.  ils peuvent agir : o sur la dimension des cellules : accélération de la germination des graines, augmentation de croissance, réduction de croissance. o sur la multiplication des cellules : inhibition de la germination, bouturage, mise à fleur. o modification du métabolisme : augmentation de la précocité, de la productivité, effets divers.
  • 31. Parmi les principaux phytohormone : L’auxine Les cytokinines Les gibbérellines
  • 32. •La synthèse de l'auxine s'effectue dans les apex méristématiques des tiges, et dans les jeunes feuilles des bourgeons terminaux. •Le transport de l'auxine s'effectue de façon polarisée, de l'apex vers la base dans la tige par la sève 1)l’auxine 1.1)Mode de production des auxines Site de production: bourgeon apical Diffusion des hormones •dominance apicale • stimulation de la rhizogenèse -
  • 33. 1.2 ) role de l’auxine  Elle inhibe les bourgeons qu’elle rencontre. ( dominance apicale )  Elle stimule la croissance primaire ( en longueur des cellules de la tige).  Elle stimule la croissance secondaire ( en épaisseur ) en provoquant la division des cellules du cambium et en influençant sur la différenciation du xylème secondaire.  Lorsque la plantule est jeune, la concentration en auxine arrivant aux niveau de l’apex racinaire est forte et elle stimule la rhyzogénèse .  Puis en grandissant, la distance entre les bourgeons terminaux et les racines augmente; La concentration en auxine diminue. Elle stimule alors l’élongation des cellules au niveau de la racine.  elles inhibent l'abscission (chute) des feuilles et des fruits.  L'auxine induit également le phototropisme d'un végétal
  • 34.  L’auxine synthétisée par les graines en développement favorise la maturation du fruit.
  • 35.  Variation de l’élongation des cellules de racine en fonction de la concentration en auxine
  • 36. Applications en culture in vitro  A partir d’un vitro plant  On coupe un fragment de tige d’environ 1,5 cm portant 2 feuilles.  Les feuilles sont enlevées en prenant soin de laisser intact les bourgeons axillaires. On réalise 3 milieux de cultures différents : Milieu de culture Résultats Milieu MS ½ Sans auxine Pas d’enracinement Milieu MS ½ Avec auxine 0,5 μmol.L-1 Formation de racine Photo A Milieu MS ½ Avec auxine 2 μmol.L-1 Formation d’un cal Photo B Photo A Photo B
  • 37. 2) Cytokine Synthèse dans les racines puis migrent dans la plante via la sève brute (xylème) 2.1)Mode de production des cytokinines Site de production: Racines Transport vers les sites d ’action : - levée de dominance apicale - débourrement des bourgeons axillaires
  • 38. 1.2 ) role de l’auxine  Elle inhibe les bourgeons qu’elle rencontre. ( dominance apicale )  Elle stimule la croissance primaire ( en longueur des cellules de la tige).  Elle stimule la croissance secondaire ( en épaisseur ) en provoquant la division des cellules du cambium et en influençant sur la différenciation du xylème secondaire.  Lorsque la plantule est jeune, la concentration en auxine arrivant aux niveau de l’apex racinaire est forte et elle stimule la rhyzogénèse .  Puis en grandissant, la distance entre les bourgeons terminaux et les racines augmente; La concentration en auxine diminue. Elle stimule alors l’élongation des cellules au niveau de la racine.  elles inhibent l'abscission (chute) des feuilles et des fruits.  L'auxine induit également le phototropisme d'un végétal
  • 39.  L’auxine synthétisée par les graines en développement favorise la maturation du fruit.
  • 40.  Variation de l’élongation des cellules de racine en fonction de la concentration en auxine
  • 41. les effets de l’auxine dans la plante en fonction de sa concentration Elle stimule la rizhogénèse à forte concentration Elle stimule la différenciation de bourgeon à très faible concentration A forte concentration, elle inhibe le développement des bourgeons = inhibition apicale. Elle inhibe la chute des feuilles et des fruits Elle active la formation de la chaire des fruits Elle active l’élongation des racines mais à très faible concentration.
  • 42. Applications en culture in vitro  A partir d’un vitro plant  On coupe un fragment de tige d’environ 1,5 cm portant 2 feuilles.  Les feuilles sont enlevées en prenant soin de laisser intact les bourgeons axillaires.On réalise 3 milieux de cultures différents : Milieu de culture Résultats Milieu MS ½ Sans auxine Pas d’enracinement Milieu MS ½ Avec auxine 0,5 μmol.L-1 Formation de racine Photo A Milieu MS ½ Avec auxine 2 μmol.L-1 Formation d’un cal Photo B Photo A Photo B
  • 43. 2) Cytokine Synthèse dans les racines puis migrent dans la plante via la sève brute (xylème) 2.1)Mode de production des cytokinines Site de production: Racines Transport vers les sites d ’action : - levée de dominance apicale - débourrement des bourgeons axillaires
  • 44. 2.2) rôle de cytokinines  Stimule l’élongation cellulaire et l’organogenèse  Les cytokinines en présence d'auxine stimulent la division cellulaire, leur rôle précis portant sur la duplication des chromosomes et le recloisonnement cellulaire.  Elles favorisent l'extension radiale des tiges et des racines.  Elles activent la production de chlorophylle Expérience réalisée sur un morceau de parenchyme prélevé dans une tige Culture sans aucun ajout d’hormone Les cellules deviennent très grosses mais ne se divisent pas + cytokinines Pas d’effet + cytokinines + auxines Les cellules se divisent
  • 45. Régulation de la dominance apicale : L’auxine est fabriquée au niveau des bourgeons terminaux Les cytokinines sont fabriquées au niveau de la racine • Dans la tige, L’auxine inhibe le développement des bourgeons axillaires. • Mais les cytokines bloquent l’effet de l’auxine qui arrive vers le bas. • Les rameaux du bas se développent en premier… Et descend par le phloème Et remonte par le xylème • Dans la racine, Les cytokinines inhibent la formation de racines secondaires, • Mais l’auxine bloquent l’effet des cytokines. • Les racines secondaires les plus
  • 46. 3)Gibberllienes  Les sites de synthèse des gibbérellines sont les jeunes feuilles, les fruits, les graines, les apex des tiges et des racines  Elles ont une influence sur la levée ou interruption de la dormance.  elles interviennent sur l'initiation de la floraison et le débourrement des bourgeons.  Elles stimulent l’élongation des tiges et des limbes des feuilles. Stimulation ainsi stimule la croissance internodale  Elle stimule la germination des graines.  Elle stimule la maturation des fruits.  Inhibition de la croissance racinaire à la lumière et Favorise au contraire la croissance racinaire à l’obscurité
  • 47. BALANCE HORMONALE  Les auxines et les cytokinines sont les plus importantes, elles assurent le grandissement et l’activité mitotique; dont le rapport auxines / cytokinines détermine le devenir des tissus en culture
  • 48. Auxine cytokinines Faible Intermédiaire Forte Caulogenèse (formation des feuilles et tige ) Callogeèse (formation des cals :amas de cellule non différencie) Rhizogenése (formation des racines) Le rapport des concentrations des 2 hormones a son importance
  • 49.
  • 50. -Pour se développer et fructifier, une plante a besoin d'eau, de lumière et d'éléments nutritifs. - Elle fabrique sa matière organique à partir de sels minéraux, d'eau et de gaz carbonique (CO2) en exploitant l'énergie solaire : c'est le phénomène de la photosynthèse. - Elle puise dans le sol les éléments minéraux et l'eau, nécessaires à sa croissance. Les principaux éléments nutritifs dont elle a besoin pour sa croissance sont l'azote, le phosphore et la potassium, désignés respectivement par leurs symboles chimiques : N, P, K. Il y a des éléments minéraux qui constituent environ 1% de la matière sèche de la plante comme le manganèse (Mn), fer (Fe), cuivre (Cu) … ; sont les microéléments ou oligoéléments
  • 51. L’azote (N):  L’azote (N) est l'engrais de la croissance : il participe au développement du feuillage et des parties aériennes des plantes. Si les plantes manquent d’azote, elles sont lentes à se développer, leur feuillage est vert clair ou jaunâtre.
  • 52. Le phosphore (P):  Le phosphore (P) stimule le développement des racines, la floraison et la fructification. Si les plantes manquent de phosphore, leur feuillage est foncé, rouge ou marqué de taches rouges, la floraison est peu abondante et la maturation des fruits est longue.
  • 53. Le Potassium (k):  Le potassium (K) est utile à la circulation de la sève et à l’assimilation des éléments nutritifs par les plantes. Il améliore leur résistance au gel, aux ravageurs et maladies, ainsi que la couleur et la qualité gustative des fruits.
  • 54.
  • 55. Genre Fragaria Nombre d’espèces Une cinquantaine Ploïdie diploïde, tétraploïde, hexaploïde et Octoploïde Nombre chromosomique de base 7 chromosomes Espèce Fragaria X ananassa Duch Ploïdie octoploïde (2n =8x = 56) issu d’un hybride spontané entre deux espèces octoploïdes originaires d’Amérique : Fragaria chiloensis Duch. et F. virginiana L
  • 56. Culture in vitro  La technique in vitro est un mode de multiplication végétative artificielle des plantes.  Il s’agit d’un ensemble de méthodes faisant intervenir d'une part l'asepsie (stérilisation du matériel, désinfection des explants)
  • 57.  d'autre part des conditions de culture parfaitement contrôlées (milieux de culture définis pour chaque type de plante, température, lumière, humidité,...)
  • 58.
  • 59. Milieu Knop: Milieu MS:  La solution de Knop (ou liquide de Knop) a été inventée par le chimiste allemand wilhelm Knop (1817-1891).  Utilisé plus particulièrement dans la culture des plantes à chlorophylle.  Il existe différentes types. Ces différentes solutions ne possèdent pas de source de carbone. Elles permettent d'expérimenter les exigences des plantes en faveur de tel ou tel élément non carbonaté  Le milieu de Murashige et Skoog (ou Milieu MS ou MSO).  inventé par les physiologistes végétalistes Toshio murashige et Folke K Skoog.  utilisé dans les laboratoires de biologie végétale pour la culture de cellules ou de tissus de plantes.
  • 60.
  • 61. Liquide de Knop complet:  1 g de nitrate de calcium  0,25 g de nitrate de potassium  0,25 g de sulfate de magnésium  0,25 g de phosphate monopotassique ou dihydrogénophosphate  0,05 g de sulfate ferrique  1000ml d'eau distillée
  • 62. Liquide de Knop sans phosphate:  1 g de nitrate de calcium  0,5 g de nitrate de potassium  0,25 g de sulfate de magnésium  0,10 g de sulfate ferrique ou sulfate de fer (III)  1 litre d'eau distillée
  • 63. Liquide de Knop sans potassium:  1,25 g de nitrate de calcium  0,25 g de sulfate de magnésium  0,25 g de sulfate ferrique  1 litre d'eau distillée
  • 64. Liquide de Knop sans azote:  1 g de chlorure de calcium  0,25 g de phosphate mono potassique  0,1 g de sulfate ferrique  0,5 g de chlorure de potassium  0,25 g de sulfate de magnésium  1 litre d'eau distillée
  • 66. Macroéléments (mg/l)  nitrate d'ammonium (NH4NO3) 1.650 mg/l.  acide borique(H3BO3) 6,2 mg/l.  chlorure de calcium(CaCl2*H2O) 440 mg/l.  chlorure de cobalt(CoCl2*6H2O) 0,025 mg/l.  sulfate de magnésium (MgSO4*7H2O) 370 mg/l.  sulfate de cuivre(CuSO4*5H2O) 0,025 mg/l.  phosphate de potassium (KH2PO4) 170 mg/l.  Sulfate de fer(FeSO4*7H2O) 27,8 mg/l.  Nitrate de Potassium(KNO3) 1.900 mg/l.  Sulfate de manganèse (MnSO4*4H2O) 22,3 mg/l.  iodure de potassium (KI) 0,83 mg/l.  molybdate d'ammonium (Na2MoO4*2H2O) 0,25 mg/l.  Sulfate de zinc(ZnSO4*7H2O) 8,6 mg/l.  EDTA (Na2EDTA*2H2O) 37,2mg/l.
  • 67.  1- choix du matériel végétal  2- Milieux de culture  3-Protocole expérimentale  4-Résultats
  • 68. Matériel végétal utilisé Fragments foliaires Cotylédons
  • 69.  Fragments foliaires :  Dimension : 5 × 5 mm  Origine: Feuilles de jeunes plantules âgées de 8 semaines issues de la germination in vitro d’akènes stockés à l'obscurité à 4°C pendant au moins 4 mois Des pousses issues de la culture d’apex sur un milieu de multiplication.
  • 70.  Cotylédons : Cotylédons embryonnaires Cotylédons non embryonnaires prélevés à partir d’akènes ayant subi une stérilisation par NaOCl (10 %) pendant 10 minutes, 3 rinçages à l'eau distillée stérile suivis d'une imbibition de 24 heures pour ramollir les téguments. prélevés sur de jeunes plantules âgées de 4 semaines issues de la germination in vitro d’akènes afin de comparer leur réponse callogène avec celle des cotylédons embryonnaires.
  • 71.  Le plus utilisé pour la callogenèse : milieu Murashige et Skoog  Composition :  D’autres éléments :  2,4 D : Acide 2,4-dichlorophénoxyacétique  BA: BenzylAdenine sels minéraux (essentiellem ent des macroélémen ts) des sucres des vitamines B auxines cytokinine s
  • 72.  L’induction des cals a été réalisée sur le milieu MS additionné de :  30 g/l de saccharose  Diverses combinaisons de BA (0,5 ; 1 ; 2 ; 2,5 ;5 mg/l)  2,4-D (0,5 ; 1 ; 2 ; 2,5 ; 5 mg/l)  phytohormones appropriées pour l’initiation des cals chez plusieurs variétés de Fraisier [3,6,10,15].  Le milieu solidifié par 8 g/l d'agar est autoclavé pendant 20 minutes à 120°C.
  • 73.  Matériel :  6 boites de pétri contenant 30ml du milieu pour chaque traitement  Manipulation: Fragments foliaires Cotylédons - Les fragments foliaires ont été déposés face supérieure en contact avec le milieu (Les explants sont placés à raison de 4 par boîte de Petri ) La même chose pour es fragments Cotylédonaires. On répète l’experience 3 fois Même chose
  • 74.  Incubation  Les cultures ont été soumises deux semaines à l'obscurité et à 20±2°C pour une meilleure induction des cals  Ensuite, et dans les expériences ultérieures, les cultures ont été transférées dans une salle de culture à 24±1°C et 75 % d'humidité relative, l'éclairement, d'une intensité de 4000 lux (0,54 W.m-2), est fourni 16 heures par jour par des tubes fluorescents  Le pourcentage d’explants formant des cals et l’aspect des cals ont été notés après 4, 6 et 8 semaines de culture.
  • 75. Effet des phytohormones La combinaison 2 mg/l de 2,4-D et 1 mg/l de BA donne la meilleure callogenèse pour les deux types d’explants chez les deux cultivars et a été retenue. Effet de la source des explants -Le taux de callogenèse est de 100 % pour les cotylédons embryonnaires de 2 cultivars. 95 et 98 % des fragments foliaires prélevés sur des feuilles de plantules de 8 semaines issues de germination sont callogènes contre seulement 72,4 et 57,3 % pour les fragments foliaires de pousses de la phase de multiplication, respectivement pour ‘Chandler’ et ‘Tudla’.
  • 76. Effets de milieu de culture sur les cals de fraisier:  Pennell a étudier chez cette variété l’effet des solutions MS,Knop,B5,Heller… et remarqué que :  Le milieu Knop favorise l’apparition de bourgeons individualisés  Le milieu MS donne, au contraire un bon développement des bourgeons axilliaires mais avec des signes de vitrifivation.
  • 77.
  • 78.
  • 79.
  • 81. Meristème Apex caulinaire Nœud Culture de méristème Enracinement Plantules Tige feuillée Morphogenèse indirecte Callogenèse ca l Suspensions cellulaires Caulogenèse indirecte Embryogenèse somatique indirecte Morphogenès e directe Caulogenèse directe Embryogenèse somatique directe Semences artificielles Schéma récapitulatif de la régénération de la plante Explants divers (racines, tige, feuilles…)