SlideShare une entreprise Scribd logo
PATHOGENÈSE DES LÉSIONS
   HÉPATIQUES DU VHC :
           MODÉLISATION ANIMALE

                            Hervé LERAT
                               INSERM U955
               Département de Virologie Moléculaire et Immunologie
                                        Molé
 Physiopathologie et Thérapeutique des Hépatites Virales Chroniques (Pr. Pawlotsky)
                     Thé               Hé
                    Hôpital Henri Mondor, Créteil, France.
Pathologies viro-induites:
      contribution du virus?

   Contexte d’un organe entier
      dans un animal vivant.



Nécessité de développement de
      modèles animaux
Modèles animaux pour l’étude des
 pathologies induites par le VHC
                Modèles d’infection

Primates non-humains
  Chimpanzé
  Ouistiti




              Problème de disponibilité et de coût.
Modèles animaux pour l’étude des
 pathologies induites par le VHC
             Modèles d’infection




Rongeurs (“humanisés”)
  uPA/SCID
  Trimera
  rat
Modèles d’infection (rongeurs)


                                            Viremia               Duration of infection
Rodent models        Humanization                                                                     Peak viremia
                                           Copies/mL                   (Months)

                  Human hepatocyte
uPA/SCID                                   104 to 8x107                    Up to 9                       1 month
                    transplantation


                  Xenograft of human
Trimera mice                                  7x104                      Around 1                         18 days
                     liver tissues


                 Immunotolerization and
Rat             transplantation of human     1-2x104                       Up to 4                       3 months
                    hepatoma cell line


                                                 Adapted from Kremsdorf et Brezillon, World J Gastroenterol 2007




                 Techniquement très complexes à mettre en œuvre
Modèles animaux pour l’étude des
 pathologies induites par le VHC
  Modèles d’expression des protéines virales


Transgenèse murine
  Classique
  Conditionnelle (système Cre/Lox)




        Avantages :
            Facilité d’élevage, technique rodée
            Expression chronique à long terme
            Pas de réponse immune
            Pas de réplication virale
The full-length HCV ORF transgenic
                    mouse model FL-N/35




                                                              NS4a
Albumin promoter      core E1     E2         NS2    NS3              NS4b NS5a   NS5b                FL-N




                                        p7
                                                                                        SV40 PolyA


                                                                            Genotype 1b

                                              micro-injections
                                             C57Bl6J x C3H/HeJ




                                                   Liver                                FL-N/35



          DNA HCV +                                   RNA HCV +
          X C57BL6J                                   X C57BL6J


                                Lerat et al., Gastroenterology 2002
The full-length HCV ORF transgenic
                    mouse model FL-N/35




                                                              NS4a
Albumin promoter      core E1     E2         NS2    NS3              NS4b NS5a   NS5b                 FL-N




                                        p7
                                                                                        SV40 PolyA


                                                                            Genotype 1b

                                              micro-injections
                                             C57Bl6J x C3H/HeJ



                                                                                         Carcinoma




                                                   Liver

                                                                                          Steatosis


          DNA HCV +                                   RNA HCV +
          X C57BL6J                                   X C57BL6J
                                                                                                     +CCl4

                                                                                        Co-fibrogenic
                                                                                        Co-
                                Lerat et al., Gastroenterology 2002
Hepatocellular Carcinomas


       1 cm




                  FL-N/35-171UNC

                  FL-N/35-170UNC
        1 cm




A



       1 cm      FL-N/35-102CERFE




                                    Lerat et al., Gastroenterology 2002.
Visualisation en IRM des CHC chez la souris VHC




                                                               Tumeur




                             (H. Lerat, A. Luciani et T. Décaens, données personnelles.)
CHC induits par le VHC:

   Mécanismes Moléculaires?

Rôle direct des protéines virales?
CHC viro-induits: mécanismes moléculaires?
Modulation du cycle cellulaire dans le foie des souris transgéniques


                                                                                      ARNm
Incorporation de BrdU     Détection PCNA
                                                                             Cyclin B1                MYC

                                                                       9



                                                                       7




                                                mRNA (Fold increase)
                                                                       5



                                                                       3



                                                                       1




        Non TG   HCV TG       Non TG   HCV TG                              Non TG   HCV TG     Non TG     HCV TG




      -> Les mécanismes restent à définir.
                                                                                      Lerat et al., Gastroenterology 2002.
                                                                                      Keasler, Virology 2006.
                                                                                      M. Higgs (données personnelles)
Inhibition de l’apoptose dans le foie des souris transgéniques



                                                                                       50
                                                                                               P<0.05




                                                             % apoptotic hepatocytes
                                    +                                                  40                     P<0.01




                                    Fluorescence intensity
Hoechst




                                                                                       30


                                                                                       20



                                     -                                                 10

          Non TG       HCV TG
                                                                                        0
                                                                                            in vivo         ex vivo


                                                                                                  non TG

                                                                                                  HCV TG




                                                                                            (Disson et al., Gastroenterology, 2004)
Inhibition de l’apoptose dans le foie des souris transgéniques



        Activated
        caspase 8
                              Bid-t
                              Bid-                                                                 Bid
                              14 kD
 Bid                                                                               1.2
24 kD
                          +
                                                                                   1




                                                         Bi d protein level (AU)
                    Bid-N
                    Bid-                                                                            p<0.01
                    10 kD                                                          0.8
                                          Cytochrome C
                                                                                   0.6
                                          Apoptosis
                                                                                   0.4




                                                         Bid
                                                                                   0.2
                                                                                           N=10           N=13
                          LIVER       KIDNEY
          HCV tg      -          +    -     +                                       0
                                                                                            WT           HCV tg

         Bid

    GAPDH



                                                                                    (Disson et al., Gastroenterology, 2004)
Résumé : inhibition de la voie FAS dans le foie des souris VHC


                                   FasL

                                                       Membrane cellulaire
                         Fas

                                                             VHC (NS5A)
                                               calpaïne
                                                                      mitochondrie


                               caspase 8         Bid




                                                          cytochrome C


                               caspase 3         caspase 9



                                                                         CIDE-B
Etape vers le     APOPTOSE            CIDE-B
   cancer                                                 VHC         Annexin V
                                                          (NS2)
                                   fragmentation ADN
                                                                         HCV TG           -      +

                                                                      Erdtmann et al., J Biol Chem 2003.
Diminution de l’expression de bid chez les patients infectés par le VHC




           Patients         #1               #2              #3

           Tissus      NT        CHC    NT        CHC   NT        CHC

        Bid (21 kD)

           GAPDH


                      NT= tissu adjacent au CHC




                                                        (Simonin et al., Hepatology 2009)
Diminution de l’expression de bid chez les patients infectés par le VHC



                                   3




                   Bid/GAPDH
                                   2




                                   1

                                                           *

                                   0
                 VHC                   -    +    +   -     +    +
              Cirrhose                 -    -    +   -     -    +
               Tissus                       NT            CHC

                               n       15   9    8   15    9    8




                                                                    Simonin et al., Hepatology, 2009
Persistence of adenovirus infection in HCV+ hepatocytes
                             (Disson et al., Gastroenterology, 2004)



        Ad βGal
        108 pfu/g


                                                                                Day 3



D +3        Liver biopsy




             (sacrifice)
D +21    Liver and spleen
              removal
                                                                                Day 21




           β-gal histology
         + enzymatic assay
                                            non TG                     HCV TG
Persistence of adenovirus infection in HCV+ hepatocytes
                             (Disson et al., Gastroenterology, 2004)



        Ad βGal                                                 10+ 7                                     10+ 6
        108 pfu/g




                                                                                                                  ßGAL activity in the spleen (RLU)
                             ßGAL activity in the liver (RLU)
                                                                10+ 6                                     10+ 5
D +3        Liver biopsy
                                                                                p<0.05



             (sacrifice)
D +21    Liver and spleen                                       10+ 5                                     10+ 4
                                                                                                N.S.
              removal




           β-gal histology
                                                                10+ 4                                     10+ 3
         + enzymatic assay                                              +3           +21   +3       +21

                                                                             LIVER         SPLEEN
Production de ROS dans les souris VHC, implication sur la
                 carcinogenèse hépatique.

                                                           Electron transport
                                                              Complex (1)            CORE
                                                                                                      NS3-NS5A
                                     DHE
                                                                                         Glutathion

                                                                                                       Nox4

                                                                                     ROS




                                                 HCV-tg                                                           inflammation
Non tg
                                                                                Surcharge en FER       DNA damage
                               700

                               600
     Relative ROS levels (%)




                                                                                                                      fibrosis
                               500

                               400
                                                                                      CHC
                               300

                               200

                               100

                                 0
                                       Non tg     HCV tg
                                           n=4      n=4
                                           Age= 17 mo

                                                                                        (M. Higgs, H. Lerat, données personnelles)
Lésions de l’ADN – La famille GADD


               GADD34                GADD153       GADD45α
                                                   GADD45α                     GADD45γ
                                                                               GADD45γ
                                                               GADD45β
                                                               GADD45β




                                          Senseurs de stress


                                                                                                        G0

                                                                          CyclinB1          M
                                                                                       G2        G1
                                                                           Cdc2
                           GADD45
Lésions de
l’ADN              Nucleotide excision repair
                                                                                            Q
                                                                                             S




                                                                                       P
                                                                          Histone H3

                                                                                  P
                                                                    Histone H1
                                                                                             Arrêt du cycle
                                                                           P
                                                                 Lamine                     cellulaire (G2/M)
                                        Gadd45β
                                        Gadd45β


       La surexpression de GADD45 entraine un arrêt de la transition G2/M.
Indexe mitotique des hépatocytes VHC+



      wt                               FL-N/35
                                                                                         NS


                                                                              NS

+/- Gadd45β
+/- Gadd45β                           +/- UV-C                    40
                                                                                              p = 0.0001
   siRNA

                                                                  30




                                                      % mitosis
                                                                  20



                                                                  10


           Phos-
           Phos-histone H3 (Ser 10)
                           (Ser
                                                                   0



                                                                         wt    FL-N/35   wt        FL-N/35    wt

                                                                  UV-
                                                                  UV-C                   +             +      +
                                                 Gadd45β siRNA
                                                 Gadd45β                                                       +




                                                                                                   (Higgs, Lerat et al. Soumis)
Régulation épigénique du promoteur de GADD45b dans les
                       hépatocytes VHC+




                                                                                         p = 0.0014
    wt                              FL-N/35
                                                           30           p = 0.0001

                                                           25                                             p = 0.0003

                                                           20




                                               % mitosis
+/- 5-aza
+/-                                 + UV-C
                                                           15


                                                           10


                                                            5


                                                            0




                                                                        wt     FL-N/35        FL-N/35          FL-N/35
         Phos-
         Phos-histone H3 (Ser 10)
                         (Ser                                   UV-
                                                                UV-C    +            +                +            +
                                                                5-aza                                 +            +
                                              Gadd45β siRNA                                                        +



                                                                                                 (Higgs, Lerat et al. Soumis)
L’expression de GADD45b est diminuée dans le foie des patients
                     infectés par le VHC




                                                                          HCV -
                                                                          HBV -




                                                                                                        HCV +
                                                                                       HBV +
Groupes de patients étudiés

                  NT                                                     NT   T   NT           T   NT           T



                   T                                       Gadd45β >

     HCV+                                                      Actin >

                  NT
                                                         120

                   T                                     100
                              Relative Gadd45β protein


     HBV+
                                                         80                                                         Non tumoral tissue
                                    expression (%)



                                                                                                                    Tumoral tissue
                  NT                                     60


                                                         40

                   T
                                                         20
     HBV- HCV-
                                                           0
                                                                HBV -                              HBV -
                                                                      HBV + HCV +                        HBV + HCV +
                                                                HCV -                              HCV -

                                                                                                                     (Higgs, Lerat et al. Soumis)
Vers un mécanisme de la carcinogenèse hépatique viro-induite?


                         Expression VHC
                         Expression VHC

                                                                Chronicité infection
                                                                Chronicité infection




                                                                      Inhibition
                                                                       Inhibition
                                                                   réponse immune
                                                                   réponse immune
                                             Diminution de
                                             Diminution de
  Surexpression des
  Surexpression des                          protéines pro
                                             protéines pro
cyclines et oncogènes
                         production ROS
                         production ROS
cyclines et oncogènes                        apoptotiques
                                             apoptotiques

   Multiplication
   Multiplication         Lésions ADN
                          Lésions ADN     Inhibition apoptose
                                          Inhibition apoptose
    cellulaire
     cellulaire
                         Réparation ADN
                         Réparation ADN




                        CANCER du FOIE
                        CANCER du FOIE
Stéatose induite par le VHC:

   Mécanismes Moléculaires?

Rôle direct des protéines virales?
Stéatose micro-vésiculaire

Non TG                                    VHC TG




VHC TG                                   VHC TG




              Lerat et al., Gastroenterology 2002.
Stéatose micro-vésiculaire
coloration Oil Red O




                                                                                         p<0.001
                                                25



                                                     20
                                                                          n=12




                                 % de l’aire total
                                                                         12.5 ± 0.4



                                                     15


                                                     10
                                                               n=12                                           n=10
                                                              13 ± 0.8                                       14.4 ± 0.8

                                                          5
                                                                                                                          M

                                                          0
                                                                                                     n=7
                                                                                                14.1 ± 0.3    F
                                                              HCV TG
                                                                                      NON TGM

 analyse in silico
Stéatose viro-induite: mécanismes moléculaires?




                HEPATOCELLULAR STEATOSIS




de novo TG       TG secretion        TG degradation       Increased TG
 synthesis         default          default (oxydation)   serum uptake


                                ?          ?
                   ?
                                                   ?
                                      VIRAL
    ER Stress                       PROTEINS
                        ?
Défaut d’exportation des triglycérides.
                     La sécrétion des VLDL hépatiques chez la souris à jeun a été mesurée par
                     l’augmentation des triglycérides plasmatiques (A et B) et de l’apolipoprotéine
                     B (C) après inhibition de la lipoprotéine lipase par le triton WR1339 (B et C).


                         1,2                                             14                                          6
                                            A                                             B                                          C

                                                                         12                                          5
                         1,0




                                                                                              Plasmatic ApoB (g/L)
Plasmatic TG (g/L)




                                                Plasmatic TG (g/L)
                                                                         10                                          4

                         0,8

                                                                         8                                           3



                         0,6
                                                                         6                                           2




                         0,4                                             4                                           1

                                WT   HCV-tg                                   WT   HCV-tg                                WT   HCV-tg
                     n          14     14                            n        13     13                       n          13     13
Inhibition de la « Microsomal Transfer Protein »




                                                   Activité MTP
                                             500


                                             450




                           pmoles/100µg/4h
                                             400


                                             350


                                             300


                                             250


                                             200


                                             150
                                                   WT     HCV-tg
Stimulation de la lipogenèse

                                                                                               RT-qPCR

               Citrate                                           9                             ** p=0.02   **
                                                                                                                                     WT
                         ATP-CL                                                                                                      HCV-tg




                                  ARNm (augmentation relative)
             Acetyl-CoA
                                                                 4
Lipogenèse




                                                                                                                               ** p=0.02
                         ACC
                                                                         * p=0.01                                                      **
             Malonyl-CoA
                                                                                *
                         FAS
                                                                 2
             Acyl-CoAs
                         SCD1


                                                                 0
                 TG
                                                                          ACL        ACC              FAS             EM        SCD1
                                                                     n   11     8   11     8        14      16   11        8    11         8
Stimulation de la lipogenèse

                                                           Western Blot

                                                 2.5

               Citrate
                                                            * p=0.01      *
                         ATP-CL
                                                 2.0

             Acetyl-CoA




                                     FAS/GAPDH
Lipogenèse




                         ACC
                                                 1.5
             Malonyl-CoA

                         FAS
                                                 1.0
             Acyl-CoAs
                         SCD1


                                                 0.5
                 TG
                                                       WT          HCV-tg
                                                  n    4                  9
Régulation de la lipogenèse

                                       SREBP1c                 SREBP1c
                                  Domaine de transactivation     Précurseur
                                          (Noyau)              (RE puis Golgi)
               Citrate
                         ATP-CL

             Acetyl-CoA
Lipogenèse




                         ACC

             Malonyl-CoA

                         FAS

             Acyl-CoAs
                         SCD1



                 TG
Régulation de la lipogenèse

                                               SREBP1c                           SREBP1c
                                       Domaine de transactivation                   Précurseur
                                               (Noyau)                            (RE puis Golgi)
               Citrate
                         ATP-CL

             Acetyl-CoA
                                                               Western Blot
Lipogenèse




                         ACC
                                                                                              SREBP1c (clivé)
             Malonyl-CoA
                                    noyau

                         FAS                                                                  Lamine A/C


             Acyl-CoAs                                                                        SREBP1c (précurseur)
                                  microsomes
                         SCD1                                                                 Actine




                 TG                                     WT                    HCV-tg
Régulation de la lipogenèse

                                       SREBP1c                                                SREBP1c
                                  Domaine de transactivation                                    Précurseur
                                          (Noyau)                                             (RE puis Golgi)
               Citrate
                         ATP-CL
                                                                                RT-qPCR

             Acetyl-CoA




                                             ARNm (augmentation relative)
Lipogenèse




                                                                            4
                         ACC
                                                                            3
             Malonyl-CoA
                                                                            2
                         FAS
                                                                            1
             Acyl-CoAs
                         SCD1                                               0



                                                                                WT   HCV-tg
                 TG                                                         n   14     16
Lipogenèse induite par le stress du RE?

                                       SREBP1c                                  SREBP1c
                                  Domaine de transactivation                      Précurseur
                                          (Noyau)                               (RE puis Golgi)
               Citrate
                         ATP-CL
                                                               Stress RE
             Acetyl-CoA                                                             RE
Lipogenèse




                         ACC                         PERK                           IRE-1
                                                               ATF6

             Malonyl-CoA
                                                    P-eiF2α        Epissage ARNm XBP1

                         FAS
                                                Arrêt traduction            Dégradation protéique
             Acyl-CoAs
                         SCD1



                 TG
Lipogenèse induite par le stress du RE?

                                                           SREBP1c                                 SREBP1c
                                                    Domaine de transactivation                       Précurseur
                                                            (Noyau)                                (RE puis Golgi)
               Citrate
                         ATP-CL
                                                                                  Stress RE
             Acetyl-CoA                                                                                RE
Lipogenèse




                         ACC                                            PERK                           IRE-1
                                                                                   ATF6

             Malonyl-CoA
                                                                       P-eiF2α        Epissage ARNm XBP1

                         FAS
                                                                   Arrêt traduction           Dégradation protéique
             Acyl-CoAs                              Western blot
                                                4
                         SCD1
                                                3                                                     RT-PCR
                                  eIF2-P/eIF2




                                                2                                         ARNm XBP1
                 TG                                                                                                   Non-épissé
                                                1
                                                                                                                      Epissé
                                                0                                Non-Tg            HCV Tg      +

                                                    WT    HCV-tg
Lipogenèse induite par le stress du RE?

                                       SREBP1c                                                     SREBP1c
                                  Domaine de transactivation                                          Précurseur
                                          (Noyau)                                                   (RE puis Golgi)
               Citrate
                         ATP-CL
                                                                                   Stress RE
             Acetyl-CoA                                                                                RE
Lipogenèse




                         ACC                                                                           IRE-1
                                                      PERK                         ATF6

             Malonyl-CoA
                                                    P-eiF2α                         Epissage ARNm XBP1

                         FAS
                                                Arrêt traduction                                Dégradation protéique
             Acyl-CoAs
                                                                                   Western Blot
                         SCD1                                                  3




                                                         Phospho-Perk / PERK
                                                                               2
                 TG
                                                                               1



                                                                               0
                                                                                   Phospho-Perk
                                                                                     4      9
Lipogenèse induite par le stress du RE?

                                       SREBP1c                                                                      SREBP1c
                                  Domaine de transactivation                                                          Précurseur
                                          (Noyau)                                                                   (RE puis Golgi)
               Citrate
                         ATP-CL
                                                                                                Stress RE
             Acetyl-CoA                                                                                                  RE
Lipogenèse




                         ACC                                                         PERK                                IRE-1
                                                                                                ATF6

             Malonyl-CoA
                                                                                P-eiF2α         Epissage ARNm XBP1

                         FAS
                                                                           Arrêt traduction                    Dégradation protéique
             Acyl-CoAs
                                                                                                RT-QPCR
                         SCD1
                                        ARNm (augmenation relative)


                                                                      12
                                                                                                                              WT
                                                                                                                              HCV-tg

                                                                      6
                 TG
                                                                      4

                                                                      2

                                                                      0
                                                                           GRP78       EDEM          PDI         CHOP         TRB3
                                                                       n   16   15     11   8    7         4    7    4        15   18
Résumé

                                                  SREBP1c                                 SREBP1c =
                                            Domaine de transactivation                      Précurseur
                                                    (Noyau)                               (RE puis Golgi)
                Citrate
                          ATP-CL
                                                                         Stress RE
               Acetyl-CoA                                                                     RE
Lipogenèse




                          ACC      =                           PERK                           IRE-1
                                                                         ATF6

              Malonyl-CoA
                                                              P-eiF2α        Epissage ARNm XBP1

                          FAS
                                                          Arrêt traduction            Dégradation protéique
               Acyl-CoAs
                          SCD1



                    TG                                                                            STEATOSE
                                          Accumulation TG intracellulaires
                                                                                                  HEPATIQUE
             ApoB
                     MTP          VLDL
                                 Exportation TG
Towards mechanisms for HCV-induced steatosis?




                HEPATOCELLULAR STEATOSIS




de novo TG       TG secretion          TG degradation       Increased TG
 synthesis         default            default (oxydation)   serum uptake


                                YES          ?
                   YES
                                                     ?
                                        VIRAL
    ER Stress                         PROTEINS
                      NO
Fibrose induite par le VHC?

   Mécanismes Moléculaires?

Rôle direct des protéines virales?
Stellate cell activation
   and absence of fibre deposition in HCV mice




Non-Tg         HCV-Tg
                                                        Non Tg




                                                        HCV-Tg
  anti-αSMA antibody



                             Picrosirius red staining
Enhanced fibre deposition in CCl4-treated HCV mice




 Non Tg            Non Tg + CCl4        HCV-Tg + CCl4
Quantification of fibre deposition

           Picrosirius Red Staining

Non-Tg + CCl4
Non-                                  Tg + CCl4

                                                                                                        P=0.0036*

                                                                       3,0

                                                                       2,5




                                                  Area of fibers (%)
                                                                       2,0

                                                                       1,5

                                                                       1,0

                                                                       0,5

                                                                       0,0


                                                                                 Non-Tg         Tg   Non-Tg          Tg
                                                                             n     5            5      13            17

                                                                                       - CCl4               + CCl4

                in silico Analysis

                                                                                                       * = Mann Whitney test
Conclusions

Modèle reproduisant les principales pathologies induites par le
VHC
   Niveau d’expression similaire à l’infection chronique chez l’homme
   Absence de réponse immunitaire (pas d’inflammation ni de cirrhose)

La cirrhose n’est pas un pré requis au développement de CHC :
en accord avec données cliniques (méta-analyse, Maisonneuve
2009)

Démonstration d’effets cytopathiques directs des protéines
virales en absence de cirrhose.

      Inhibition de l’apoptose (voie FAS)
      Inhibition de l’expression du suppresseur de tumeur GADD45b
      Inhibition de la sécretion des VLDL (MTP)
      Stimulation de la lipogenèse
      Action co-fibrogène

Contenu connexe

Tendances

Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Vih.org
 
Hepatitis B and C in renal transplantation
Hepatitis B and C in renal transplantationHepatitis B and C in renal transplantation
Hepatitis B and C in renal transplantation
International clinic Hannibal Tunis Tunisia
 
Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)
Thibault Vha Vhe  Virus Et Marqueurs (1)Thibault Vha Vhe  Virus Et Marqueurs (1)
Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)
odeckmyn
 
Acs polyclonaux et monoclonaux master 2014
Acs polyclonaux et monoclonaux master 2014Acs polyclonaux et monoclonaux master 2014
Acs polyclonaux et monoclonaux master 2014
OKCC/C3O and CREM/université Lorraine
 
Zarski jp cyto,av,im 2014
Zarski jp  cyto,av,im 2014Zarski jp  cyto,av,im 2014
Zarski jp cyto,av,im 2014
odeckmyn
 
Anti viraux et immunomodulateurs.ppt
Anti viraux et immunomodulateurs.pptAnti viraux et immunomodulateurs.ppt
Anti viraux et immunomodulateurs.ppt
odeckmyn
 
Pawlotsky cycle
Pawlotsky  cyclePawlotsky  cycle
Pawlotsky cycle
odeckmyn
 
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.pptPathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
odeckmyn
 
Diu Cytometriegrenoble2011
Diu Cytometriegrenoble2011Diu Cytometriegrenoble2011
Diu Cytometriegrenoble2011
OKCC/C3O and CREM/université Lorraine
 
Hépatite C Virus et marqueurs.pdf
Hépatite C  Virus et marqueurs.pdfHépatite C  Virus et marqueurs.pdf
Hépatite C Virus et marqueurs.pdf
odeckmyn
 
Said Talbi Poster VITO
Said Talbi Poster VITOSaid Talbi Poster VITO
Said Talbi Poster VITO
Said Talbi
 
Chevaliez s virus hcv+marqueurs2014
Chevaliez s  virus hcv+marqueurs2014Chevaliez s  virus hcv+marqueurs2014
Chevaliez s virus hcv+marqueurs2014
odeckmyn
 
Médicaments antipaludiques quinoléiques et les marqueurs génétiques de résist...
Médicaments antipaludiques quinoléiques et les marqueurs génétiques de résist...Médicaments antipaludiques quinoléiques et les marqueurs génétiques de résist...
Médicaments antipaludiques quinoléiques et les marqueurs génétiques de résist...
Institut Pasteur de Madagascar
 
Mécanismes de Résistance de Plasmodium aux Quinoléiques
Mécanismes de Résistance de Plasmodium aux QuinoléiquesMécanismes de Résistance de Plasmodium aux Quinoléiques
Mécanismes de Résistance de Plasmodium aux Quinoléiques
Institut Pasteur de Madagascar
 
Anticorps thérapeutiques
Anticorps thérapeutiquesAnticorps thérapeutiques
Anticorps thérapeutiques
Sofia Azirar
 
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 courtRosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
odeckmyn
 
Mémoire de dea
Mémoire de deaMémoire de dea
Mémoire de dea
SebDuprat
 
De l'ADN à la protéine & de l'antigène à l'anticorps
De l'ADN à la protéine & de l'antigène à l'anticorpsDe l'ADN à la protéine & de l'antigène à l'anticorps
De l'ADN à la protéine & de l'antigène à l'anticorps
Institut Pasteur de Madagascar
 
anticorps monoclonaux
anticorps monoclonauxanticorps monoclonaux
anticorps monoclonaux
Nouri Abdelmounaim
 
Production des ac recombinant
Production des ac recombinantProduction des ac recombinant
Production des ac recombinant
sidra sisa
 

Tendances (20)

Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
 
Hepatitis B and C in renal transplantation
Hepatitis B and C in renal transplantationHepatitis B and C in renal transplantation
Hepatitis B and C in renal transplantation
 
Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)
Thibault Vha Vhe  Virus Et Marqueurs (1)Thibault Vha Vhe  Virus Et Marqueurs (1)
Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)
 
Acs polyclonaux et monoclonaux master 2014
Acs polyclonaux et monoclonaux master 2014Acs polyclonaux et monoclonaux master 2014
Acs polyclonaux et monoclonaux master 2014
 
Zarski jp cyto,av,im 2014
Zarski jp  cyto,av,im 2014Zarski jp  cyto,av,im 2014
Zarski jp cyto,av,im 2014
 
Anti viraux et immunomodulateurs.ppt
Anti viraux et immunomodulateurs.pptAnti viraux et immunomodulateurs.ppt
Anti viraux et immunomodulateurs.ppt
 
Pawlotsky cycle
Pawlotsky  cyclePawlotsky  cycle
Pawlotsky cycle
 
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.pptPathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
 
Diu Cytometriegrenoble2011
Diu Cytometriegrenoble2011Diu Cytometriegrenoble2011
Diu Cytometriegrenoble2011
 
Hépatite C Virus et marqueurs.pdf
Hépatite C  Virus et marqueurs.pdfHépatite C  Virus et marqueurs.pdf
Hépatite C Virus et marqueurs.pdf
 
Said Talbi Poster VITO
Said Talbi Poster VITOSaid Talbi Poster VITO
Said Talbi Poster VITO
 
Chevaliez s virus hcv+marqueurs2014
Chevaliez s  virus hcv+marqueurs2014Chevaliez s  virus hcv+marqueurs2014
Chevaliez s virus hcv+marqueurs2014
 
Médicaments antipaludiques quinoléiques et les marqueurs génétiques de résist...
Médicaments antipaludiques quinoléiques et les marqueurs génétiques de résist...Médicaments antipaludiques quinoléiques et les marqueurs génétiques de résist...
Médicaments antipaludiques quinoléiques et les marqueurs génétiques de résist...
 
Mécanismes de Résistance de Plasmodium aux Quinoléiques
Mécanismes de Résistance de Plasmodium aux QuinoléiquesMécanismes de Résistance de Plasmodium aux Quinoléiques
Mécanismes de Résistance de Plasmodium aux Quinoléiques
 
Anticorps thérapeutiques
Anticorps thérapeutiquesAnticorps thérapeutiques
Anticorps thérapeutiques
 
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 courtRosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
 
Mémoire de dea
Mémoire de deaMémoire de dea
Mémoire de dea
 
De l'ADN à la protéine & de l'antigène à l'anticorps
De l'ADN à la protéine & de l'antigène à l'anticorpsDe l'ADN à la protéine & de l'antigène à l'anticorps
De l'ADN à la protéine & de l'antigène à l'anticorps
 
anticorps monoclonaux
anticorps monoclonauxanticorps monoclonaux
anticorps monoclonaux
 
Production des ac recombinant
Production des ac recombinantProduction des ac recombinant
Production des ac recombinant
 

En vedette

Lerat h parthogénèse 2014
Lerat h  parthogénèse 2014Lerat h  parthogénèse 2014
Lerat h parthogénèse 2014
odeckmyn
 
Histoire hcv du 2016
Histoire hcv du 2016Histoire hcv du 2016
Histoire hcv du 2016
odeckmyn
 
Thabut vhc2016duhv
Thabut vhc2016duhvThabut vhc2016duhv
Thabut vhc2016duhv
odeckmyn
 
Du 2016 tp biomarkers
Du 2016 tp biomarkersDu 2016 tp biomarkers
Du 2016 tp biomarkers
odeckmyn
 
Du 2016 programme v2 a4
Du 2016 programme v2 a4Du 2016 programme v2 a4
Du 2016 programme v2 a4
odeckmyn
 
Thabut beneferadic16
Thabut beneferadic16Thabut beneferadic16
Thabut beneferadic16
odeckmyn
 
Examen DU - 2014
Examen DU - 2014 Examen DU - 2014
Examen DU - 2014
odeckmyn
 
Sujets examen DU - 2015
Sujets examen DU - 2015Sujets examen DU - 2015
Sujets examen DU - 2015
odeckmyn
 
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfantVHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
odeckmyn
 

En vedette (9)

Lerat h parthogénèse 2014
Lerat h  parthogénèse 2014Lerat h  parthogénèse 2014
Lerat h parthogénèse 2014
 
Histoire hcv du 2016
Histoire hcv du 2016Histoire hcv du 2016
Histoire hcv du 2016
 
Thabut vhc2016duhv
Thabut vhc2016duhvThabut vhc2016duhv
Thabut vhc2016duhv
 
Du 2016 tp biomarkers
Du 2016 tp biomarkersDu 2016 tp biomarkers
Du 2016 tp biomarkers
 
Du 2016 programme v2 a4
Du 2016 programme v2 a4Du 2016 programme v2 a4
Du 2016 programme v2 a4
 
Thabut beneferadic16
Thabut beneferadic16Thabut beneferadic16
Thabut beneferadic16
 
Examen DU - 2014
Examen DU - 2014 Examen DU - 2014
Examen DU - 2014
 
Sujets examen DU - 2015
Sujets examen DU - 2015Sujets examen DU - 2015
Sujets examen DU - 2015
 
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfantVHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
 

Similaire à Lerat PathogéNèSe

Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.pptPathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
odeckmyn
 
Lerat bis hép virologie du16
Lerat bis hép virologie du16  Lerat bis hép virologie du16
Lerat bis hép virologie du16
odeckmyn
 
Rosmorduc carninogenese du16
Rosmorduc  carninogenese du16Rosmorduc  carninogenese du16
Rosmorduc carninogenese du16
odeckmyn
 
Lerat hép virologie du16
Lerat  hép virologie du16Lerat  hép virologie du16
Lerat hép virologie du16
odeckmyn
 
Lerat du hépatites virales 2015
Lerat  du hépatites virales 2015Lerat  du hépatites virales 2015
Lerat du hépatites virales 2015
odeckmyn
 
Ingestem first meting-2
Ingestem first meting-2Ingestem first meting-2
Ingestem first meting-2
Desprat
 
Focal segmental glomerulosclerosis and transplantation
Focal segmental glomerulosclerosis and transplantationFocal segmental glomerulosclerosis and transplantation
Focal segmental glomerulosclerosis and transplantation
International clinic Hannibal Tunis Tunisia
 
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.pptCarcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
odeckmyn
 
Rosmorduc o virus et chc 2015- vr2015
Rosmorduc o  virus et chc 2015- vr2015Rosmorduc o  virus et chc 2015- vr2015
Rosmorduc o virus et chc 2015- vr2015
odeckmyn
 
Chevalier du 2012.ppt
Chevalier  du 2012.pptChevalier  du 2012.ppt
Chevalier du 2012.ppt
odeckmyn
 
Lebray p hépatites virales et tc du 2015
Lebray p  hépatites virales et tc du 2015Lebray p  hépatites virales et tc du 2015
Lebray p hépatites virales et tc du 2015
odeckmyn
 
Ingestem first meting
Ingestem first metingIngestem first meting
Ingestem first meting
Desprat
 
SFH 2016 Syndrome hypereosinophilique JEK
SFH 2016 Syndrome hypereosinophilique JEKSFH 2016 Syndrome hypereosinophilique JEK
SFH 2016 Syndrome hypereosinophilique JEK
Filière de santé Maladies Rares Immuno-Hématologiques
 
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypageAnti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Institut Pasteur de Madagascar
 
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypageAnti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Institut Pasteur de Madagascar
 
Résistance et réponse thérapeutique
Résistance et réponse thérapeutiqueRésistance et réponse thérapeutique
Résistance et réponse thérapeutique
Institut Pasteur de Madagascar
 
Thérapie génique mr boisseau
Thérapie génique  mr boisseauThérapie génique  mr boisseau
Thérapie génique mr boisseau
sfa_angeiologie
 
Prévention du cancer du col de l’utérus
Prévention du cancer du col de l’utérusPrévention du cancer du col de l’utérus
Prévention du cancer du col de l’utérus
harlicot
 
Rosmorduc o virus et chc 2014
Rosmorduc o  virus et chc 2014Rosmorduc o  virus et chc 2014
Rosmorduc o virus et chc 2014
odeckmyn
 
Conference OGM Mounier
Conference OGM MounierConference OGM Mounier
Conference OGM Mounier
vguili
 

Similaire à Lerat PathogéNèSe (20)

Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.pptPathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
Pathogenèse des lésions hépatiques du VHC.ppt
 
Lerat bis hép virologie du16
Lerat bis hép virologie du16  Lerat bis hép virologie du16
Lerat bis hép virologie du16
 
Rosmorduc carninogenese du16
Rosmorduc  carninogenese du16Rosmorduc  carninogenese du16
Rosmorduc carninogenese du16
 
Lerat hép virologie du16
Lerat  hép virologie du16Lerat  hép virologie du16
Lerat hép virologie du16
 
Lerat du hépatites virales 2015
Lerat  du hépatites virales 2015Lerat  du hépatites virales 2015
Lerat du hépatites virales 2015
 
Ingestem first meting-2
Ingestem first meting-2Ingestem first meting-2
Ingestem first meting-2
 
Focal segmental glomerulosclerosis and transplantation
Focal segmental glomerulosclerosis and transplantationFocal segmental glomerulosclerosis and transplantation
Focal segmental glomerulosclerosis and transplantation
 
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.pptCarcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
 
Rosmorduc o virus et chc 2015- vr2015
Rosmorduc o  virus et chc 2015- vr2015Rosmorduc o  virus et chc 2015- vr2015
Rosmorduc o virus et chc 2015- vr2015
 
Chevalier du 2012.ppt
Chevalier  du 2012.pptChevalier  du 2012.ppt
Chevalier du 2012.ppt
 
Lebray p hépatites virales et tc du 2015
Lebray p  hépatites virales et tc du 2015Lebray p  hépatites virales et tc du 2015
Lebray p hépatites virales et tc du 2015
 
Ingestem first meting
Ingestem first metingIngestem first meting
Ingestem first meting
 
SFH 2016 Syndrome hypereosinophilique JEK
SFH 2016 Syndrome hypereosinophilique JEKSFH 2016 Syndrome hypereosinophilique JEK
SFH 2016 Syndrome hypereosinophilique JEK
 
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypageAnti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
 
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypageAnti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage
 
Résistance et réponse thérapeutique
Résistance et réponse thérapeutiqueRésistance et réponse thérapeutique
Résistance et réponse thérapeutique
 
Thérapie génique mr boisseau
Thérapie génique  mr boisseauThérapie génique  mr boisseau
Thérapie génique mr boisseau
 
Prévention du cancer du col de l’utérus
Prévention du cancer du col de l’utérusPrévention du cancer du col de l’utérus
Prévention du cancer du col de l’utérus
 
Rosmorduc o virus et chc 2014
Rosmorduc o  virus et chc 2014Rosmorduc o  virus et chc 2014
Rosmorduc o virus et chc 2014
 
Conference OGM Mounier
Conference OGM MounierConference OGM Mounier
Conference OGM Mounier
 

Plus de odeckmyn

Zoulim fz traitement vhb du16
Zoulim fz traitement vhb du16 Zoulim fz traitement vhb du16
Zoulim fz traitement vhb du16
odeckmyn
 
Thabut1 vhc tt du16
Thabut1 vhc tt du16Thabut1 vhc tt du16
Thabut1 vhc tt du16
odeckmyn
 
Zoulim2 traitement hépatite b 2016 d uv2
Zoulim2  traitement hépatite b 2016 d uv2Zoulim2  traitement hépatite b 2016 d uv2
Zoulim2 traitement hépatite b 2016 d uv2
odeckmyn
 
Zoulim vhb du16
Zoulim vhb du16Zoulim vhb du16
Zoulim vhb du16
odeckmyn
 
Zarski hépatites virales du16 jpz
Zarski hépatites virales du16 jpzZarski hépatites virales du16 jpz
Zarski hépatites virales du16 jpz
odeckmyn
 
Thabut2 vhc vhb du16
Thabut2 vhc  vhb du16Thabut2 vhc  vhb du16
Thabut2 vhc vhb du16
odeckmyn
 
Sos hepatites du16
Sos hepatites du16Sos hepatites du16
Sos hepatites du16
odeckmyn
 
Thibault vha vhe- du16
Thibault vha vhe- du16Thibault vha vhe- du16
Thibault vha vhe- du16
odeckmyn
 
Roulo tbis vhd-du16
Roulo tbis vhd-du16Roulo tbis vhd-du16
Roulo tbis vhd-du16
odeckmyn
 
Samuel2 hcv lt du16
Samuel2 hcv  lt du16Samuel2 hcv  lt du16
Samuel2 hcv lt du16
odeckmyn
 
Samuel1 hbv lt du16
Samuel1 hbv lt du16Samuel1 hbv lt du16
Samuel1 hbv lt du16
odeckmyn
 
Rudler hépatites ir du16
Rudler hépatites ir du16Rudler hépatites ir du16
Rudler hépatites ir du16
odeckmyn
 
Rudler réinfection vhb du16
Rudler réinfection vhb du16Rudler réinfection vhb du16
Rudler réinfection vhb du16
odeckmyn
 
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
odeckmyn
 
Roulot vhd du16
Roulot vhd du16Roulot vhd du16
Roulot vhd du16
odeckmyn
 
Ratziu serfaty- vhc obésité diabète du 16 2016
Ratziu serfaty- vhc obésité diabète du 16 2016Ratziu serfaty- vhc obésité diabète du 16 2016
Ratziu serfaty- vhc obésité diabète du 16 2016
odeckmyn
 
Peron vhavhe du16
Peron vhavhe du16Peron vhavhe du16
Peron vhavhe du16
odeckmyn
 
Lebray hépatites virales et tc du16
Lebray hépatites virales et tc du16Lebray hépatites virales et tc du16
Lebray hépatites virales et tc du16
odeckmyn
 
Moussalli alco c du16
Moussalli alco c du16Moussalli alco c du16
Moussalli alco c du16
odeckmyn
 
Liou lebray du etp et vhc du16
Liou lebray du etp et vhc  du16Liou lebray du etp et vhc  du16
Liou lebray du etp et vhc du16
odeckmyn
 

Plus de odeckmyn (20)

Zoulim fz traitement vhb du16
Zoulim fz traitement vhb du16 Zoulim fz traitement vhb du16
Zoulim fz traitement vhb du16
 
Thabut1 vhc tt du16
Thabut1 vhc tt du16Thabut1 vhc tt du16
Thabut1 vhc tt du16
 
Zoulim2 traitement hépatite b 2016 d uv2
Zoulim2  traitement hépatite b 2016 d uv2Zoulim2  traitement hépatite b 2016 d uv2
Zoulim2 traitement hépatite b 2016 d uv2
 
Zoulim vhb du16
Zoulim vhb du16Zoulim vhb du16
Zoulim vhb du16
 
Zarski hépatites virales du16 jpz
Zarski hépatites virales du16 jpzZarski hépatites virales du16 jpz
Zarski hépatites virales du16 jpz
 
Thabut2 vhc vhb du16
Thabut2 vhc  vhb du16Thabut2 vhc  vhb du16
Thabut2 vhc vhb du16
 
Sos hepatites du16
Sos hepatites du16Sos hepatites du16
Sos hepatites du16
 
Thibault vha vhe- du16
Thibault vha vhe- du16Thibault vha vhe- du16
Thibault vha vhe- du16
 
Roulo tbis vhd-du16
Roulo tbis vhd-du16Roulo tbis vhd-du16
Roulo tbis vhd-du16
 
Samuel2 hcv lt du16
Samuel2 hcv  lt du16Samuel2 hcv  lt du16
Samuel2 hcv lt du16
 
Samuel1 hbv lt du16
Samuel1 hbv lt du16Samuel1 hbv lt du16
Samuel1 hbv lt du16
 
Rudler hépatites ir du16
Rudler hépatites ir du16Rudler hépatites ir du16
Rudler hépatites ir du16
 
Rudler réinfection vhb du16
Rudler réinfection vhb du16Rudler réinfection vhb du16
Rudler réinfection vhb du16
 
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
 
Roulot vhd du16
Roulot vhd du16Roulot vhd du16
Roulot vhd du16
 
Ratziu serfaty- vhc obésité diabète du 16 2016
Ratziu serfaty- vhc obésité diabète du 16 2016Ratziu serfaty- vhc obésité diabète du 16 2016
Ratziu serfaty- vhc obésité diabète du 16 2016
 
Peron vhavhe du16
Peron vhavhe du16Peron vhavhe du16
Peron vhavhe du16
 
Lebray hépatites virales et tc du16
Lebray hépatites virales et tc du16Lebray hépatites virales et tc du16
Lebray hépatites virales et tc du16
 
Moussalli alco c du16
Moussalli alco c du16Moussalli alco c du16
Moussalli alco c du16
 
Liou lebray du etp et vhc du16
Liou lebray du etp et vhc  du16Liou lebray du etp et vhc  du16
Liou lebray du etp et vhc du16
 

Lerat PathogéNèSe

  • 1. PATHOGENÈSE DES LÉSIONS HÉPATIQUES DU VHC : MODÉLISATION ANIMALE Hervé LERAT INSERM U955 Département de Virologie Moléculaire et Immunologie Molé Physiopathologie et Thérapeutique des Hépatites Virales Chroniques (Pr. Pawlotsky) Thé Hé Hôpital Henri Mondor, Créteil, France.
  • 2. Pathologies viro-induites: contribution du virus? Contexte d’un organe entier dans un animal vivant. Nécessité de développement de modèles animaux
  • 3. Modèles animaux pour l’étude des pathologies induites par le VHC Modèles d’infection Primates non-humains Chimpanzé Ouistiti Problème de disponibilité et de coût.
  • 4. Modèles animaux pour l’étude des pathologies induites par le VHC Modèles d’infection Rongeurs (“humanisés”) uPA/SCID Trimera rat
  • 5. Modèles d’infection (rongeurs) Viremia Duration of infection Rodent models Humanization Peak viremia Copies/mL (Months) Human hepatocyte uPA/SCID 104 to 8x107 Up to 9 1 month transplantation Xenograft of human Trimera mice 7x104 Around 1 18 days liver tissues Immunotolerization and Rat transplantation of human 1-2x104 Up to 4 3 months hepatoma cell line Adapted from Kremsdorf et Brezillon, World J Gastroenterol 2007 Techniquement très complexes à mettre en œuvre
  • 6. Modèles animaux pour l’étude des pathologies induites par le VHC Modèles d’expression des protéines virales Transgenèse murine Classique Conditionnelle (système Cre/Lox) Avantages : Facilité d’élevage, technique rodée Expression chronique à long terme Pas de réponse immune Pas de réplication virale
  • 7. The full-length HCV ORF transgenic mouse model FL-N/35 NS4a Albumin promoter core E1 E2 NS2 NS3 NS4b NS5a NS5b FL-N p7 SV40 PolyA Genotype 1b micro-injections C57Bl6J x C3H/HeJ Liver FL-N/35 DNA HCV + RNA HCV + X C57BL6J X C57BL6J Lerat et al., Gastroenterology 2002
  • 8. The full-length HCV ORF transgenic mouse model FL-N/35 NS4a Albumin promoter core E1 E2 NS2 NS3 NS4b NS5a NS5b FL-N p7 SV40 PolyA Genotype 1b micro-injections C57Bl6J x C3H/HeJ Carcinoma Liver Steatosis DNA HCV + RNA HCV + X C57BL6J X C57BL6J +CCl4 Co-fibrogenic Co- Lerat et al., Gastroenterology 2002
  • 9. Hepatocellular Carcinomas 1 cm FL-N/35-171UNC FL-N/35-170UNC 1 cm A 1 cm FL-N/35-102CERFE Lerat et al., Gastroenterology 2002.
  • 10. Visualisation en IRM des CHC chez la souris VHC Tumeur (H. Lerat, A. Luciani et T. Décaens, données personnelles.)
  • 11. CHC induits par le VHC: Mécanismes Moléculaires? Rôle direct des protéines virales?
  • 13. Modulation du cycle cellulaire dans le foie des souris transgéniques ARNm Incorporation de BrdU Détection PCNA Cyclin B1 MYC 9 7 mRNA (Fold increase) 5 3 1 Non TG HCV TG Non TG HCV TG Non TG HCV TG Non TG HCV TG -> Les mécanismes restent à définir. Lerat et al., Gastroenterology 2002. Keasler, Virology 2006. M. Higgs (données personnelles)
  • 14. Inhibition de l’apoptose dans le foie des souris transgéniques 50 P<0.05 % apoptotic hepatocytes + 40 P<0.01 Fluorescence intensity Hoechst 30 20 - 10 Non TG HCV TG 0 in vivo ex vivo non TG HCV TG (Disson et al., Gastroenterology, 2004)
  • 15. Inhibition de l’apoptose dans le foie des souris transgéniques Activated caspase 8 Bid-t Bid- Bid 14 kD Bid 1.2 24 kD + 1 Bi d protein level (AU) Bid-N Bid- p<0.01 10 kD 0.8 Cytochrome C 0.6 Apoptosis 0.4 Bid 0.2 N=10 N=13 LIVER KIDNEY HCV tg - + - + 0 WT HCV tg Bid GAPDH (Disson et al., Gastroenterology, 2004)
  • 16. Résumé : inhibition de la voie FAS dans le foie des souris VHC FasL Membrane cellulaire Fas VHC (NS5A) calpaïne mitochondrie caspase 8 Bid cytochrome C caspase 3 caspase 9 CIDE-B Etape vers le APOPTOSE CIDE-B cancer VHC Annexin V (NS2) fragmentation ADN HCV TG - + Erdtmann et al., J Biol Chem 2003.
  • 17. Diminution de l’expression de bid chez les patients infectés par le VHC Patients #1 #2 #3 Tissus NT CHC NT CHC NT CHC Bid (21 kD) GAPDH NT= tissu adjacent au CHC (Simonin et al., Hepatology 2009)
  • 18. Diminution de l’expression de bid chez les patients infectés par le VHC 3 Bid/GAPDH 2 1 * 0 VHC - + + - + + Cirrhose - - + - - + Tissus NT CHC n 15 9 8 15 9 8 Simonin et al., Hepatology, 2009
  • 19. Persistence of adenovirus infection in HCV+ hepatocytes (Disson et al., Gastroenterology, 2004) Ad βGal 108 pfu/g Day 3 D +3 Liver biopsy (sacrifice) D +21 Liver and spleen removal Day 21 β-gal histology + enzymatic assay non TG HCV TG
  • 20. Persistence of adenovirus infection in HCV+ hepatocytes (Disson et al., Gastroenterology, 2004) Ad βGal 10+ 7 10+ 6 108 pfu/g ßGAL activity in the spleen (RLU) ßGAL activity in the liver (RLU) 10+ 6 10+ 5 D +3 Liver biopsy p<0.05 (sacrifice) D +21 Liver and spleen 10+ 5 10+ 4 N.S. removal β-gal histology 10+ 4 10+ 3 + enzymatic assay +3 +21 +3 +21 LIVER SPLEEN
  • 21. Production de ROS dans les souris VHC, implication sur la carcinogenèse hépatique. Electron transport Complex (1) CORE NS3-NS5A DHE Glutathion Nox4 ROS HCV-tg inflammation Non tg Surcharge en FER DNA damage 700 600 Relative ROS levels (%) fibrosis 500 400 CHC 300 200 100 0 Non tg HCV tg n=4 n=4 Age= 17 mo (M. Higgs, H. Lerat, données personnelles)
  • 22. Lésions de l’ADN – La famille GADD GADD34 GADD153 GADD45α GADD45α GADD45γ GADD45γ GADD45β GADD45β Senseurs de stress G0 CyclinB1 M G2 G1 Cdc2 GADD45 Lésions de l’ADN Nucleotide excision repair Q S P Histone H3 P Histone H1 Arrêt du cycle P Lamine cellulaire (G2/M) Gadd45β Gadd45β La surexpression de GADD45 entraine un arrêt de la transition G2/M.
  • 23. Indexe mitotique des hépatocytes VHC+ wt FL-N/35 NS NS +/- Gadd45β +/- Gadd45β +/- UV-C 40 p = 0.0001 siRNA 30 % mitosis 20 10 Phos- Phos-histone H3 (Ser 10) (Ser 0 wt FL-N/35 wt FL-N/35 wt UV- UV-C + + + Gadd45β siRNA Gadd45β + (Higgs, Lerat et al. Soumis)
  • 24. Régulation épigénique du promoteur de GADD45b dans les hépatocytes VHC+ p = 0.0014 wt FL-N/35 30 p = 0.0001 25 p = 0.0003 20 % mitosis +/- 5-aza +/- + UV-C 15 10 5 0 wt FL-N/35 FL-N/35 FL-N/35 Phos- Phos-histone H3 (Ser 10) (Ser UV- UV-C + + + + 5-aza + + Gadd45β siRNA + (Higgs, Lerat et al. Soumis)
  • 25. L’expression de GADD45b est diminuée dans le foie des patients infectés par le VHC HCV - HBV - HCV + HBV + Groupes de patients étudiés NT NT T NT T NT T T Gadd45β > HCV+ Actin > NT 120 T 100 Relative Gadd45β protein HBV+ 80 Non tumoral tissue expression (%) Tumoral tissue NT 60 40 T 20 HBV- HCV- 0 HBV - HBV - HBV + HCV + HBV + HCV + HCV - HCV - (Higgs, Lerat et al. Soumis)
  • 26. Vers un mécanisme de la carcinogenèse hépatique viro-induite? Expression VHC Expression VHC Chronicité infection Chronicité infection Inhibition Inhibition réponse immune réponse immune Diminution de Diminution de Surexpression des Surexpression des protéines pro protéines pro cyclines et oncogènes production ROS production ROS cyclines et oncogènes apoptotiques apoptotiques Multiplication Multiplication Lésions ADN Lésions ADN Inhibition apoptose Inhibition apoptose cellulaire cellulaire Réparation ADN Réparation ADN CANCER du FOIE CANCER du FOIE
  • 27. Stéatose induite par le VHC: Mécanismes Moléculaires? Rôle direct des protéines virales?
  • 28. Stéatose micro-vésiculaire Non TG VHC TG VHC TG VHC TG Lerat et al., Gastroenterology 2002.
  • 29. Stéatose micro-vésiculaire coloration Oil Red O p<0.001 25 20 n=12 % de l’aire total 12.5 ± 0.4 15 10 n=12 n=10 13 ± 0.8 14.4 ± 0.8 5 M 0 n=7 14.1 ± 0.3 F HCV TG NON TGM analyse in silico
  • 30. Stéatose viro-induite: mécanismes moléculaires? HEPATOCELLULAR STEATOSIS de novo TG TG secretion TG degradation Increased TG synthesis default default (oxydation) serum uptake ? ? ? ? VIRAL ER Stress PROTEINS ?
  • 31. Défaut d’exportation des triglycérides. La sécrétion des VLDL hépatiques chez la souris à jeun a été mesurée par l’augmentation des triglycérides plasmatiques (A et B) et de l’apolipoprotéine B (C) après inhibition de la lipoprotéine lipase par le triton WR1339 (B et C). 1,2 14 6 A B C 12 5 1,0 Plasmatic ApoB (g/L) Plasmatic TG (g/L) Plasmatic TG (g/L) 10 4 0,8 8 3 0,6 6 2 0,4 4 1 WT HCV-tg WT HCV-tg WT HCV-tg n 14 14 n 13 13 n 13 13
  • 32. Inhibition de la « Microsomal Transfer Protein » Activité MTP 500 450 pmoles/100µg/4h 400 350 300 250 200 150 WT HCV-tg
  • 33. Stimulation de la lipogenèse RT-qPCR Citrate 9 ** p=0.02 ** WT ATP-CL HCV-tg ARNm (augmentation relative) Acetyl-CoA 4 Lipogenèse ** p=0.02 ACC * p=0.01 ** Malonyl-CoA * FAS 2 Acyl-CoAs SCD1 0 TG ACL ACC FAS EM SCD1 n 11 8 11 8 14 16 11 8 11 8
  • 34. Stimulation de la lipogenèse Western Blot 2.5 Citrate * p=0.01 * ATP-CL 2.0 Acetyl-CoA FAS/GAPDH Lipogenèse ACC 1.5 Malonyl-CoA FAS 1.0 Acyl-CoAs SCD1 0.5 TG WT HCV-tg n 4 9
  • 35. Régulation de la lipogenèse SREBP1c SREBP1c Domaine de transactivation Précurseur (Noyau) (RE puis Golgi) Citrate ATP-CL Acetyl-CoA Lipogenèse ACC Malonyl-CoA FAS Acyl-CoAs SCD1 TG
  • 36. Régulation de la lipogenèse SREBP1c SREBP1c Domaine de transactivation Précurseur (Noyau) (RE puis Golgi) Citrate ATP-CL Acetyl-CoA Western Blot Lipogenèse ACC SREBP1c (clivé) Malonyl-CoA noyau FAS Lamine A/C Acyl-CoAs SREBP1c (précurseur) microsomes SCD1 Actine TG WT HCV-tg
  • 37. Régulation de la lipogenèse SREBP1c SREBP1c Domaine de transactivation Précurseur (Noyau) (RE puis Golgi) Citrate ATP-CL RT-qPCR Acetyl-CoA ARNm (augmentation relative) Lipogenèse 4 ACC 3 Malonyl-CoA 2 FAS 1 Acyl-CoAs SCD1 0 WT HCV-tg TG n 14 16
  • 38. Lipogenèse induite par le stress du RE? SREBP1c SREBP1c Domaine de transactivation Précurseur (Noyau) (RE puis Golgi) Citrate ATP-CL Stress RE Acetyl-CoA RE Lipogenèse ACC PERK IRE-1 ATF6 Malonyl-CoA P-eiF2α Epissage ARNm XBP1 FAS Arrêt traduction Dégradation protéique Acyl-CoAs SCD1 TG
  • 39. Lipogenèse induite par le stress du RE? SREBP1c SREBP1c Domaine de transactivation Précurseur (Noyau) (RE puis Golgi) Citrate ATP-CL Stress RE Acetyl-CoA RE Lipogenèse ACC PERK IRE-1 ATF6 Malonyl-CoA P-eiF2α Epissage ARNm XBP1 FAS Arrêt traduction Dégradation protéique Acyl-CoAs Western blot 4 SCD1 3 RT-PCR eIF2-P/eIF2 2 ARNm XBP1 TG Non-épissé 1 Epissé 0 Non-Tg HCV Tg + WT HCV-tg
  • 40. Lipogenèse induite par le stress du RE? SREBP1c SREBP1c Domaine de transactivation Précurseur (Noyau) (RE puis Golgi) Citrate ATP-CL Stress RE Acetyl-CoA RE Lipogenèse ACC IRE-1 PERK ATF6 Malonyl-CoA P-eiF2α Epissage ARNm XBP1 FAS Arrêt traduction Dégradation protéique Acyl-CoAs Western Blot SCD1 3 Phospho-Perk / PERK 2 TG 1 0 Phospho-Perk 4 9
  • 41. Lipogenèse induite par le stress du RE? SREBP1c SREBP1c Domaine de transactivation Précurseur (Noyau) (RE puis Golgi) Citrate ATP-CL Stress RE Acetyl-CoA RE Lipogenèse ACC PERK IRE-1 ATF6 Malonyl-CoA P-eiF2α Epissage ARNm XBP1 FAS Arrêt traduction Dégradation protéique Acyl-CoAs RT-QPCR SCD1 ARNm (augmenation relative) 12 WT HCV-tg 6 TG 4 2 0 GRP78 EDEM PDI CHOP TRB3 n 16 15 11 8 7 4 7 4 15 18
  • 42. Résumé SREBP1c SREBP1c = Domaine de transactivation Précurseur (Noyau) (RE puis Golgi) Citrate ATP-CL Stress RE Acetyl-CoA RE Lipogenèse ACC = PERK IRE-1 ATF6 Malonyl-CoA P-eiF2α Epissage ARNm XBP1 FAS Arrêt traduction Dégradation protéique Acyl-CoAs SCD1 TG STEATOSE Accumulation TG intracellulaires HEPATIQUE ApoB MTP VLDL Exportation TG
  • 43. Towards mechanisms for HCV-induced steatosis? HEPATOCELLULAR STEATOSIS de novo TG TG secretion TG degradation Increased TG synthesis default default (oxydation) serum uptake YES ? YES ? VIRAL ER Stress PROTEINS NO
  • 44. Fibrose induite par le VHC? Mécanismes Moléculaires? Rôle direct des protéines virales?
  • 45. Stellate cell activation and absence of fibre deposition in HCV mice Non-Tg HCV-Tg Non Tg HCV-Tg anti-αSMA antibody Picrosirius red staining
  • 46. Enhanced fibre deposition in CCl4-treated HCV mice Non Tg Non Tg + CCl4 HCV-Tg + CCl4
  • 47. Quantification of fibre deposition Picrosirius Red Staining Non-Tg + CCl4 Non- Tg + CCl4 P=0.0036* 3,0 2,5 Area of fibers (%) 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 Non-Tg Tg Non-Tg Tg n 5 5 13 17 - CCl4 + CCl4 in silico Analysis * = Mann Whitney test
  • 48. Conclusions Modèle reproduisant les principales pathologies induites par le VHC Niveau d’expression similaire à l’infection chronique chez l’homme Absence de réponse immunitaire (pas d’inflammation ni de cirrhose) La cirrhose n’est pas un pré requis au développement de CHC : en accord avec données cliniques (méta-analyse, Maisonneuve 2009) Démonstration d’effets cytopathiques directs des protéines virales en absence de cirrhose. Inhibition de l’apoptose (voie FAS) Inhibition de l’expression du suppresseur de tumeur GADD45b Inhibition de la sécretion des VLDL (MTP) Stimulation de la lipogenèse Action co-fibrogène