Présentée par: Mme LIAMANI Ouafia              Doctorante en biologie  Option: biologie de la reproduction
Cryodécapage Technique    Etude des lobservationmoderne de   membranes     avec un cytologie   cellulaires    (MET)
• congélation ou                 utilisation de  Cryo           froid               • élimination de la                 pa...
Intérêt     éviter une fixation          chimique    éviter tout artefact   étudier la morphologie     ou l’ultra-structure
ETAPES DE CRYODECAPAGE               Coupe ou                              IsolementCongélation                  Décapage ...
1- Congélation
Définition:• Un processus de fixation très rapide• Action de soumettre au froid un échantillonBut:• Assure une bonne conse...
Azote liquide
Congélation dans l’azote liquide
2- Coupe ou cryofracture
Définition:• Coupe au froid.But:• Une légère cryodessiccation ou cryofracturedécape la surface de l’échantillonMéthode:• L...
Détails des 2 feuillets membranaires dénudés
3-Décapage
Définition:• élimination de la partie superficielle d’un objetBut:• Augmenter le pouvoir de résolution• une étape de subli...
Plaque chauffante à 126°C                         2mm                                      La glace est éliminée de la    ...
4- Ombrage métallique
Définition:• Transformation dun élément transparent en un élément opaque pour lobservation au microscopeBut:• Faire ressor...
carboneDépôt d’un film continu de carbone à la surface                                                     platine Ombrage...
5- Isolement des répliques
Elimination de la partieorganique par un acide minéral                          •H2SO4                          •HCL
Réplique carbone-métalIsolement de la réplique
6- Observation au MET
Microscope électronique à transmission
Cellule végétale (Euglena gracilis )observer au MET                après cryodécapage
Appareil de Golgie observer au MET après             cryodécapage
Une portion de chloroplaste de chlamydomonas (algue unicellulaire) observer au MET après cryodécapage
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Technique de cryodécapage

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Technique de cryodécapage

  1. 1. Présentée par: Mme LIAMANI Ouafia Doctorante en biologie Option: biologie de la reproduction
  2. 2. Cryodécapage Technique Etude des lobservationmoderne de membranes avec un cytologie cellulaires (MET)
  3. 3. • congélation ou utilisation de Cryo froid • élimination de la partie superficielleDécapage d’un objetEnlever la partie superficielle d’un objet par congélation
  4. 4. Intérêt éviter une fixation chimique éviter tout artefact étudier la morphologie ou l’ultra-structure
  5. 5. ETAPES DE CRYODECAPAGE Coupe ou IsolementCongélation Décapage Ombrage Observation cryofracture des métallique au MET répliques
  6. 6. 1- Congélation
  7. 7. Définition:• Un processus de fixation très rapide• Action de soumettre au froid un échantillonBut:• Assure une bonne conservation de la moindrepetite structure.Méthode:• congelé dans l’azote liquide à -196 C jusquà -200 C par le biais du fréon
  8. 8. Azote liquide
  9. 9. Congélation dans l’azote liquide
  10. 10. 2- Coupe ou cryofracture
  11. 11. Définition:• Coupe au froid.But:• Une légère cryodessiccation ou cryofracturedécape la surface de l’échantillonMéthode:• Lame d’acier refroidie par l’azote liquide, permet une coupe faite de manière à obtenir une surface lisse
  12. 12. Détails des 2 feuillets membranaires dénudés
  13. 13. 3-Décapage
  14. 14. Définition:• élimination de la partie superficielle d’un objetBut:• Augmenter le pouvoir de résolution• une étape de sublimationMéthode:• se fait sous vide élevé (10-6 Barr).En approchant à 2 mm environ de la surface de l’échantillon qui est à -100 C une plaque portée elle-même à une température de 126 C
  15. 15. Plaque chauffante à 126°C 2mm La glace est éliminée de la -100°C surface par sublimationMembrane nucléaire à nu, avec ses protéines et ses particules
  16. 16. 4- Ombrage métallique
  17. 17. Définition:• Transformation dun élément transparent en un élément opaque pour lobservation au microscopeBut:• Faire ressortir tous les détails superficiels de lacelluleMéthode:• 1ère vaporisation verticale d’une mince couche de carbone, c’est la réplique carbonée ; cette dernière est ombrée par 2ème vaporisation oblique de platine
  18. 18. carboneDépôt d’un film continu de carbone à la surface platine Ombrage de la surface par un film de platine
  19. 19. 5- Isolement des répliques
  20. 20. Elimination de la partieorganique par un acide minéral •H2SO4 •HCL
  21. 21. Réplique carbone-métalIsolement de la réplique
  22. 22. 6- Observation au MET
  23. 23. Microscope électronique à transmission
  24. 24. Cellule végétale (Euglena gracilis )observer au MET après cryodécapage
  25. 25. Appareil de Golgie observer au MET après cryodécapage
  26. 26. Une portion de chloroplaste de chlamydomonas (algue unicellulaire) observer au MET après cryodécapage

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