Hépatite C Virus et marqueurs.pdf

HEPATITE C
Virus & Marqueurs

Stéphane Chevaliez

Centre National de Référence
Des Hépatites B, C et delta
Laboratoire de Virologie & INSERM U955
Hôpital Henri Mondor
Université Paris-Est
Créteil

Hépatite C : virus et marqueurs

Virus de l’Hépatite C

• Découvert par Houghton en 1989

• 1ère cause d’hépatite chronique et de cirrhose

en Europe et en Amérique du Nord

• 1ère indication de transplantation hépatique

dans les pays industrialisés
Afdhal, NH. 2004; Sem Liv Dis, 24(Supp 2): 3‐8



• Famille : Flaviviridae

• Genre : Hepacivirus

Phylogénie de la région codant la protéine NS5B
Adapted from Simmonds et al., 1999; 2001.



• Famille : Flaviviridae

• Genre : Hepacivirus

• Hôte naturel : Homme

• Tropisme : Hépatocyte


Organisation Structurale


Organisation Génomique des
Flaviviridae
0 1800 3600 5400 7200 9000 10800

Hepatitis C virus

5’UTR 3’UTR
C E1 E2 NS2 NS3 NS4B NS5A NS5B
p7

4A
Pestivirus

5’UTR 3’UTR
C E0 E1 E2 NS2 NS3 NS4B NS5A NS5B
Npro

4A
p7

Yellow fever virus

5’UTR 3’UTR
prM

Cap C E NS1 2A 2B NS3 NS4A 4B NS5


Organisation Génomique

Protéines structurales Protéines non structurales

Popescu and Dubuisson, Bio. Cell 2010, 102(1): 63‐74.


Organisation Génomique

Bartenschlager et al, Trends Microbiol, in press.


IRES et Traduction

From Department of Structural Biology, Stanford University Medical School, USA.


Réseaux d’Interactions

Park et al, BMC Bioinformatics 2010, 11(Suppl 1): S23.


Protéine de Capside

Boulant et al, J Virol 2005, 79(17): 11353‐11365.

VHC G1b

Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16‐27.


Capside et Lipides

Bartenschalger et al., Tends Microbiol, in press.


Interaction entre la Capside et
DGAT-1

*Diacylglycérol diacyltransférase-1

Herker et al., Nat Med 2010, 16(11): 1295‐1298.


Glycoprotéine E2
• Hétérodimère avec E1
• Régions hypervariables
– HVR1
– HVR2
– igVR

• Rôles
– HVR2 et igVR
indispensables au “folding“
E1-E2
– Étapes précoces
(interaction avec CD81,
peptide de fusion)

Krey et al., PLoS Pathog. 2010, 6(2): e1000762; McCaffrey et al., J Gen Virol 2011, 92: 112‐121.


Étape Précoce : Entrée du VHC

Popescu et al., Bio Cell 2010, 102: 63‐74.


HVR1

Région HVR1 (27 amino-acides)
 80% de divergence nucléotidique entre génotypes
 Epitope majeur de neutralisation

Timm et al., World J Gastroenterol 2007; 13(36)4808‐4817.


Transmission du VHC


Analyse Phylogénique
4a_ED43
Patient 7
Patient 4
Patient 8
1b_AWV2C33
Patient 6
1a_HCT18X5
Région HVR1 (81 nt) 3a_CB
CLUSTALX 2a_Q2B
DNADist (PHYLIP 3.5) 1a_HCT27X5
Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2) S1 (6/05)
Neighbor-Joining
Patient 3 (01/05)
Bootstraping : 1000 replicates
NJPlot
S2 (6/05)
S3 (6/05)
S4 (6/05)
Patient 3 (7/04)
Patient 2 (9/04)
Patient 2 (7/04)
100 Patient 3 (9/05)
Patient 3 (7/05)
S5 (7/05)
1b_HVR3812
5a_SA13
Patient 1 (7/04)
2b_JFH1
Surfaces inertes 6a_33
Séroconversion VHC 0.2
Patients VHC chroniques

Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627‐633.


Protéine p7
• Viroporine dont la
structure 3D a été
récemment déterminée
par ME

• Rôle(s) in vivo ?

• Cible thérapeutique
potentielle

Luik et al., Proc Natl Acad Sci 2009, 4;106(31): 12712‐6; Griffin S, Proc Natl Acad Sci 2009, 106(31): 12567‐68.


Activité Antivirale du BIT225
• IC50 de 314 nM dans le modèle du BVDV
• Activité synergique

Luscombe et al., Antiviral Res 2010 May;86(2):144‐53.


Protéine NS2
• NS2 (région N-ter)
– Rôle dans l’organisation
de la formation des
nucléocapsides

• NS2pro (région C-ter)

Jirasko et al., PLoS pathog 2010 Dec 16;6(12): e1001233; Ivo et al., Nature 2006, 442: 831‐835.


Protéine NS3-4A

Raney et al., J Biol Chem 2010, 285(30): 22725‐731.

Hépatite C : Nouvelles Hepatite C : virus et marqueurs

Inhibition de la Production d’IFN
par NS3


Protéase NS3

Raney et al., J Biol Chem 2010, 285(30): 22725‐731.


Etudes de Phase III Présentées à
l’AASLD™ 2010

• SPRINT-2
BOCEPREVIR (BOC)
• RESPOND-2

• ADVANCE
• ILLUMINATE TELAPREVIR (TVR)

• REALIZE


SPRINT-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : Design de l’Etude
S4 S28 S48 S72

48 PR PR
PR + placebo Suivi
n = 363 Lead-in

ARN-VHC indétectable à S8-24

Suivi S24
BOC/TGR PR
PR + boceprevir ARN-VHC détectable à S8-24
n = 368 Lead-in
P/R + placebo Suivi

BOC/PR48 PR
PR + boceprevir Suivi
n = 366 Lead-in

*BOC 800 mg q8h; pegIFN alfa-2b 1,5 µg/kg/s; RBV 600-1400 mg/j adaptée au poids.

Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB4.


Patients Naïfs de Génotype 1 : Caractéristiques
des Patients
Cohorte 1 (caucasiens) [n=938]
PR48 BOC/RGT BOC/PR48
n=311 n=316 n=311
Sexe masculin [n(%)] 171 (55) 198 (63) 187 (60)
Age (années) [moyenne] 48 49 49
IMC (kg/m2) [moyenne (±DS)] 27 (±5) 28 (±5) 27 (±5)
ARN du VHC >400,000 UI/mL [n(%)] 286 (92) 287 (91) 289 (93)
Type/sous-type du VHC [n(%)]*
1a 186 (60) 196 (62) 196 (63)
1b 112 (36) 110 (35) 102 (33)
Fibrose sévère/Cirrhose
22 (7) 25 (8) 37 (12)
(METAVIR F3/F4) [n(%)]
*La détermination du type et du sous-type a été réalisée par séquençage d’une portion de la région NS5B codant l’ARNpol (méthode de référence)



Patients Naïfs de Génotype 1 : RVS et Taux de
Rechute
p <0,0001

p <0,0001
Taux de RVS
Proportion de patients (%)

Taux de rechute



Patients Naïfs de Génotype 1 : RVS et Taux de
Rechute
p <0,0001

p <0,0001
Taux de RVS

Taux de rechute

➜ Le BOC améliore significativement les chances de guérison par rapport au SOC
➜ L’adaptation de la durée du traitement à la réponse (TGR) ne semble pas diminuer les
chances de guérison


ADVANCE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : Design de l’Etude
S8 S12 S24 S36 S48 S72

PR48 Placebo
PR Suivi
(n = 361) + P/R
eRVR+

Suivi
T12PR
(n = 363) TVR + PR PR
PR Suivi

eRVR+

Suivi
T8PR Pbo
TVR +
(n = 364) PR
+ PR PR
PR Suivi
eRVR-
*TVR 750 mg q8h; pegIFN alfa-2a 180 µg/s; RBV 1000-1200 mg/j adaptée au poids.
eRVR : réponse virologique rapide étendue (ARN indétectable à S4 et à S12)
Jacobson et al., AASLD 2010, Abstract 211.


Patients Naïfs de Génotype 1 : Caractéristiques
des Patients
T12PR (n = 363) T8PR (n = 364) PR (n = 361)
Sexe masculin [n (%)] 214 (59) 211 (58) 211 (58)
Origine ethnique
Caucasiens [n (%)] 325 (90) 315 (87) 318 (88)
Afro-Américains 26 (7) 40 (11) 28 (8)
Hispaniques 35 (10) 44 (12) 38 (11)
Âge (années) [médiane (intervalle)] 49 (19-69) 49 (19-68) 49 (18-69)
IMC (kg/m2) [médiane (intervalle)] 26 (18-47) 26 (17-46) 26 (17-48)
ARN du VHC > 800 000 UI/ml* [n (%)] 281 (77) 279 (77) 279 (77)
Type/sous-type du VHC** [n (%)]
1a 213 (59) 210 (58) 208 (58)
1b 149 (41) 151 (41) 151 (42)
1 non sous-typable 1 (< 1) 3 (1) 2 (1)
Stade de fibrose, n (%)
Fibrose en ponts 52 (14) 59 (16) 52 (14)
Cirrhose 21 (6) 26 (7) 21 (6)
*La charge virale (ARN du VHC, UI/ml) a été déterminée par PCR en temps réel (TaqMan® Roche), avec une limite de quantification de 25 UI/mL
**La détermination du génotype viral a été réalisée par hybridation inverse, INNO-LiPA v1.0



Patients Naïfs de Génotype 1 : RVS
p <0,0001

p <0,0001
Proportion de patients ayant
développé une RVS (%)



Patients Naïfs de Génotype 1 : RVS
p <0,0001

p <0,0001
Proportion de patients ayant
développé une RVS (%)

➜ Le TVR améliore significativement les chances de guérison par rapport à la
bithérapie standard
➜ Le traitement par TVR 8 ou 12 semaines donne des taux de RVS comparables
(différence NS)


RESPOND-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients en échec Thérapeutique de G1 : Design
de l’Etude
S4 S28 S48 S72

PR48 PR
PR + placebo Suivi
n = 80 Lead-in

ARN-VHC indétectable à S8

Suivi S24
BOC/TGR PR
PR + boceprevir S32 ARN-VHC détectable à S8
n = 162 Lead-in
PR +
Suivi
placebo

BOC/PR48 PR
PR + boceprevir Suivi
n = 162 Lead-in

*BOC 800 mg q8h; pegIFN alfa-2b 1,5 µg/kg/s; RBV 600-1400 mg/j adaptée au poids.

Bacon et al., AASLD 2010, Abstract 216.


Patients en échec Thérapeutique de G1 : RVS et
Taux de Rechute
p <0,0001

p <0,0001
Taux de RVS

Taux de rechute

17/60 8/25 95/162 17/111 107/161 14/121

Lead‐in +
32 BOC/PR ± PR12



Patients en échec Thérapeutique de G1 : RVS et
Taux de Rechute
p <0,0001

p <0,0001
Taux de RVS

Taux de rechute

17/60 8/25 95/162 17/111 107/161 14/121

Lead‐in +
➜ Le BOC améliore significativement les chances de guérison par rapport au
retraitement par SOC


Patients en échec Thérapeutique de G1 : RVS
Selon la Réponse Antérieure

Répondeurs partiels
RR

2/29 15/51 23/57 72/105 30/58 77/103

Lead‐in +



Patients en échec Thérapeutique de G1 : RVS
Selon la Réponse à S4
p <0,0001

p <0,0001

Diminution de l’ARN <1 Log10
Diminution de l’ARN ≥1 Log10

17/66 15/46 80/110 15/44 17/66

Lead‐in +
➜ Intérêt de la phase de Lead-in comme facteur prédictif de la RVS


REALIZE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients en Echec Thérapeutique de G1 : Design
de l’Etude

S4 S8 S12 S16 S48 S72

48 PR PR + placebo PR Suivi
n = 130

PR
n = 260 PR + TVR (Ll) PR Suivi

PR
n = 260
(LI) PR + TVR PR Suivi

*TVR 750 mg q8h; pegIFN alfa-2a 180 µg/s; RBV 1000-1200 mg/j adaptée au poids.

Press release, Sept 2010.


REALIZE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients en Echec Thérapeutique de G1 : RVS
Proportion de patients

PR48 (n=130)
ayant une RVS (%)

T12/PR48* (n=520)

*Bras poolés

Press release, Sept 2010.


TMC435 Administré en Monothérapie chez
des Patients de Génotype 2, 3, 4, 5 et 6
Diminution moyenne de l’ARN 
du VHC (Log UI/mL)

J3
J7

Manns et al., AASLD 2010, Abstract 82.

Nouvelles Hépatite C : virus et marqueurs

Protéine NS5B: RdRp

Lesburg et al., Nat struct Biol 1999, 6: 937‐943; Bressanelli et al., Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96: 13034‐13039; Ago et al., Srructure Fold Des 1999, 7:
1417‐1426.


Réplication Virale

– Modèle du poliovirus
. Virus à ARN monocaténaire
de polarité positive
Réplication

De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001‐18


Variabilité Génétique

• Erreurs au cours de la réplication
– Fréquentes
• 10-4-10-4 mutations par nucléotide copié au cours de la réplication du VHC
– Spontanées
– Au hasard

• Absence d’activité exonucléasique 3’⇒5’
("proofreading")
– Accumulation de mutations

• A l’origine de :
– La diversification des types et des sous-types
– La distribution en quasi-espèces


Diversification des Génotypes

Simmonds et al., Hepatology 2005, 42(4):962‐73.


Distribution des Génotypes

1a,

Adapted from Fang J., et al. J. Clin Liver Dis. 1997.


Distribution en Quasi-espèce

Weiner et al., Virology 1991; 180:842‐848; Martell et al., J Virol 1992;66:3225‐36.


Cibles des Molécules Antivirales
Site C (Palm)
Site A (Thumb/fingertips) (A-837093)
(JTK-109) Mutants: 411, 414, 448
Mutants: 495, 496, 499

A

B E
C
D

Site B (Thumb)
HCV-371 Site E (Finger, hypothetical)
Mutants: 419, 423, 482 GS-9190
Mutants: 445,448,452

Site D (Palm)
(HCV796) Site Actif
Mutants: 316 (R7128)
Mutants: 282
Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA


Activité Antivirale du MK-0608

wt S282R/T/I wt S282
MK-0608 at 1mg.kg-1 orally
7
6
HCV RNA (Log IU/mL)

5
4
3
2 - 4,6 - 4,1
LOQ
1 (20 IU/mL)
TMA + + + + - - - - - - - - + +
0
-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
Days


Cycle Viral

Adapted from Lindenbach and Rice, Nature (2005), 436: 933‐938.


Complexes de Réplication

Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453‐463.

HEPATITE C
Stratégie Diagnostique &
Suivi Virologique

Stratégie diagnostique & suivi virologique

Marqueurs Virologiques

Marqueurs indirects
Anticorps anti-VHC totaux

Marqueurs directs
Ag de capside (AgC)

ARN VHC

Génotype VHC

Profil de résistance


Tests Sérologiques

• Détection et quantification de l’Ag de
capside

• Test “Combo”
– Détection simultanée de l’Ag de capside et des
anticorps anti-VHC

• Détection des anticorps anti-VHC à l’aide
d’une trousse de 3ème génération


Antigène de Capside : un
Marqueur de la Réplication

r = 0.92; p < 0.0001

Bouvier‐Alias et al., Hepatology 2002, 36(1): 211‐218.


Performances Analytiques de la
Trousse Architect (Abbott)
• Spécificité
– 99,2% à 100%

• Sensitivité
– ≤10 fmol/L (i.e 500 to 3 000 UI/mL d’ARN VHC)
– Tous les génotypes (excepté génotype 2)

• Intervalle de quantification
– 10 à 20 000 fmol/L (≤ 7,8 Log10 UI/mL d’ARN
VHC)

• Stable à 37°C pendant 96 heures
Ross et al., J Clin Micribiol 2010, 48(4): 1161‐8; Mederacke et al., J Clin Virol 2009, 46(3): 210‐5; Miedouge et al., J Clin Virol 2010, 48(1):18‐21.


Trousse Architect : Monitoring
des Cinétiques Virales
RVR (G1b) SVR (G1b)

Relapser (G1b) NR (G1a)

Core Ag
RNA
Ross et al., J Clin Microbiol  2010, 48(4): 1161‐8.


Intérêts Cliniques de la
Quantification de l’AgC
• Diagnostic de l’infection
– Trousses commerciales
– Facile à utiliser, automatisée, peu couteux (20% par
rapport à une charge virale VHC)

• Décision de traiter et suivi de l’efficacité des
traitements antiviraux
– Quantitatif (≤20,000 fmol/L*)
– Alternative aux techniques de détection quantification
de l’ARN du VHC
(*Abbott Architect HCV Ag Assay)


Tests Virologiques Moléculaires

Tests qualitatifs Tests quantitatifs
Très sensibles Seuil de détection ≥ qualitatifs
(≤ 50 IU/mL)
Quelle quantité est présente ?
Est-ce que le VHC est présent ?

Détermination Détection de la résistance
du Génotype

Quel est le génotype du virus ? Quel type de VHC est présent ?


Tests Virologiques Moléculaires

Tests Qualitatifs-Quantitatifs

Est-ce que le VHC est présent et en quelle quantité ?

Détermination Détection de la résistance
du Génotype

Quel est le génotype du virus ? Quel type de VHC est présent ?


Intervalle de Quantification
10 102 103 104 105 106 107 108
Cobas Amplicor
HCV Monitor v2.0

SuperQuant

LCx HCV RNA
Assay

Versant HCV RNA
3.0 (bDNA)


Avantages Techniques de la PCR
en Temps Réel
- Diminution du risque de contamination

- Amélioration de la sensibilité

- Augmentation de l’intervalle de
quantification linéaire

- Amélioration précision et reproductibilité

- Augmentation de débit à travers
l’automatisation


Intervalle de Quantification
10 102 103 104 105 106 107 108
Cobas Amplicor
HCV Monitor v2.0

SuperQuant

LCx HCV RNA
Assay

Versant HCV RNA
3.0 (bDNA)

TaqMan 48 HCV
(Roche)

HCV Quant ASR
(Abbott)

Versant HCV RNA
1.0 (kPCR, Siemens)*

Artus HCV QS-RGQ
(Qiagen)*
*in development


Plates-formes
CAP-CTM96 (ROCHE)

kPCR (SIEMENS)

m2000SP-m2000RT (ABBOTT)


Avantages Cliniques de la PCR
en Temps Réel

• Remplace les techniques qualitatives de
détection de l’ARN VHC

• Quantifie l’ensemble des charges virales
observées en pratique clinique
– Charges élevées préthérapeutiques
– Faibles charges virales au cours du traitement

• Surveille efficacement les cinétiques
virales (évaluation précoce des réponses
virologiques au traitement)


Quantification ARN du VHC
(CTM, Roche)
8
HCV RNA level in CAP/CTM48 (Log10 IU/mL)

7

Genotype 1 (n=29)
6
Genotype 2 (n=27)
Genotype 3 (n=29)
5
Genotype 4 (n=30)
Genotype 5 (n=9)
4 Genotype 6 (n=2)

r = 0.889; p < 0.0001
3
3 4 5 6 7 8
HCV RNA level in Versant HCV 3.0 Assay bDNA
(Log10 IU/mL)
Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22‐31.


Absence de Détection de l’ARN Viral de
patients Fortement Virémiques Infectés par
un Génotype 4
(Log10 IU/mL) CAP/CTM96 m2000SP/m2000RT Versant 3.0
Patient 1 (4h) <1.08 5.4 5.0
Patient 2 (4l) <1.08 6.0 5.7

80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180
|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.........|
F_7157 (4a): TAGCCATGGCGTTAGTATGAGTGTTGTGCAGCCTCCAGGACCCCCCCTCCCGGGAGAGCCATAGTGGTCTGCGGAACCGGTGAGTACACCGGAATCGCCGG
Patient 1 (4h): ...........................A.....................................A...................T...............
Patient 2 (4l): ...........................A.....................................A...................T...............

190 200 210 220 230 240 250 260 270
.........|.........|......-...|.........| .........|.........|.........|.........| .........|........
F_7157 (4a): GATGACCGGGTCCTTTCTTGGATTAA-CCCGCTCAATGCCCGGAAATTTGGGCGTGCCCCCGCAAGACTGCTAGCCGAGTAGTGTTGGGTCGCGAAAGGCC
Patient 1 (4h): ......................A.T.A..........................................................................
Patient 2 (4l): .......................C..-.......................................................C.......T..........

280 290 300 310 320 330 340
|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.
F_7157 (4a): TTGTGGTACTGCCTGATAGGGTGCTTGCGAGTGCCCCGGGAGGTCTCGTAGACCGTGCACC
Patient 1 (4h): .............................................................
Patient 2 (4l): .............................................................

Chevaliez et al., 2008; Hepatology, 49(4): 1397‐1398.


Quantification de Transcrits d’ARN Sauvages ou
Mutés en Position 145 et/ou 165

Measured HCV RNA levels (Log10 IU/mL)

HCV 5’NC sequence Real-time PCR assays bDNA assay

CTM m2000 Versant 3.0

Wild-type (G145 and
5.73±0.13 6.05±0.10 6.43±0.01
A165)
Single mutant (G145A and
4.02±0.13 6.00±0.11 6.69±0.02
A165)
Single mutant (G145 and
4.28±0.35 5.88±0.20 6.30±0.02
A165T)
Double mutant (G145A
<1.08* 5.95±0.25 6.60±0.18
and A165T)
*Target not detected

Chevaliez et al., Hepatology, 2009, 50(5): 1681.


(m2000, Abbott)
HCV RNA level in m2000SP/m2000RT (Log10 IU/mL)
8

7

Genotype 1 (n=55)
6
Genotype 2 (n=21)
Genotype 3 (n=29)
5
Genotype 4 (n=24)
Genotype 5 (n=9)
4 Genotype 6 (n=3)

r = 0.972; p < 0.0001
3
3 4 5 6 7 8
HCV RNA level in Versant HCV 3.0 Assay bDNA
(Log10 IU/mL)
Chevaliez et al., J Clin Microbiol, 2009,47(6):1726‐32.


(kPCR, Siemens)

132 clinical samples

David Sherman., Molecular Symposium, September 2007 (source: Siemens Medical Solutions Diagnostics).


Résumé

• En pratique clinique, la quantification
de l’ARN du VHC doit être réalisée à
l’aide d’une technique de PCR en
temps réel
– Avec une limite de détection de l’ordre de
10 à 15 UI/mL


Génotypes du VHC

Simmonds et al. Hepatology 2005.


Répartition des Génotypes

1a,

Adapted from Fang J., et al. J. Clin Liver Dis., 1997.


Détermination du Génotype
• Méthodes moléculaires (genotyping)
– Analyse de la séquence après séquençage direct
– Hybridation inverse des produits d’amplification sur
des supports solides comportant des sondes
génotype sépcifique : Line Probe Assay (INNO-LiPA
HCV, Innogenetics)
– PCR en temps réel à l’aide d’amorces et de sondes
génotype spécifique

• Méthodes sérologiques (“serotyping”)
– ELISA compétitif

Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29; Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; Lareu et al., 1997; Le Pogam et al., 1998; J Clin
Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15.


Détermination du Génotype
• Méthodes moléculaires (genotyping)
– Analyse de la séquence après séquençage direct
– Hybridation inverse des produits d’amplification sur
des supports solides comportant des sondes
génotype sépcifique : Line Probe Assay (INNO-LiPA
HCV, Innogenetics)
– PCR en temps réel à l’aide d’amorces et de sondes
génotype spécifique

• Méthodes sérologiques (“serotyping”)
– ELISA compétitif

Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11‐29; Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197‐204; Lareu et al., 1997; Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36:
1461‐3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810‐15.


Versant® HCV Genotype 2.0
Assay (INNO-LiPA)


Intérêt de la Détermination du
Sous-Type ?
• Direct Acting Antivirals (DAAs) pourraient
avoir des efficacités antivirales différentes
selon les sous-types de VHC de génotype 1
in vitro et in vivo

• Le traitement par DAAs pourrait être associé
à des profiles de résistance différents selon
les sous-types de VHV de génotype 1 in vitro
et in vivo


Profils de Résistance du BMS-
70052, in vitro
Substitution amino Niveau de
EC50 fold-change
acidique Replication (%)
Génotype 1b
L31F/V 5-23 146±44
P32L 17 18±6
Y93H/N 19-28 20 ±7
Génotype 1a
M28T 683 31±23
Q30E/H/R 1 450-24 933 130±56
L31M/V 350-3 350 117±29
P32L 233 18±5
Y93C/H/N 1 850-47 017 18±11
Fridell et al. Antimicrob Agents Chemother. 2010; 54(9): 3641‐50


Profils de Résistance du Telaprevir
(PROVE-2 trial), in vivo
Génotype 1a Génotype 1b

Pt-1 Pt-2 Pt-3 Pt-4 Pt-5 Pt-6
R26K
V36L/M V36A V36A
T42S
A40T A40T
T54S T54S T54A
Y56F
T91A
R155K R155K R155K/E R155T/A
G174S
Chevaliez et al. International HIV&HEPATITIS VIRUS Drug Resistance Workshop and Curative Strategies 2010.


Détermination du Sous-Type par
une Méthode de Référence*

*HCV genotype determination by means of phylogenetic analysis of a
portion of the gene encoding the NS5B region was used as the reference
method

Chevaliez et al., PLoS One 2009, 4(12): e820.


Détermination du Sous-Type

1st Generation of Line 2nd Generation of Line
Sequence Analysis of RealTime HCV
Probe Assay Probe Assay
the 5’NCR Genotype II
(LiPA 1.0) (LiPA 2.0)

GT 1a 77.6% 70.5% 97.5% 93.2%
(n=237) (n=184) (n=167) (n=231) (n=220)

GT 1b 90.5% 91.3% 96.2% 88.6%
(n=263) (n=238) (n=240) (n=253) (n=233)

Chevaliez et al., PLoS One 2009, 4(12): e820.


Résumé

- Dans les essais cliniques évaluant les DAAs et
probablement en pratique clinique, le détermination du
sous-type des souches de génotype 1 est nécessaire
pour la stratification et l’interprétation des profils de
résistance
- La détermination du génotype sur la seule région 5’NC
doit être proscrite
- La 2nd génération de Line Probe Assay qui utilise des
sondes dirigées contre la région core en plus de la
région 5’NC est la meilleure méthode permettant de
distinguer les sous-types 1a et 1b


IL28B “Single Nucleotide
Polymorphism” (SNP)
En amont du géne de l’IL28B, codant l’IFN-λ3

rs12979860

Ge et al., Nature 2009; 461: 399‐401.


RVS à la Bithérapie Standard en
Fonction du Génotype IL28B
Réponse virologique soutenue (%)

Caucasians African-Americans Hispanics Combined
(n=1171) (n=300) (n=116) (n=1587)

12 14
37% 37% 22% 29%

51% 49% 48%

Thompson et al., Gastroenterology 2010; 139(1): 120‐129.


Résumé
- En pratique clinique, SNPs en amont du gène de
l’IL28B (rs12979860 et rs8099917) sont les facteurs
prédictifs les plus robustes de la RVS à la bithérapie

- Cependant, leur valeur prédictive à l’échelon
individuel n’est pas suffisante pour la prise en compte
dans les décisions thérapeutiques

- La détermination du génotype IL28B en association à
d’autre paramètres, comme la réponse virologique à
S4, pourrait être utile pour adapter le traitement,
éventuellement des patients sous triple combinaison

Ge et al., Nature 2009; 461: 399‐401; Tanaka et al., Nat Genet 2009; 41(10): 1105‐9; Afdhal et al, Hepatology in press.


Intérêts des Tests Virologiques
en Thérapeutique
• Décision de traiter

• Optimisation du schéma
thérapeutique

• Etude de la réponse virologique au
traitement

Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303‐20


Traitement de l’Hépatite
Chronique C
• Traitement standard
– Interféron pégylé alpha-2a or alpha-2b et
ribavirine à doses fixe ou adaptée au poids

• Durée de traitement
– 16 à 72 semaines en fonction du génotype et
de la réponse virologique


Intérêts de la Détermination du
Génotype

• Détermination systématique du
génotype
– Facteur prédictif de la réponse au
traitement
– Conditionne
. La dose de ribavirine
. La durée du traitement


Dose de Ribavirine
Proportion de patients avec RVS (%)

Ribavirine 0,8 g/j
Ribavirin 1,0 – 1,2 g/j

Hadziyannis et al., Ann Intern Med 2004;140: 346-355.


Durée de Traitement
Proportion de patients avec RVS (%)

24 semaines
48 semaines

Hadziyannis et al., Ann Intern Med 2004;140: 346‐355.


Intérêts de la Détection -
Quantification de l’ARN VHC

• Evaluation de la réplication virale chez des
patients anticorps anti-VHC positifs

• Evaluation de la réponse virologique au
cours du traitement pegIFN - RBV
– Réponse virologique rapide (semaine 4)
– Réponse virologique précoce (semaine 12)
– Réponse fin de traitement (EoT)
– Réponse virologique soutenue (semaine 24 post-Rx)


Réponses au Traitement en
Fonction des Cinétiques Virales

SOC
+1

0
HCV RNA reduction from
baseline (Log10 IU/mL)

-1

-2
Diminution ≥ 2 Log
-3

-4

-5
Detection cut-off
-6 (10-15 IU/mL)

0 4 8 12
Semaines


Réponse Virologique Précoce :
Facteur Prédictif de la RVS

EoT
RVS
Rechute

Diminution >2 Log ou Diminution <2 Log à S12
ARN indétectable à S12

Adapted from Ferenci et al., J Hepatol 2005, 43: 425‐433.


Réponses au Traitement en
Fonction des Cinétiques Virales

SOC
+1

0
HCV RNA reduction from
baseline (Log10 IU/mL)

-1

-2 Diminution ≥ 2 Log

-3

-4
Slow VR
-5 RVR
RVP Detection cut-off
-6 (10-15 IU/mL)

0 2 4 8 12
Semaines


Taux de RVS
ViraferonPeg 1.5µg/kg/w + RBV 1000-1400 mg/d
ViraferonPeg 1.0µg/kg/w + RBV 1000-1400 mg/d
PegIFN alpha-2a 180µg/w + RBV 1000-1200 mg/d
SVR

542/1019

667/1035

406/1019

386/1016
500/1016

423/1035
227/300

234/292

250/355

68/156

72/203
77/157
38/42

33/41

62/83
43/45

37/44

64/72

Week to first undetectable HCV RNA
Semaines avec un ARN du VHC indétectable
McHutchinson et al., New Engl J Med 2009, 361(6): 580‐593.


Longer Treatment Duration
Genotype 1, Slow virological responders
>2 Log drop at week 12, but detectable HCV RNA

48 weeks
72 weeks
Rate of SVR (%)

p=0.040

34/51 27/35 104/130 90/119 78/179 94/190 17/100 31/106 121/230121/225

HCV RNA <50 IU/mL HCV RNA >50 IU/mL
Berg et al., Gastroenterology 2006, 130: 1086‐97.


Longer Treatment Duration
Genotype 1 and 4, Slow virological responders
>2 Log drop at week 12, but detectable HCV RNA

48 weeks
72 weeks
Rate of relapse (%)

p<0.01

p<0.05

16/72 11/81 20/35 9/29

HCV RNA <50 IU/mL HCV RNA >50 IU/mL

Ferenci et al., Gastroenterology 2010, 138: 503‐512.


Shorter Treatment Duration

• A recent meta-analysis suggested that
– In patients infected with HCV genotype 1 with
an RVR, 24 weeks of therapy with SOC
should be considered only in subjects with
low baseline viral loads

– The optimal cut-off defining low baseline HCV
RNA level (400,000-800,000 IU/mL) is not
clearly defined

Moreno et al., J Hepatol 2010; 52: 25‐31.


Genotype 2 and 3, Rapid virological responders
(<50 IU/mL at week 4)
16 weeks
p<0.001 p<0.001 24 weeks
Rate of SVR (%)

375/458 368/405 197/243 115/212 181/215 174/193

Diago et al., Hepatology. 2010; 51(6): 1897‐903.


Genotype 2 and 3, Rapid virological responders
with a low baseline viral load (<400,000 IU/mL)
16 weeks
p=0.20 24 weeks
Rate of SVR (%)

111/122 95/100

Diago et al., Hepatology. 2010; 51(6): 1897‐903.

HCV genotype
HCV-1 (4,5,6) HCV-2,3
RNA quantification

SOC SOC
48 weeks 24 weeks
Ribavirin (1000-1400 mg.d-1) Ribavirin (800 mg.d-1)

RNA quantification at W4

HCV RNA HCV RNA RNA quantification at W4
undetectable detectable

Consider HCV RNA HCV RNA
24 weeks RNA quantification at undetectable detectable
of therapy1 W12

Decrease ≥ 2 Log Decrease ≥ 2 Log
Decrease < 2 Log
HCV RNA detectable HCV RNA
undetectable

Continue Rx until
W24

If HCV RNA
Consider
Stop antiviral undetetectable Continue Rx
Continue Rx until 16 weeks
treatment Continue Rx Until until W24
W48 of therapy2
W72
1In patients with a low viral load at baseline (<400,000 IU/mL); 2In patients with a low viral load at baseline (400,000-600,000 IU/mL)


Future HCV Therapy

• Future standard treatment
– Pegylated interferon alpha-2a or alpha-2b
– Ribavirin
– Specific inhibitor of the NS3/4A protease
. Telaprevir
. Boceprevir


ADVANCE Trial
Telaprevir, Naïve, Genotype 1

T12PR Follow‐up
TVR+PR PR

no eRVR
N = 363 PR Follow‐up

T8PR TVR Follow‐up
PR

no eRVR
N = 364 +PR PR Follow‐up

PR48 PR Follow‐up
N = 350
*eRVR = undetectable HCV RNA at week 4 and week 12

0 8 12 24 36 48 60 72
Jacobson et al., AASLD 2010, Abstract 211. Weeks on therapy


SVR Rates
p <0.0001
p <0.0001
Proportion of Patients
 with SVR (%)



SPRINT-2 Trial
Boceprevir, Naïve, Genotype 1

BOC/RGT Follow‐up

VR
LI BOC+ PR
N = 368 PR Follow‐up

no VR
BOC/PR48 LI BOC + PR Follow‐up
N = 366

PR48 PR Follow‐up
N = 363

*VR = HCV RNA undetectable between weeks 8 and 24

0 4 12 24 28 36 48 60 72
Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB‐4. Weeks on therapy

How to use molecular techniques to optimize management of chronic heptitis C

Taux de RVS
p <0.0001
p <0.0001
Proportion of Patients
 with SVR (%)

Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB-4.


Résumé
- Duration of triple therapy with pegylated IFN,
ribavirin and a protease inhibitor will be tailored
to the virological response at week 4 or earlier

- Response-guided therapy is associated with
high rates of SVR in genotype-1 treatment naïve
patients

- The ideal time points, frequency, and the
feasibility in real-life practice need to be further
evaluated

Hépatite C Virus et marqueurs.pdf

Contenu connexe

Tendances

En vedette

Similaire à Hépatite C Virus et marqueurs.pdf

Plus de odeckmyn

Hépatite C Virus et marqueurs.pdf