Protocole pour réaliser des préparations microscopiques de mitose.

1. PROTOCOLE
1. Prélever avec des ciseaux une jeune racine en croissance sur un bulbe (c’est quoi un bulbe ?). Couper le segment terminal à 5 mm de l'extrémité et le déposer dans le verre de montre. On doit pouvoir observer, près de l'extrémité, le méristème (site de nombreuses mitoses) qui forme une petite tache plus ou moins jaune très pâle. Faire plusieurs prélèvements (3, 4 ou 5 selon votre humeur et votre dextérité)
Plus le fragment prélevé est petit, dans l'idéal limité au méristème, plus le rapport du nombre de cellules en mitose par rapport au nombre total de cellules est élevé, facilitant ainsi l'identification des figures de mitose dans la préparation microscopique finale.
2. Recouvrir l'échantillon d'acide chlorhydrique à 1 mol.L-1. Laisser agir 5 minutes pendant lesquelles l'acide hydrolyse le ciment pectique qui relie les parois cellulaires. Ceci facilitera ensuite la dissociation des cellules.
3. Enlever l'acide avec un essuie-tout utilisé comme papier buvard en faisant attention de ne pas coller l’échantillon sur le papier.
4. Recouvrir l'échantillon d'une solution d'orcéine et laisser agir pendant 20 minutes. (Pendant ce temps on apprendra : 1. A utiliser un microscope à l’immersion, 2. A faire une photographie d’une préparation microscopique, à transférer cette photo et à la traiter à l’aide d’un joli ciel (euh ! non, d’un logiciel)
5. Éliminer le colorant avec un essuie-tout, tout en faisant attention de ne pas entraîner l'échantillon. Rincer deux ou trois fois à l’eau en retirant les produits de rinçage avec le papier essuie-tout
6. Transférer les échantillons sur une lame, recouvrir d'une goutte d'acide acétique à 45 % et poser une lamelle couvre-objet.
7. Appuyer doucement sur la lamelle (attention, fragile !) pour aplatir l'échantillon de façon à former une couche monocellulaire en déplaçant très légèrement la lamelle (mais pas en tournant !) tout en appuyant pour provoquer la dissociation des cellules.
8. Observer, identifier, photographier, transférer, traiter, créer.