SlideShare une entreprise Scribd logo
évolution de la résistance de Plasmodium falciparum
          aux médicaments antipaludiques

                      jerome.clain@parisdescartes.fr


  UMR216 ‘Santé de la mère et de l’enfant face aux infections tropicales’



                 Institut Pasteur de Madagascar, 29 mars 2011
histoire de la résistance aux antipaludiques




                                                        ART-T
                                                       SE Asia

                                          Ato/Pg-R
                                          travellers




                            adapted from Ekland & Fidock, 2008
principaux gènes de résistance aux médicaments antipaludiques



                                                                              ART-T
                                                                             SE Asia

                                                               Ato/Pg-R
                                                               travellers




   • pfcrt (3 SNPs)     • pdhfr (3-4 SNPs)
   • pfmdr1 (SNPs)                           • pfmdr1 (CNVs)        • pfcytb (1 SNP)
                        • dhps (1-3 SNPs)




  • vacuole digestive   • cytoplasme                                • mitochondrie
  • fonction inconnue   • synthèse d’ADN                            • transfert d’e-
• comment évoluent les allèles (gènes) de chimiorésistance ?
• combien d’origines de chimiorésistance ?
1- brefs rappels de génétique des populations

2- gène pfdhfr et origine de la résistance à la pyriméthamine

3- gène pfcytb et résistance à la Malarone (atovaquone-proguanil)
les 2 échelles de l’évolution




• au sein d’1 espèce                          • entre plusieurs espèces
• au sein/entre populations                   • échelle : temps géologiques
• échelle : générations            mutation
                                   migration
                               dérive génétique
                              sélection naturelle
évolution des populations
changement des fréquences alléliques au sein d’une population
              N individus diploïdes
                     2 allèles
                       0.75      génération 1
                       0.25


♀            ♂                                   Évolution si :
                                                 • mutation
                        urne des gamètes
                          effectifs infinis      • migration
        2N tirages
                                                 • dérive génétique
                                                 • sélection naturelle
              N individus diploïdes



                         0.75
                         0.25
                                  génération 2
marqueurs du polymorphisme génétique (1)
         SNP : single nucleotide polymorphism

             allèle sauvage :        5’-ATAACATGA-3’
allèles mutants :
           ATAAAATGA                 5’-ATAATATGA-3’     ATAAGATGA




           « bénéfique »                                  « délétère »
                                          « neutre »
          « avantageux »                               « désavantageux »




            • ~ 1 SNP / 300 pdb
            • ~ 100 000 SNPs (objectif : 350 000)

                                                               Mu et al. 2006
marqueurs moléculaires du polymorphisme (2)


• polymorphismes de séquences répétées en tandem : microsatellites


   5’-ATCTAGCACACACACACACACATCCTG-3’                     (CA)8
   5’-ATCTAGCACACACACACACACACACATCCTG-3’ (CA)10



  - très polymorphes : nombreux allèles différents dans une population
  - neutres le plus souvent
diversité génétique et origine des mutations

: microsatellite

: séquence codante


         kb        -5.3   -4.4    -0.1
                                          dhfr

                   (TA)n (TAA)n   (CG)n          phénotype
                   13     12       10             sensible
                   12      7        8                S
                   10      8        9                S
                    9      9        9                S
                    7      7        6                S
                    8     10       12                S
                   11     11       11                S
apparition d’un allèle de résistance par mutation

 : séquences répétées en tandem (microsatellite)

 : séquence codante


        kb      -5.3    -4.4      -0.1
                                           dhfr

                (TA)n (TAA)n     (CG)n    51 59 108   phénotype
                 13      12       10                   résistant
                 12       7        8                   sensible
                 10       8        9                       S
                  9       9        9                       S
                  7       7        6                       S
                  8      10       12                       S
                 11      11       11                       S
sélection de l’allèle de résistance
1. fréquence de l’allèle de résistance  : sélection directionnelle positive
2. effet « auto-stop » ou hitchhiking
3. déséquilibre de liaison                    13 12        10
                                              13    12     10
                                              13    12     10
                                              13    12     10
13   12    10                                 13    12     10
12    7     8                                 12     7      8
10    8     9                                 10     8      9
 9    9     9                 traitement       9     9      9
 7    7     6                      =           7     7      6
 8   10    12                  sélection       8    10     12
11   11    11                                 11    11     11
diversité réduite à proximité de l’allèle sélectionné

                                    12     7    8
                                    10     8    9
                                     9     9    9
                                     7     7    6
                                     8    10   12
                                    11    11   11


                                    13    12   10
                                    13    12   10
                                    13    12   10
                                    13    12   10
                                     13   12   10
application 1 :
                                      recherche de locus sélectionnés par approche genome-scan


                                      identification du gène pfcrt, déterminant de la résistance à la chloroquine
Réduction de la diversité allélique




                                                                    chromosomes




                                              parasites résistants à la chloroquine
                                              parasites sensibles à la chloroquine


                                                                                                    Wooton 2001, Nature
application 2 :
     origine de la résistance à la pyrimethamine en Afrique

 > base génétique : 3 SNPs dans le gène dihydrofolate reductase


                    dhfr       ts
                51 59 108
wild type       N C S
triple mutant   I     R    N

  > probabilité élevée d’échec thérapeutique
 > origine unique en Asie du Sud Est                              1978
 > triple mutant asiatique importé dans le sud
 et l’est de l’Afrique


? généralisation à l’ensemble du continent africain ?             15
stratégie

allèles dhfr
• sauvage (WT)              n = 75
• triple mutant             n = 204


 : microsatellite
 : séquence codante
                             dhfr         ts

                -3.9   -0.1 51 59 108          +0.5 +1.5   kb

WT               -      -    N C      S         -   -
triple mutant    -      -    I R      N         -   -
FCM29        -3.9 -0.1 dhfr +0,5 +1,5
              -3,9 -0,1 dhfr +0.5 +1.5     -3.9 -0.1 dhfr +0,5 +1,5
                                            -3,9 -0,1 dhfr +0.5 +1.5   -3.9 -0.1 dhfr +0,5 +1,5
                                                                        -3,9 -0,1 dhfr +0.5 +1.5     -3.9 -0.1 dhfr +0,5 +1,5
                                                                                                      -3,9 -0,1 dhfr +0.5 +1.5
     FCM29   194   147   IRN   105   202   196    -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    185   140   NCS   99    -
  ThaïTHAI    -
              -
                    -
                   139
                         IRN
                         IRN
                                -
                                -
                                      -
                                      -
                                            -
                                            -
                                                 150
                                                  -
                                                       IRN
                                                       IRN
                                                              -
                                                             107
                                                                   -
                                                                   -
                                                                        -
                                                                        -
                                                                              -
                                                                              -
                                                                                   IRN
                                                                                   IRN
                                                                                          -
                                                                                          -
                                                                                                -
                                                                                                -
                                                                                                     192
                                                                                                     187
                                                                                                           166
                                                                                                           145
                                                                                                                 NCS
                                                                                                                 NCS
                                                                                                                       99
                                                                                                                       109
                                                                                                                             -
                                                                                                                             -
              -     -    IRN   107    -     -     -    IRN   111   -    -     -    IRN    -     -    190   127   NCS   93
              -     -    IRN   107    -     -     -    IRN   111   -    -     -    IRN    -     -    191   127   NCS   109    -
              -     -    IRN   107    -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    191   136   NCS   107   204
              -     -    IRN   109    -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   127   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   136   NCS   107   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    196   127   NCS   99    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    198   139   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    198   151   NCS   99     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    214   158   NCS   95     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    188   127   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   137   NCS   103    -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    206   140   NCS   103   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    206   154   NCS   103   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    224   142   NCS   95
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    187   141   NCS   93    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    191   127   NCS   97     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    191   163   NCS   95     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    197    -    NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    200   150   NCS   85    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    202   160   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    204   137   NCS   99     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    206   127   NCS   109   204
              -     -    IRN    -     -    189    -    IRN         -    -     -    IRN    -     -    207   137   NCS   103    -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN   103   -    -     -    IRN    -     -    210   150   NCS   99    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN   103   -    -     -    IRN    -     -    191   153   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN   95     -    201   127   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    212   146   NCS   97    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   140   NCS   99     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    200   156   NCS   103   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    202   147   NCS   85     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    188   140   NCS   97    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -   192   152   IRN   103   204   189   153   NCS   95     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -   196    -    IRN    -     -    189   154   NCS   95     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN   107   204   192   135   NCS   97     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   135   NCS   103   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   135   NCS   107   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   135   NCS    -    204
              -     -    IRN    -     -    200    -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   140   NCS   99     -
              -     -    IRN    -     -    202    -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   144   NCS   102    -
              -    154   IRN    -     -     -    150   IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   154   NCS   103   204
              -    154   IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192    -    NCS   101
              -     -    IRN   103    -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    202   139   NCS    -    204
              -     -    IRN    -    204    -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    202   143   NCS   85    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    204   141   NCS   97    195
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    204   143   NCS    -     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    206   139   NCS   103   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -   192    -    IRN    -     -    206   146   NCS   99     -
              -     -    IRN   103    -     -     -    IRN    -    -   202    -    IRN    -     -    206   151   NCS   97     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN   107    -    208   135   NCS   103   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    210   137   NCS   95     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    212   127   NCS   111   205
              -     -    IRN    -     -          151   IRN    -    -    -     -    IRN    -     -     -    139   NCS   99    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    187   143   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    188   162   NCS   103   204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    192   144   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    198   140   NCS   99     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    198   149   NCS   93     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    200   144   NCS   85    204
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    212   149   NCS    -     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    214   127   NCS   99     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -     -    150   NCS   95     -
              -     -    IRN    -     -     -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    190   142   NCS   99    204
                                            -     -    IRN    -    -    -     -    IRN    -     -    191   127   NCS   111   204




                                           resistant                                                   wild-type
                                                                                                            Maïga, 2007, J Infect Dis
application 3 :
origine de la résistance à l’atovaquone + proguanil
               (Ato-PG ou Malarone®)



• traitement et prévention des infections à P. falciparum


• Ato : inhibe le complexe mitochondriale : cytochrome bc1


• proguanil (PG) : augmente l’activité de l’atovaquone (Ato)
résistance à Ato-PG

    • résistance à Ato
        - base génétique simple
        - 1 SNP mitochondrial : pfcytbY268S/C/N

0                  2000             4000            6000 (pb)

                          cox I     cytb
                                                         coding
         cox III
                                  4294a>c → Tyr268Ser
                                  4294a>g → Tyr268Cys


       - sensibilité in vitro à Ato :  x102-103
       - perte de la synergie entre Ato et PG synergy

                                                        Musset 2007, Microb Inf
paradoxe de la résistance à Ato-PG

• traitement cher (35-60 €)
      - pas/peu utilisé dans les zones d’endémies


• allèle de résistance pfcytb268 extrêmement rare dans populations naturelles
     - donc probablement non transmis par le moustique

• échecs thérapeutiques chez les voyageurs : 0,1 - 1 % !!
    - résistance du parasite
    - allèle mutant non détecté au début du traitement


     ? ces échecs sont-ils dus à un seul ou différents allèles de
     résistance pfcytb268 ?
stratégie expérimentale
échantillon : CNR Paludisme (Paris, France)
    • 7 isolats provenant d’échecs thérapeutiques (portant l’allèle mutée pfcytb268)
               - Ato-PG (6)
               - atovaquone seule (1)

    • 28 isolats appariés provenant de succès thérapeutiques par Ato-PG (portant
    l’allèle mutée pfcytbY268)


analyses :
    • séquençage du génome mitochondrial : analyse de la diversité
    moléculaire autour du locus pfcytb268
    • génotypage de polymorphes nucléaires (microsatellites)

       0                  2000                  4000                 6000 (pb)

                                 cox I         cytb
               cox III
Mitochondrial genome nucleotide position
                                               cox3                       cox1            cytb
                                         1                1   1   1   1   2   3   3   4    4     4   4   4   4   5
                               6 7 7 8 8 1                5   6   7   9   6   1   6   2    3     5   6   7   9   4
                               8 1 1 6 9 6                0   9   7   1   4   6   1   9    8     5   2   8   5   5
                               4 0 1 9 1 5                9   4   8   3   9   7   9   6    9     2   4   0   4   4
                               r r r n n s r i i i s s                            n n n s s i i r
Haplotype   Origin        n    A - - G T G A G T C C C                            A A G C A G C -
   R1       IVC           1    .   -   -   .    .     .   .   .   .   .   .   .   .   G    .     .   .   .   .   -
   R2       IVC           1    .   -   -   T    .     .   T   .   .   .   .   .   .   C    .     .   .   .   T   T
   R3       UPV           1    .   -   -   .    .     .   .   .   .   .   .   T   .   C    .     .   .   .   .   -
   R4       UPV           1    .   -   -   .    .     .   .   .   .   .   .   .   .   G    A     .   .   .   .   -
   R5       UPV           1    .   -   -   .    .     .   .   .   .   .   .   .   .   C    .     .   .   .   .   -
   R6       GUI           1    .   -   -   .    .     A   .   T   .   .   .   .   .   C    .     .   G   .   .   -
   R7       THA           1    .   -   -   .    .     .   .   .   C   .   .   .   .   C    .     .   .   .   .   -

   S1       IVC/UPV/GUI   13   .   -   -   .    .     .   .   .   .   .   .   .   .   .    .     .   .   .   .   -
   S2       IVC/UPV/GUI   9    .   -   -   .    .     .   .   A   .   .   .   .   .   .    .     .   .   .   .   -
   S3       IVC           1    .   -   -   .    .     .   .   C   .   .   .   .   T   .    .     .   .   .   .   -
   S4       UPV           1    .   -   -   .    C     .   .   A   .   .   .   .   .   .    .     .   .   .   .   -
   S5       UPV           1    .   -   -   .    .     .   .   A   .   .   T   .   .   .    .     T   .   .   .   -
   S6       GUI           1    .   -   -   .    .     .   .   A   .   .   .   .   .   .    .     .   .   T   .   -
   S7       GUI           1    .   A   T   .    .     .   .   A   .   .   .   .   .   .    .     .   .   .   .   -
   S8       GUI           1    G   -   -   .    .     .   .   .   .   T   .   .   .   .    .     .   .   .   .   -

                                                                                  Musset , Mol Biol Evol 2007
relations entre les haplotypes mitochondriaux
                     minimum-spanning network


                              R2                        R4
                                              R3

                                                                     R7
  R    : pfcytbY268C
                                                         S1
   R   : pfcytbY268S                                   R1 R5               S8



                                        S3
                                                        S2
• diversité génétique des sauvages et                                     R6
des résistants comparables                   S4                     S6

• pas compatible avec une origine
unique et récente de la résistance
                                                  S5           S7
variations de séquence avant et après traitement
                                    Ato-PG
                     D0                                     Déchéc
                                                                                    (length, bp)
           Mitochondrial genome nucleotide position                             Microsatellite
                    1   1   1   1   1   2   3   3   4   4   4   4   4   4   5
                                                                                T    T   A   P     T
          6 7 7 8 8 1   5   6   7   9   6   1   6   2   3   5   6   7   9   4   A    A       f     A
                                                                                         R
          8 1 1 6 9 6   0   9   7   1   4   6   1   9   8   5   2   8   5   5   A    A   A   P     A
          4 0 1 9 1 5   9   4   8   3   9   7   9   6   9   2   4   0   4   4   8    6       K     8
                                                                                         2
                                                                                7    0       2     1
Time Hap A - - G T G A G T C C C A A G C A G C -
D22    R4 . - - . . . . . . . . . . G A . . . . - 80 71 98 165 175
D0        . - - . . . . . . . . . . . A . . . . - 80 71 98 165 175



 • 5 patients : identité moléculaire parfaite entre D0 et Déchec
 • 1 patient : séquence D0 incomplète, identité nucléaire
 • 1 patient : D0 non collecté
interprétation des données




mutation
                              ~ 105
*




                    reproduction
         *


                      asexuée
    *




traitement                ~ 108-1012
*
*
*
*
*
*
*



                     • mutation se produit et est sélectionnée
                     chez les patients indépendamment
conclusions sur la résistance à Ato-PG


• multiples origines de l’allèle de résistance à Ato-PG

• cas unique : observer en situation naturelle la phase initiale de
l’évolution la résistance, avant la transmission de l’allèle mutant
par le moustique

• Ato-PG non recommandé pour un usage massif en zone
d’endémie
évolution de la résistance aux antipaludiques
  • origines rares pour SP et CQ (≥ 3 SNPs)
  • sélection intense sur les populations
  • migrations intra et intercontinentales
  • échecs thérapeutiques liés à la transmission de parasites
  chimiorésistants

  • origines multiples pour Ato-PG
  • échecs thérapeutiques liés à la sélection de mutations de
  novo (SP, CQ)

  • signatures de sélection naturelle peuvent être recherchées
  dans les génomes de populations
       - diminution de la diversité génétique
       - différenciation génétique entre populations
UMR216
                       Collaborateurs
• Pr Jacques Le Bras
                       • Dr Abdoulaye Djimdé (MRTC, Bamako)
• Dr Oumou Maïga
                       • Dr Milijaona Randrianarivelojosia (IPM)
• Dr Lise Musset
                       • Dr JF Lepère (Bandraboua, Mayotte)
• Emmanuelle Renard
                       • Dr Agnès Aubouy (Gabon)
• Dr Jérôme Clain
                       • Dr Sabah Omar (Kenya)

CNR Paludisme
• Pr Jacques Le Bras
• Véronique Hubert
• Dr Sandrine Houzé

Contenu connexe

En vedette

Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en...
Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en...Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en...
Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en...
Institut Pasteur de Madagascar
 
Lutte antipaludique : agir au niveau mondial,régional ou national
Lutte antipaludique : agir au niveau mondial,régional ou nationalLutte antipaludique : agir au niveau mondial,régional ou national
Lutte antipaludique : agir au niveau mondial,régional ou national
Institut Pasteur de Madagascar
 
Les anophèles du Niger, Recherche et appui au programme national de lutte
Les anophèles du Niger, Recherche et appui au programme national de lutteLes anophèles du Niger, Recherche et appui au programme national de lutte
Les anophèles du Niger, Recherche et appui au programme national de lutte
Institut Pasteur de Madagascar
 
Conférence PaaS par Farnell element14 à RTS Embeded 2015
Conférence PaaS par Farnell element14 à RTS Embeded 2015Conférence PaaS par Farnell element14 à RTS Embeded 2015
Conférence PaaS par Farnell element14 à RTS Embeded 2015
Jean-Pierre CROZEMARIE
 
Les méthodes d'évaluation de la transmission
Les méthodes d'évaluation de la transmissionLes méthodes d'évaluation de la transmission
Les méthodes d'évaluation de la transmission
Institut Pasteur de Madagascar
 
LEFT productions - Vos films pour internet
LEFT productions - Vos films pour internetLEFT productions - Vos films pour internet
LEFT productions - Vos films pour internet
LEFTProductions
 
Génétique humaine et susceptibilité au paludisme
Génétique humaine et susceptibilité au paludismeGénétique humaine et susceptibilité au paludisme
Génétique humaine et susceptibilité au paludisme
Institut Pasteur de Madagascar
 
les ribosomes et la synthèse proteique
les ribosomes et la synthèse proteiqueles ribosomes et la synthèse proteique
les ribosomes et la synthèse proteique
Hachem Ben Salah
 
Prix d’un programme de lutte efficace et financements internationaux
Prix d’un programme de lutte efficace et financements internationauxPrix d’un programme de lutte efficace et financements internationaux
Prix d’un programme de lutte efficace et financements internationaux
Institut Pasteur de Madagascar
 
Toulouse Business School - Catalogue formation
Toulouse Business School - Catalogue formationToulouse Business School - Catalogue formation
Toulouse Business School - Catalogue formation
Santos Muriel
 
SEO: L'optimisation interne qui fonctionnent dans l'eere post panda and pingouin
SEO: L'optimisation interne qui fonctionnent dans l'eere post panda and pingouinSEO: L'optimisation interne qui fonctionnent dans l'eere post panda and pingouin
SEO: L'optimisation interne qui fonctionnent dans l'eere post panda and pingouin
Online Marketing Institute
 
Computraining replay
Computraining replayComputraining replay
Computraining replay
marieville
 
Transfermuga - Séminaire du 13 Décembre 2013
Transfermuga - Séminaire du 13 Décembre 2013Transfermuga - Séminaire du 13 Décembre 2013
Transfermuga - Séminaire du 13 Décembre 2013
euroregion
 
JoB-Btp.fr, le site de l'emploi des métiers de la construction et des travaux...
JoB-Btp.fr, le site de l'emploi des métiers de la construction et des travaux...JoB-Btp.fr, le site de l'emploi des métiers de la construction et des travaux...
JoB-Btp.fr, le site de l'emploi des métiers de la construction et des travaux...
JoB-Btp.fr
 
Plaquettes djebel passion 1
Plaquettes djebel passion 1Plaquettes djebel passion 1
Plaquettes djebel passion 1
antoine-dp
 
Les financements pour le mouvement "Roll Back Malaria"
Les financements pour le mouvement "Roll Back Malaria"Les financements pour le mouvement "Roll Back Malaria"
Les financements pour le mouvement "Roll Back Malaria"
Institut Pasteur de Madagascar
 

En vedette (20)

Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en...
Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en...Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en...
Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en...
 
Lutte antipaludique : agir au niveau mondial,régional ou national
Lutte antipaludique : agir au niveau mondial,régional ou nationalLutte antipaludique : agir au niveau mondial,régional ou national
Lutte antipaludique : agir au niveau mondial,régional ou national
 
Les anophèles du Niger, Recherche et appui au programme national de lutte
Les anophèles du Niger, Recherche et appui au programme national de lutteLes anophèles du Niger, Recherche et appui au programme national de lutte
Les anophèles du Niger, Recherche et appui au programme national de lutte
 
365 jours
365 jours365 jours
365 jours
 
Conférence PaaS par Farnell element14 à RTS Embeded 2015
Conférence PaaS par Farnell element14 à RTS Embeded 2015Conférence PaaS par Farnell element14 à RTS Embeded 2015
Conférence PaaS par Farnell element14 à RTS Embeded 2015
 
Les méthodes d'évaluation de la transmission
Les méthodes d'évaluation de la transmissionLes méthodes d'évaluation de la transmission
Les méthodes d'évaluation de la transmission
 
LEFT productions - Vos films pour internet
LEFT productions - Vos films pour internetLEFT productions - Vos films pour internet
LEFT productions - Vos films pour internet
 
Génétique humaine et susceptibilité au paludisme
Génétique humaine et susceptibilité au paludismeGénétique humaine et susceptibilité au paludisme
Génétique humaine et susceptibilité au paludisme
 
les ribosomes et la synthèse proteique
les ribosomes et la synthèse proteiqueles ribosomes et la synthèse proteique
les ribosomes et la synthèse proteique
 
Prix d’un programme de lutte efficace et financements internationaux
Prix d’un programme de lutte efficace et financements internationauxPrix d’un programme de lutte efficace et financements internationaux
Prix d’un programme de lutte efficace et financements internationaux
 
Toulouse Business School - Catalogue formation
Toulouse Business School - Catalogue formationToulouse Business School - Catalogue formation
Toulouse Business School - Catalogue formation
 
slide_3
slide_3slide_3
slide_3
 
SEO: L'optimisation interne qui fonctionnent dans l'eere post panda and pingouin
SEO: L'optimisation interne qui fonctionnent dans l'eere post panda and pingouinSEO: L'optimisation interne qui fonctionnent dans l'eere post panda and pingouin
SEO: L'optimisation interne qui fonctionnent dans l'eere post panda and pingouin
 
Computraining replay
Computraining replayComputraining replay
Computraining replay
 
Transfermuga - Séminaire du 13 Décembre 2013
Transfermuga - Séminaire du 13 Décembre 2013Transfermuga - Séminaire du 13 Décembre 2013
Transfermuga - Séminaire du 13 Décembre 2013
 
JoB-Btp.fr, le site de l'emploi des métiers de la construction et des travaux...
JoB-Btp.fr, le site de l'emploi des métiers de la construction et des travaux...JoB-Btp.fr, le site de l'emploi des métiers de la construction et des travaux...
JoB-Btp.fr, le site de l'emploi des métiers de la construction et des travaux...
 
Plaquettes djebel passion 1
Plaquettes djebel passion 1Plaquettes djebel passion 1
Plaquettes djebel passion 1
 
Les financements pour le mouvement "Roll Back Malaria"
Les financements pour le mouvement "Roll Back Malaria"Les financements pour le mouvement "Roll Back Malaria"
Les financements pour le mouvement "Roll Back Malaria"
 
Définition
DéfinitionDéfinition
Définition
 
Slides timeline
Slides timelineSlides timeline
Slides timeline
 

Plus de Institut Pasteur de Madagascar

Annexe 3 atelier paludisme 2009
Annexe 3  atelier paludisme 2009Annexe 3  atelier paludisme 2009
Annexe 3 atelier paludisme 2009
Institut Pasteur de Madagascar
 
Rapport audit 2007
Rapport audit 2007Rapport audit 2007
Rapport audit 2007
Institut Pasteur de Madagascar
 
Bilan evaluations 2007
Bilan evaluations 2007Bilan evaluations 2007
Bilan evaluations 2007
Institut Pasteur de Madagascar
 
Exemple evaluation 2007
Exemple evaluation 2007Exemple evaluation 2007
Exemple evaluation 2007
Institut Pasteur de Madagascar
 
Presentation atelier paludisme 2007
Presentation atelier paludisme 2007Presentation atelier paludisme 2007
Presentation atelier paludisme 2007
Institut Pasteur de Madagascar
 
Comparaison entre les premières et les dernières évaluations - 2006
Comparaison entre les premières et les dernières évaluations - 2006Comparaison entre les premières et les dernières évaluations - 2006
Comparaison entre les premières et les dernières évaluations - 2006
Institut Pasteur de Madagascar
 
Exemple grille evaluation 2006
Exemple grille evaluation 2006Exemple grille evaluation 2006
Exemple grille evaluation 2006
Institut Pasteur de Madagascar
 
Présentation Atelier Paludisme 2006
Présentation Atelier Paludisme 2006Présentation Atelier Paludisme 2006
Présentation Atelier Paludisme 2006
Institut Pasteur de Madagascar
 
Rapport evaluations 1an 2 ans - 2005
Rapport evaluations 1an 2 ans - 2005Rapport evaluations 1an 2 ans - 2005
Rapport evaluations 1an 2 ans - 2005
Institut Pasteur de Madagascar
 
Grille d'evalution 2005
Grille d'evalution 2005Grille d'evalution 2005
Grille d'evalution 2005
Institut Pasteur de Madagascar
 
Participants tables rondes 2005
Participants tables rondes 2005Participants tables rondes 2005
Participants tables rondes 2005
Institut Pasteur de Madagascar
 
Diaporama 2003
Diaporama 2003Diaporama 2003
Certificat 2003
Certificat 2003Certificat 2003
Grilles d'évaluations 2004
Grilles d'évaluations 2004Grilles d'évaluations 2004
Grilles d'évaluations 2004
Institut Pasteur de Madagascar
 
Synthèse des Grilles Evaluations 2003
Synthèse des Grilles Evaluations 2003Synthèse des Grilles Evaluations 2003
Synthèse des Grilles Evaluations 2003
Institut Pasteur de Madagascar
 
Guide pour le suivi et l'évaluation des programmes
Guide pour le suivi et l'évaluation des programmesGuide pour le suivi et l'évaluation des programmes
Guide pour le suivi et l'évaluation des programmes
Institut Pasteur de Madagascar
 
Monitoring and Evaluation Toolkit
Monitoring and Evaluation ToolkitMonitoring and Evaluation Toolkit
Monitoring and Evaluation Toolkit
Institut Pasteur de Madagascar
 
Développement nouveaux médicaments
Développement nouveaux médicamentsDéveloppement nouveaux médicaments
Développement nouveaux médicaments
Institut Pasteur de Madagascar
 
Diagnostic biologique du paludisme
Diagnostic biologique du paludismeDiagnostic biologique du paludisme
Diagnostic biologique du paludisme
Institut Pasteur de Madagascar
 

Plus de Institut Pasteur de Madagascar (20)

Annexe 3 atelier paludisme 2009
Annexe 3  atelier paludisme 2009Annexe 3  atelier paludisme 2009
Annexe 3 atelier paludisme 2009
 
Rapport audit 2007
Rapport audit 2007Rapport audit 2007
Rapport audit 2007
 
Bilan evaluations 2007
Bilan evaluations 2007Bilan evaluations 2007
Bilan evaluations 2007
 
Exemple evaluation 2007
Exemple evaluation 2007Exemple evaluation 2007
Exemple evaluation 2007
 
Presentation atelier paludisme 2007
Presentation atelier paludisme 2007Presentation atelier paludisme 2007
Presentation atelier paludisme 2007
 
Comparaison entre les premières et les dernières évaluations - 2006
Comparaison entre les premières et les dernières évaluations - 2006Comparaison entre les premières et les dernières évaluations - 2006
Comparaison entre les premières et les dernières évaluations - 2006
 
Exemple grille evaluation 2006
Exemple grille evaluation 2006Exemple grille evaluation 2006
Exemple grille evaluation 2006
 
Présentation Atelier Paludisme 2006
Présentation Atelier Paludisme 2006Présentation Atelier Paludisme 2006
Présentation Atelier Paludisme 2006
 
Rapport evaluations 1an 2 ans - 2005
Rapport evaluations 1an 2 ans - 2005Rapport evaluations 1an 2 ans - 2005
Rapport evaluations 1an 2 ans - 2005
 
Synthese 2005
Synthese 2005Synthese 2005
Synthese 2005
 
Grille d'evalution 2005
Grille d'evalution 2005Grille d'evalution 2005
Grille d'evalution 2005
 
Participants tables rondes 2005
Participants tables rondes 2005Participants tables rondes 2005
Participants tables rondes 2005
 
Diaporama 2003
Diaporama 2003Diaporama 2003
Diaporama 2003
 
Certificat 2003
Certificat 2003Certificat 2003
Certificat 2003
 
Grilles d'évaluations 2004
Grilles d'évaluations 2004Grilles d'évaluations 2004
Grilles d'évaluations 2004
 
Synthèse des Grilles Evaluations 2003
Synthèse des Grilles Evaluations 2003Synthèse des Grilles Evaluations 2003
Synthèse des Grilles Evaluations 2003
 
Guide pour le suivi et l'évaluation des programmes
Guide pour le suivi et l'évaluation des programmesGuide pour le suivi et l'évaluation des programmes
Guide pour le suivi et l'évaluation des programmes
 
Monitoring and Evaluation Toolkit
Monitoring and Evaluation ToolkitMonitoring and Evaluation Toolkit
Monitoring and Evaluation Toolkit
 
Développement nouveaux médicaments
Développement nouveaux médicamentsDéveloppement nouveaux médicaments
Développement nouveaux médicaments
 
Diagnostic biologique du paludisme
Diagnostic biologique du paludismeDiagnostic biologique du paludisme
Diagnostic biologique du paludisme
 

Evolution de la résistance de Plasmodium falciparum aux médicaments antipaludiques

  • 1. évolution de la résistance de Plasmodium falciparum aux médicaments antipaludiques jerome.clain@parisdescartes.fr UMR216 ‘Santé de la mère et de l’enfant face aux infections tropicales’ Institut Pasteur de Madagascar, 29 mars 2011
  • 2. histoire de la résistance aux antipaludiques ART-T SE Asia Ato/Pg-R travellers adapted from Ekland & Fidock, 2008
  • 3. principaux gènes de résistance aux médicaments antipaludiques ART-T SE Asia Ato/Pg-R travellers • pfcrt (3 SNPs) • pdhfr (3-4 SNPs) • pfmdr1 (SNPs) • pfmdr1 (CNVs) • pfcytb (1 SNP) • dhps (1-3 SNPs) • vacuole digestive • cytoplasme • mitochondrie • fonction inconnue • synthèse d’ADN • transfert d’e-
  • 4. • comment évoluent les allèles (gènes) de chimiorésistance ? • combien d’origines de chimiorésistance ?
  • 5. 1- brefs rappels de génétique des populations 2- gène pfdhfr et origine de la résistance à la pyriméthamine 3- gène pfcytb et résistance à la Malarone (atovaquone-proguanil)
  • 6. les 2 échelles de l’évolution • au sein d’1 espèce • entre plusieurs espèces • au sein/entre populations • échelle : temps géologiques • échelle : générations mutation migration dérive génétique sélection naturelle
  • 7. évolution des populations changement des fréquences alléliques au sein d’une population N individus diploïdes 2 allèles 0.75 génération 1 0.25 ♀ ♂ Évolution si : • mutation urne des gamètes effectifs infinis • migration 2N tirages • dérive génétique • sélection naturelle N individus diploïdes 0.75 0.25 génération 2
  • 8. marqueurs du polymorphisme génétique (1) SNP : single nucleotide polymorphism allèle sauvage : 5’-ATAACATGA-3’ allèles mutants : ATAAAATGA 5’-ATAATATGA-3’ ATAAGATGA « bénéfique » « délétère » « neutre » « avantageux » « désavantageux » • ~ 1 SNP / 300 pdb • ~ 100 000 SNPs (objectif : 350 000) Mu et al. 2006
  • 9. marqueurs moléculaires du polymorphisme (2) • polymorphismes de séquences répétées en tandem : microsatellites 5’-ATCTAGCACACACACACACACATCCTG-3’ (CA)8 5’-ATCTAGCACACACACACACACACACATCCTG-3’ (CA)10 - très polymorphes : nombreux allèles différents dans une population - neutres le plus souvent
  • 10. diversité génétique et origine des mutations : microsatellite : séquence codante kb -5.3 -4.4 -0.1 dhfr (TA)n (TAA)n (CG)n phénotype 13 12 10 sensible 12 7 8 S 10 8 9 S 9 9 9 S 7 7 6 S 8 10 12 S 11 11 11 S
  • 11. apparition d’un allèle de résistance par mutation : séquences répétées en tandem (microsatellite) : séquence codante kb -5.3 -4.4 -0.1 dhfr (TA)n (TAA)n (CG)n 51 59 108 phénotype 13 12 10 résistant 12 7 8 sensible 10 8 9 S 9 9 9 S 7 7 6 S 8 10 12 S 11 11 11 S
  • 12. sélection de l’allèle de résistance 1. fréquence de l’allèle de résistance  : sélection directionnelle positive 2. effet « auto-stop » ou hitchhiking 3. déséquilibre de liaison 13 12 10 13 12 10 13 12 10 13 12 10 13 12 10 13 12 10 12 7 8 12 7 8 10 8 9 10 8 9 9 9 9 traitement 9 9 9 7 7 6 = 7 7 6 8 10 12 sélection 8 10 12 11 11 11 11 11 11
  • 13. diversité réduite à proximité de l’allèle sélectionné 12 7 8 10 8 9 9 9 9 7 7 6 8 10 12 11 11 11 13 12 10 13 12 10 13 12 10 13 12 10 13 12 10
  • 14. application 1 : recherche de locus sélectionnés par approche genome-scan identification du gène pfcrt, déterminant de la résistance à la chloroquine Réduction de la diversité allélique chromosomes parasites résistants à la chloroquine parasites sensibles à la chloroquine Wooton 2001, Nature
  • 15. application 2 : origine de la résistance à la pyrimethamine en Afrique > base génétique : 3 SNPs dans le gène dihydrofolate reductase dhfr ts 51 59 108 wild type N C S triple mutant I R N > probabilité élevée d’échec thérapeutique > origine unique en Asie du Sud Est 1978 > triple mutant asiatique importé dans le sud et l’est de l’Afrique ? généralisation à l’ensemble du continent africain ? 15
  • 16. stratégie allèles dhfr • sauvage (WT) n = 75 • triple mutant n = 204 : microsatellite : séquence codante dhfr ts -3.9 -0.1 51 59 108 +0.5 +1.5 kb WT - - N C S - - triple mutant - - I R N - -
  • 17. FCM29 -3.9 -0.1 dhfr +0,5 +1,5 -3,9 -0,1 dhfr +0.5 +1.5 -3.9 -0.1 dhfr +0,5 +1,5 -3,9 -0,1 dhfr +0.5 +1.5 -3.9 -0.1 dhfr +0,5 +1,5 -3,9 -0,1 dhfr +0.5 +1.5 -3.9 -0.1 dhfr +0,5 +1,5 -3,9 -0,1 dhfr +0.5 +1.5 FCM29 194 147 IRN 105 202 196 - IRN - - - - IRN - - 185 140 NCS 99 - ThaïTHAI - - - 139 IRN IRN - - - - - - 150 - IRN IRN - 107 - - - - - - IRN IRN - - - - 192 187 166 145 NCS NCS 99 109 - - - - IRN 107 - - - IRN 111 - - - IRN - - 190 127 NCS 93 - - IRN 107 - - - IRN 111 - - - IRN - - 191 127 NCS 109 - - - IRN 107 - - - IRN - - - - IRN - - 191 136 NCS 107 204 - - IRN 109 - - - IRN - - - - IRN - - 192 127 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 192 136 NCS 107 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 196 127 NCS 99 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 198 139 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 198 151 NCS 99 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 214 158 NCS 95 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 188 127 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 192 137 NCS 103 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 206 140 NCS 103 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 206 154 NCS 103 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 224 142 NCS 95 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 187 141 NCS 93 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 191 127 NCS 97 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 191 163 NCS 95 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 197 - NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 200 150 NCS 85 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 202 160 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 204 137 NCS 99 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 206 127 NCS 109 204 - - IRN - - 189 - IRN - - - IRN - - 207 137 NCS 103 - - - IRN - - - - IRN 103 - - - IRN - - 210 150 NCS 99 204 - - IRN - - - - IRN 103 - - - IRN - - 191 153 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN 95 - 201 127 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 212 146 NCS 97 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 192 140 NCS 99 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 200 156 NCS 103 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 202 147 NCS 85 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 188 140 NCS 97 204 - - IRN - - - - IRN - - 192 152 IRN 103 204 189 153 NCS 95 - - - IRN - - - - IRN - - 196 - IRN - - 189 154 NCS 95 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN 107 204 192 135 NCS 97 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 192 135 NCS 103 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 192 135 NCS 107 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 192 135 NCS - 204 - - IRN - - 200 - IRN - - - - IRN - - 192 140 NCS 99 - - - IRN - - 202 - IRN - - - - IRN - - 192 144 NCS 102 - - 154 IRN - - - 150 IRN - - - - IRN - - 192 154 NCS 103 204 - 154 IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 192 - NCS 101 - - IRN 103 - - - IRN - - - - IRN - - 202 139 NCS - 204 - - IRN - 204 - - IRN - - - - IRN - - 202 143 NCS 85 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 204 141 NCS 97 195 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 204 143 NCS - - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 206 139 NCS 103 204 - - IRN - - - - IRN - - 192 - IRN - - 206 146 NCS 99 - - - IRN 103 - - - IRN - - 202 - IRN - - 206 151 NCS 97 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN 107 - 208 135 NCS 103 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 210 137 NCS 95 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 212 127 NCS 111 205 - - IRN - - 151 IRN - - - - IRN - - - 139 NCS 99 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 187 143 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 188 162 NCS 103 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 192 144 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 198 140 NCS 99 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 198 149 NCS 93 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 200 144 NCS 85 204 - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 212 149 NCS - - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 214 127 NCS 99 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - - 150 NCS 95 - - - IRN - - - - IRN - - - - IRN - - 190 142 NCS 99 204 - - IRN - - - - IRN - - 191 127 NCS 111 204 resistant wild-type Maïga, 2007, J Infect Dis
  • 18. application 3 : origine de la résistance à l’atovaquone + proguanil (Ato-PG ou Malarone®) • traitement et prévention des infections à P. falciparum • Ato : inhibe le complexe mitochondriale : cytochrome bc1 • proguanil (PG) : augmente l’activité de l’atovaquone (Ato)
  • 19. résistance à Ato-PG • résistance à Ato - base génétique simple - 1 SNP mitochondrial : pfcytbY268S/C/N 0 2000 4000 6000 (pb) cox I cytb coding cox III 4294a>c → Tyr268Ser 4294a>g → Tyr268Cys - sensibilité in vitro à Ato :  x102-103 - perte de la synergie entre Ato et PG synergy Musset 2007, Microb Inf
  • 20. paradoxe de la résistance à Ato-PG • traitement cher (35-60 €) - pas/peu utilisé dans les zones d’endémies • allèle de résistance pfcytb268 extrêmement rare dans populations naturelles - donc probablement non transmis par le moustique • échecs thérapeutiques chez les voyageurs : 0,1 - 1 % !! - résistance du parasite - allèle mutant non détecté au début du traitement ? ces échecs sont-ils dus à un seul ou différents allèles de résistance pfcytb268 ?
  • 21. stratégie expérimentale échantillon : CNR Paludisme (Paris, France) • 7 isolats provenant d’échecs thérapeutiques (portant l’allèle mutée pfcytb268) - Ato-PG (6) - atovaquone seule (1) • 28 isolats appariés provenant de succès thérapeutiques par Ato-PG (portant l’allèle mutée pfcytbY268) analyses : • séquençage du génome mitochondrial : analyse de la diversité moléculaire autour du locus pfcytb268 • génotypage de polymorphes nucléaires (microsatellites) 0 2000 4000 6000 (pb) cox I cytb cox III
  • 22. Mitochondrial genome nucleotide position cox3 cox1 cytb 1 1 1 1 1 2 3 3 4 4 4 4 4 4 5 6 7 7 8 8 1 5 6 7 9 6 1 6 2 3 5 6 7 9 4 8 1 1 6 9 6 0 9 7 1 4 6 1 9 8 5 2 8 5 5 4 0 1 9 1 5 9 4 8 3 9 7 9 6 9 2 4 0 4 4 r r r n n s r i i i s s n n n s s i i r Haplotype Origin n A - - G T G A G T C C C A A G C A G C - R1 IVC 1 . - - . . . . . . . . . . G . . . . . - R2 IVC 1 . - - T . . T . . . . . . C . . . . T T R3 UPV 1 . - - . . . . . . . . T . C . . . . . - R4 UPV 1 . - - . . . . . . . . . . G A . . . . - R5 UPV 1 . - - . . . . . . . . . . C . . . . . - R6 GUI 1 . - - . . A . T . . . . . C . . G . . - R7 THA 1 . - - . . . . . C . . . . C . . . . . - S1 IVC/UPV/GUI 13 . - - . . . . . . . . . . . . . . . . - S2 IVC/UPV/GUI 9 . - - . . . . A . . . . . . . . . . . - S3 IVC 1 . - - . . . . C . . . . T . . . . . . - S4 UPV 1 . - - . C . . A . . . . . . . . . . . - S5 UPV 1 . - - . . . . A . . T . . . . T . . . - S6 GUI 1 . - - . . . . A . . . . . . . . . T . - S7 GUI 1 . A T . . . . A . . . . . . . . . . . - S8 GUI 1 G - - . . . . . . T . . . . . . . . . - Musset , Mol Biol Evol 2007
  • 23. relations entre les haplotypes mitochondriaux minimum-spanning network R2 R4 R3 R7 R : pfcytbY268C S1 R : pfcytbY268S R1 R5 S8 S3 S2 • diversité génétique des sauvages et R6 des résistants comparables S4 S6 • pas compatible avec une origine unique et récente de la résistance S5 S7
  • 24. variations de séquence avant et après traitement Ato-PG D0 Déchéc (length, bp) Mitochondrial genome nucleotide position Microsatellite 1 1 1 1 1 2 3 3 4 4 4 4 4 4 5 T T A P T 6 7 7 8 8 1 5 6 7 9 6 1 6 2 3 5 6 7 9 4 A A f A R 8 1 1 6 9 6 0 9 7 1 4 6 1 9 8 5 2 8 5 5 A A A P A 4 0 1 9 1 5 9 4 8 3 9 7 9 6 9 2 4 0 4 4 8 6 K 8 2 7 0 2 1 Time Hap A - - G T G A G T C C C A A G C A G C - D22 R4 . - - . . . . . . . . . . G A . . . . - 80 71 98 165 175 D0 . - - . . . . . . . . . . . A . . . . - 80 71 98 165 175 • 5 patients : identité moléculaire parfaite entre D0 et Déchec • 1 patient : séquence D0 incomplète, identité nucléaire • 1 patient : D0 non collecté
  • 25. interprétation des données mutation ~ 105 * reproduction * asexuée * traitement ~ 108-1012 * * * * * * * • mutation se produit et est sélectionnée chez les patients indépendamment
  • 26. conclusions sur la résistance à Ato-PG • multiples origines de l’allèle de résistance à Ato-PG • cas unique : observer en situation naturelle la phase initiale de l’évolution la résistance, avant la transmission de l’allèle mutant par le moustique • Ato-PG non recommandé pour un usage massif en zone d’endémie
  • 27. évolution de la résistance aux antipaludiques • origines rares pour SP et CQ (≥ 3 SNPs) • sélection intense sur les populations • migrations intra et intercontinentales • échecs thérapeutiques liés à la transmission de parasites chimiorésistants • origines multiples pour Ato-PG • échecs thérapeutiques liés à la sélection de mutations de novo (SP, CQ) • signatures de sélection naturelle peuvent être recherchées dans les génomes de populations - diminution de la diversité génétique - différenciation génétique entre populations
  • 28. UMR216 Collaborateurs • Pr Jacques Le Bras • Dr Abdoulaye Djimdé (MRTC, Bamako) • Dr Oumou Maïga • Dr Milijaona Randrianarivelojosia (IPM) • Dr Lise Musset • Dr JF Lepère (Bandraboua, Mayotte) • Emmanuelle Renard • Dr Agnès Aubouy (Gabon) • Dr Jérôme Clain • Dr Sabah Omar (Kenya) CNR Paludisme • Pr Jacques Le Bras • Véronique Hubert • Dr Sandrine Houzé