Vie et mort de Plasmodium : la place de l'apoptose au cours du cycle - Conférence du 4e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Stéphane PICOT - Hôpital E. Herriot, Lyon, France - picot@rockefeller.univ-lyon1.fr

3. !
"
#
! !
" #
!
$ "$
%
!

4. ! " ! !
# ! $ % &'( ) * +%
, - % &'. /
0 1 2 % &'34 * ! ! + /
5)
6 7 8 /% 6 0 % 4994
! : 7 ! " ; <
! =
! 5 ! 7

5. 6 7 4 5
5
$ >%
? $ !
&'
( )' *
4 3 +
-
,
∆ 45
3
. /
8
' 01 02
.

6. 9
/# : + ;
4 !
-# 9 +
!
'# 9
!

7. . ;
/8 8 < = > "
+ "
"
"
? #@

8. 4 4 !
trophozoites chloroquine camptothecine daunomycine
.
"
A =B -CC-
. "
! " # $

9. . 4
D " . 6 B E> F B @ :G
@+
A
?
4

10. @ A
1) TUNEL (Terminal dUTP Nick End Labelling): Fragmentation
internucléosomale de l’ADN
5 µm
,B ? A ! C4 9 D
< C4 9 D < C4 E D

11. @+
. + 0 4H
trophozoïtes schizontes
SSC
FSC
7 4A H 10% 24% 25%
5% 14% 39%
PI
C ' <3

12. @+
. + 0 4H
3) Marquage par l’Annexine V:
Exposition phosphatidylsérines
% &
6 #D ,= B -CC<

13. A
EI /G
7 4A H
- 0 12
,
4 +
*
)
(
'
. /

17. Stratégie de Recherche
Approche bioinformatique
• Recherche d’un gène candidat
• Recherche de site catalytique
• Recherche de domaines
Approche biochimique in vitro
• Synthèse de protéine recombinante
• Tests d’activité enzymatique avec substrat luminescent
Approche in vivo dans cellule eucaryotes
• Test de surexpression et d’induction d’apoptose
• Test de clivage
Approche in vivo chez P.falciparum
• Test d’activité enzymatique et de clivage après induction d’apoptose!
• Test de survie du parasite en présence d’inhibiteurs de Caspase

18. Approche bioinformatique
Métacaspase inactivée
Site de clivage potentiel
DD
H C
75 106
DD CARD DED P20 P10
26 72 211 242
Domaines régulateurs Domaine catalytique C14
P20
Métacaspase activée P10

19. . "
+
# ! "# !
&
! +"- -
#!
.. " !#
" $
!#
" %
+ !#
"
+ /0 1 #" 2
,"
' ( ('
!#
" $
3 " !
0 . 1
4 ' ( ('
$
)* ,
+

20. 9 +
!
etoposide sur 3d7 48 h etoposide sur 7g8 48 h
120 120
100 100
80 ring 80 ring
tropho tropho
% 60 % 60
schizontes schizontes
40 pycno 40 pycno
20 20
0 0
0 3,75 7,5 15 30 60 0 3,75 7,5 15 30 60
etoposide (µg.mL) etoposide (µg.mL)

22. . "
+3, 4 5+
'- 6
-+ #0 6 1 $

23. 9
!

26. " 0
1 !-
. " 5
-! . " #! #
# 0 1 .. "
- - " "
!# 1" 6 !-& ! 0
!
- "
!# & 1 "

27. "#
' 7 8 # #
7 9 # :
2# # ; 8 # # #7
7
8 2
# 7 8 # # <
! = ##
8 > # # # # # #
7
? ! # ! 7 # ## #

28. ' .""
#/' 2
7 1 ."" 9 0
7 ' +' :. -"
# # " ! " 6- ;
# -# "#
& ";
# ;1! ;#- " <
7 .. -0 1 # 0 # # 1"
"

29. ' "
# & "
#
7 1 < # # 8
8 $ # # 7 7
# # #@
7 > #8
8 ? # # # 7 #
@
7 0 7 8
8 $ 7 'A B '
$2 C
8 $ ! # # 6?B@
7 # # #
##

30. 6 1 F0 E 5
= JG
A BG A BG A BG
B= 7 1 1
8 A BG % ?B 9 H F-
?B &9. ! I & 4 9 @ ?F
9 E . 3 &E 4& J9
I .9 B %, 7 %
I&4 6 , 1 :
I&4 6 5 5:
IJ9 G : K 7

31. "0
# -1" ! "
# '
! "
-
!I G =G G & .

32. "0
# -1" ! "
. #" # ! -# 0
0 #"
- #. " 1"
" - #9 "
" - # -& -
"
"
# -& 9 # + 4 & 9 # + 4= & 9 # + 4=
= 0- 3>
$ ? 3>
$

33. 8B " 7 3 ! 5
& !1 : !#
#
'
7 499 H

34. ' +' + . + .
1 :. "#
E E
3 3
E E
3 3
C 7 D " A BG C7 - 7 D

35. 6# 1
" :. "#" & "
# #
#
'
#
'

36. " " :-
"
NS
18 18
16 16
NS
14 14
12 12
10 10
8 8
6 6
4 4
2 2
0 0
A BG A BG
5 5
: 6

37. ( 11
!
? '
3 - - 01 & 1 " " 1! " 1 -
# #
3 ' - & " "0 11
## .# "0 "#/
# ;
; 2
3 ' . # 1 "
# & "
#
> #
7 D # #
5 # ## *
!
?3 # 0 1! " 1 -
#
3 . . "& #
3 # 1" - #
- @ - ""
# "
3 0 1 #

38. .. " 0 1 ". @ # ; 1 -! &
"1 " . "
5 &
1 # 1 0 " " " # " 0"0 "#"
" 1" # # # # 1 ! 3 +
"
# ; #3 3
A . " ? +?
? ?
B ( ? A; 4 5% + %
; ? 3
C' ; " ': 11 ? 4? ? $ 3
# . 5$ +? 4
A ; 4? +% 3 -
? 5 '# "
.. " - !#
"
#" " 0
" ! #1 " . "
1
. 13 " ? % ;
1 -! 0 " !
"1 %4
#3 3 3 .
( 3 - $ +
%
$?
%3
G
G F J9
F J9

39. .
"

40. B
B ! !
! ! !
! L
L
6
6 M
A1 J3J4
A1 J3J4
## BB
1 " 6
$$
0 $ /
7 6
1 A -
$ < 7
@ ,
@ , ,
, 6
NN,
, :: 77 %% 77 <<
!! !! 77
A
# 6
1 :