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UNIVERSITE CADI AYYAD
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Principe d’électrophorèse
Différents types d’électrop...
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L'électrophorèse est une technique permettant la
séparation de molécules porteuses de charges
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Cette technique a été imaginée en 1892 par S.E. Linder et H. Picton qui sont
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Principe
Le principe consiste à soumettre un mélange de
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Le champ électrique est fourni par un
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Electrophorèse de zone
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 Electrophorèse sur gel
L'électrophorèse en gel d'agarose
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 Sur gel de polyacrylamide
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 Electrophorèse bidimensionnelle
Lorsqu'il est existé des bandes protéiques très proches, on a un
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Electrophorèse bidimensionnelle
Selon le pHi (modifications de la charge )
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Sérum humain normal :
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L'éLectrophorèse et l'analyse medicale

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L'éLectrophorèse et l'analyse medicale

  1. 1. Page 1Free Powerpoint Templates UNIVERSITE CADI AYYAD FACULTE DES SCIENCES SEMLALIA - MARRAKECH Département de Chimie 2014/2015 Préparé par : Ahmed AIT KHOUYA Idir BENAISSA Encadré par: Mr. Aziz BENYAICH
  2. 2. Page 2
  3. 3. Page 3 Plan: Définition d’électrophorèse L’Histoire d’électrophorèse Principe d’électrophorèse Différents types d’électrophorèse Les application de l’électrophorèse
  4. 4. Page 4 L'électrophorèse est une technique permettant la séparation de molécules porteuses de charges électriques comme les acides aminés, les protéines, les acides nucléiques dont l'ADN...
  5. 5. Page 5 Cette technique a été imaginée en 1892 par S.E. Linder et H. Picton qui sont inspirés des travaux d’Hermann Von Helmholtz sur l’électro-osmose. En effet, ce dernier constata qu’il était possible de déplacer des particules chargées sous l’effet d’un champ électrique.
  6. 6. Page 6
  7. 7. Page 7 Principe Le principe consiste à soumettre un mélange de molécules à un champ électrique ce qui entraine la migration des molécules chargées. En fonction de différents paramètres (charge, masse, forme, nature du support, conditions physico-chimiques) la vitesse de migration va être variable, ce qui permet la séparation des différentes molécules.
  8. 8. Page 8 Les différents types d’électrophorèse électrophorèse en veine liquide Le champ électrique est fourni par un générateur de courant continu. Le support de ce champ est constitué par une solution tampon de pH et de concentration convenables dont les ions conduisent le courant d'un pôle à un autre.
  9. 9. Page 9 Electrophorèse de zone On distingue plusieurs types électrophorèse de zone:  Sur Papier Il servait surtout à séparer des acides aminés ou d'autres petites molécules chargées. Le dépôt et la migration des échantillons se font en surface. Puis détermination du point isoélectrique d’un acide aminé. On a une mesure de mobilité par détermination de mobilité d’un acide aminé à différent pH
  10. 10. Page 10  acétate de cellulose l'agarose est utilisé à des concentrations de 0,5 % à 2 % (masse/volume) et permet de séparer des molécules de très grande taille, principalement de l'ADN ou de l'ARN.
  11. 11. Page 11  Electrophorèse sur gel L'électrophorèse en gel d'agarose est une technique de base au laboratoire de biologie moléculaire. Elle est utilisée •Soit à des fins analytiques: pour séparer et identifier des fragments d'ADN, pour déterminer leur taille, pour en estimer la quantité, •Soit à des fins préparatoires, pour purifier un fragment d'ADN de taille connue.
  12. 12. Page 12  Sur gel de polyacrylamide C'est une méthode très fine de séparation par simple électrophorèse sur support. Est réalisée en présence de SDS
  13. 13. Page 13 Révélation des protéines séparées présentant un gel par coloration avec comme colorant possible : •le bleu noir naphtol •le nitrate d'argent (qui est plus sensible) •le bleu de Coomasie Ex : Gel coloré au bleu de Coomassie
  14. 14. Page 14  Électrophorèse en champ pulsé en utilisant un champ électrique discontinu ou bien en modifiant périodiquement la direction du champ. Dans ces conditions, le temps mis par la molécule d'ADN pour se positionner dépend de sa longueur. Ainsi, une molécule d'ADN très longue (2 000 kb) passera plus de temps à se réorienter qu'à se déplacer, tandis qu'une plus petite molécule (200 kb) passera plus de temps à migrer. Le repérage des fragments, après leur positionnement, fait appel à la technique d'hybridation moléculaire.
  15. 15. Page 15  Electrophorèse bidimensionnelle Lorsqu'il est existé des bandes protéiques très proches, on a un chevauchement. Par les méthodes unidimensionnelles la résolution et bon pour moins de 50 protéines. Grâce à l'électrophorèse bidimensionnelle, on combine deux modes de séparation différents. La résolution peut être appliquée pour plus de 1000 protéines différentes.
  16. 16. Page 16 Electrophorèse bidimensionnelle Selon le pHi (modifications de la charge ) focalisation isoélectrique DIMENSION 1 DIMENSION 2 Selon le PM (durant cette migration, faite à un pH où les anticorps sont électriquement neutres)
  17. 17. Page 17 Séparation des acides aminés Séparation des protéines Séparation des fragment d’ADN Domaine d’industrie Domaine médicale Les application de l’ électrophorèse :
  18. 18. Page 18 pH > pHi l'acide aminé a une charge globale négative Anode pH = pHi l'acide aminé a une charge globale nulle (zwitterion) ne migre pas et reste au point de départ. pH < pHi l'acide aminé a une charge globale positive Cathode Séparation des acides aminés Chaque acide aminé caractérisé par une valeur de pH isoélectrique, pHi auquel les acides aminés sont électriquement neutres.
  19. 19. Page 19
  20. 20. Page 20 Electrophorèse des protéines (protéines sériques comme exemple) : Les protéines sériques sont des protéines contenues dans le sérum ou le plasma sanguin. Les protéines sériques jouent différentes fonctions de transport, de défense de l'organisme. Elle repose sur la capacité des protéines chargées à migrer au travers des pores d'un gel lorsqu'on applique un courant électrique. Principe :
  21. 21. Page 21  2µl de sérum sont disposés dans un endroit convenable de la bande d’acétate de cellulose imbibée de tampon sodique de pH 8,6. Technique :  Les protéines chargés négativement à ce pH lorsqu’elles sont soumises à un champs électrique se déplacent vers l’anode (électrode positive) avec des vitesses dépendant de leur charge.
  22. 22. Page 22 Détection d'anomalies immunitaires : Sérum humain normal :
  23. 23. Page 23 Sérums pathologiques
  24. 24. Page 24 Électrophorèse de l’ADN (sur gel d'agarose) :
  25. 25. Page 25
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