SP Tests antipaludogrammes

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SP Tests antipaludogrammes - Conférence de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Marie Ange RASON et Milijaona RANDRIANARIVELO JOSIA

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SP Tests antipaludogrammes

  1. 1. 1Travaux pratiquesTravaux pratiquesTest de chimiosensibilitTest de chimiosensibilitéé in vitro pourin vitro pourll’é’évaluation de la sensibilitvaluation de la sensibilitéé dede PlasmodiumPlasmodiumfalciparumfalciparum aux extraits de plantesaux extraits de plantesMarie Ange Rason, Laetitia Morin, Michel RatsimbasonMarie Ange Rason, Laetitia Morin, Michel Ratsimbasonet Milijaona Randrianarivelojosiaet Milijaona RandrianarivelojosiaAtelier PaludismeAtelier Paludisme –– 5eme5eme ééditiondition19 F19 Féévrier au 30 Mars 2007vrier au 30 Mars 2007
  2. 2. 2Photo:Randrianarivelojosia&Tall,Nov.Photo:Randrianarivelojosia&Tall,Nov.20032003…… il y a un besoin permanent en nouveaux antipaludiquesil y a un besoin permanent en nouveaux antipaludiquesAntipaludiques, outil de lutte contre le paludisme :Antipaludiques, outil de lutte contre le paludisme :nombre limitnombre limitéé et det dééfifiéés par la rs par la réésistance des parasitessistance des parasites
  3. 3. 3ÉÉtapes cltapes cléé dans le ddans le dééveloppement de mveloppement de méédicamentsdicaments
  4. 4. 4NNOHHOMeQuinineQuinineNCF3CF3NHOHHMefloquineMefloquineNNHN(CH 2CH 3)2ClChloroquineChloroquineOCH3CH3OOOOCH3HHHArtemisinineArtemisinineNNH OHCH 2-N(CH 2CH 3)2ClAmodiaquineAmodiaquineStructureStructure chimiqueschimiques dd’’antipaludiquesantipaludiques majeursmajeurs
  5. 5. 5MMéédecine traditionnelle : traitement des symptômesdecine traditionnelle : traitement des symptômes(page 73)TazoTazo (fi(fièèvre, frisson, cvre, frisson, cééphalphaléée, lombalgie, fatiguee, lombalgie, fatigue ……))nn’’est pas forcement du paludismeest pas forcement du paludisme
  6. 6. 6Plantes, paludisme et antipaludiquesPlantes, paludisme et antipaludiquesAmAméérique latine :rique latine :QuinineQuinineAsie :Asie :ArtemisinineArtemisinine
  7. 7. 7Photo:Randrianarivelojosia,2003?PaludismePaludisme etet plantesplantesafricainesafricainesPlantes mPlantes méédicinales en Afrique :dicinales en Afrique :superstition ? rsuperstition ? rééalitalitéé ??Comment dComment déécouvrir descouvrir desmolmoléécules antipaludiquescules antipaludiques ààpartir des plantes ?partir des plantes ?MMéédicaments obtenusdicaments obtenus àà partirpartirdes plantes de Madagascardes plantes de MadagascarCatharanthusCatharanthus roseusroseus donne desdonne desantianti--leucleucéémiquesmiquesCentellaCentella asiaticaasiatica donne un cicatrisantdonne un cicatrisant
  8. 8. 8Plantes de Madagascar et de lPlantes de Madagascar et de l’’Afrique,Afrique, éétuditudiéées rigoureusementes rigoureusementpar des grands laboratoirespar des grands laboratoires
  9. 9. 9Premier pas :Premier pas : identifier des extraits ou des molidentifier des extraits ou des molééculesculesantiplasmodialesantiplasmodiales àà partir des plantespartir des plantesCCHHIIMMIIEEPlantesPlantes BiologieBiologie
  10. 10. 10Premier pas :Premier pas : identifier des extraits ou des molidentifier des extraits ou des molééculesculesantiplasmodialesantiplasmodiales àà partir des plantespartir des plantesCCHHIIMMIIEEEthnobotaniqueEthnobotaniquechimiotaxonomiechimiotaxonomieCollection deCollection de plantesplantesTest antiplasmodial in vitroTest antiplasmodial in vitroPlantesPlantes BiologieBiologie
  11. 11. 11Premier pas :Premier pas : identifier des extraits ou des molidentifier des extraits ou des molééculesculesantiplasmodialesantiplasmodiales àà partir des plantespartir des plantesCCHHIIMMIIEEEthnobotaniqueEthnobotaniquechimiotaxonomiechimiotaxonomieCollection deCollection de plantesplantesTest antiplasmodial in vitroTest antiplasmodial in vitroTest de cytotoxicitTest de cytotoxicitéé in vitroin vitroTest in vivo chez laTest in vivo chez la sourissouris((antipaludiqueantipaludique,, toxicittoxicitéé))PlantesPlantes BiologieBiologie
  12. 12. 12Premier pas :Premier pas : identifier des extraits ou des molidentifier des extraits ou des molééculesculesantiplasmodialesantiplasmodiales àà partir des plantespartir des plantesCCHHIIMMIIEECollection deCollection de plantesplantesTest antiplasmodial in vitroTest antiplasmodial in vitroTest de cytotoxicitTest de cytotoxicitéé in vitroin vitroTest in vivo chez laTest in vivo chez la sourissouris((antipaludiqueantipaludique,, toxicittoxicitéé))PlantesPlantes BiologieBiologie
  13. 13. 13Premiers pas :Premiers pas : Identification des extraits actifs in vitroIdentification des extraits actifs in vitrocontrecontre Plasmodium falciparumPlasmodium falciparumSSéélectionlectiondes plantesdes plantesCollecteCollectedes plantesdes plantesPrPrééparationparationdes ddes déécoctcoctééss
  14. 14. 14Premiers pas :Premiers pas : Identification des extraits actifs in vitroIdentification des extraits actifs in vitrocontrecontre Plasmodium falciparumPlasmodium falciparumSSéélectionlectiondes plantesdes plantesCulture dePlasmodium falciparumCollecteCollectedes plantesdes plantesPrPrééparationparationdes ddes déécoctcoctééss
  15. 15. 15Premiers pas :Premiers pas : Identification des extraits actifs in vitroIdentification des extraits actifs in vitrocontrecontre Plasmodium falciparumPlasmodium falciparumSSéélectionlectiondes plantesdes plantesCulture dePlasmodium falciparumCollecteCollectedes plantesdes plantesTestanti-Plasmodiumin vitroPrPrééparationparationdes ddes déécoctcoctééssEvaluationde l’activitéantiplasmodiale(Extrait aqueux ou organique)(Extrait aqueux ou organique)
  16. 16. 16Premiers pas :Premiers pas : Identification des extraits actifs in vitroIdentification des extraits actifs in vitrocontrecontre Plasmodium falciparumPlasmodium falciparumCulture dePlasmodium falciparumTestanti-Plasmodiumin vitroEvaluationde l’activitéantiplasmodialeSSéélection deslection desextraitsextraits àà fractionnerfractionnerFractionnementFractionnement(chromatographie)(chromatographie)(fractions(fractionsou molou moléécules pures)cules pures)
  17. 17. 17Premiers pas :Premiers pas : Identification des extraits actifs in vitroIdentification des extraits actifs in vitrocontrecontre Plasmodium falciparumPlasmodium falciparumCulture dePlasmodium falciparumTestanti-Plasmodiumin vitroChimie de planteChimie de plante(purification)(purification)Evaluationde l’activitéantiplasmodiale(mol(moléécules isolcules isoléées)es)
  18. 18. 18ActivitActivitéé intrinsintrinsèèque antique anti--PlasmodiumPlasmodium des extraitsdes extraitsde plantesde plantesEffet des extraits deEffet des extraits deplantes sur lplantes sur l’’activitactivitéé desdesantipaludiques standardantipaludiques standardPremiers pas :Premiers pas : Que peutQue peut--on chercheron chercher in vitroin vitro ??
  19. 19. 19Cycle biologique des plasmodies infectant lCycle biologique des plasmodies infectant l’’hommehomme
  20. 20. 20Culture continue deCulture continue de Plasmodium falciparumPlasmodium falciparum(reproduction in vitro du stade(reproduction in vitro du stade erythrocytaireerythrocytaire))
  21. 21. 21Tests antiplasmodialTests antiplasmodial in vitroin vitroMicroscopiqueMicroscopiqueOMS, CTD/MAL/97.20OMS, CTD/MAL/97.20 RevRev. 2 2001. 2 2001ColorimColoriméétrique (pLDH, HRPII)trique (pLDH, HRPII)Moreno etMoreno et alal.. MedMed Trop 2001; 61:545Trop 2001; 61:545--5757NoedlNoedl etet alal.. AntimicrobAntimicrob AgentsAgents ChemotherChemother 2002; 46:16582002; 46:1658--6464Isotopique (hypoxanthine tritiIsotopique (hypoxanthine tritiéée)e)Desjardins, ClinDesjardins, Clin PharmacolPharmacol TherTher 1979; 26:3271979; 26:327--2929Le Bras,Le Bras, AmAm J TropJ Trop MedMed HygHyg 1983; 32: 4471983; 32: 447--5151Mise en cultureMise en culturedes parasitesdes parasitesCytomCytoméétrie en fluxtrie en fluxPattanapanyasatPattanapanyasat etet alal.. CytometryCytometry 1997; 27: 841997; 27: 84--9191MicrofluorimetriqueMicrofluorimetrique ((PicoGreenPicoGreen,, SybergreenSybergreen))Corbett et al. Am J Trop Med Hyg 2004; 70:119-24
  22. 22. 22Contraintes logistique et technique (communes)Contraintes logistique et technique (communes)•• Clone de parasitesClone de parasites•• ÉÉquipements de laboratoirequipements de laboratoire•• Personnel compPersonnel compéétanttant•• Bonnes pratiques de laboratoireBonnes pratiques de laboratoire•• Souches de rSouches de rééfféérence derence de P. falciparumP. falciparum ((3D7, FCM29, D63D7, FCM29, D6 ……))Questionnements :Questionnements :-- laboratoires rlaboratoires réégionaux en Afrique ?gionaux en Afrique ?-- collaborationscollaborations sudsud--nordnord ??
  23. 23. 23Tests de chimiosensibilitTests de chimiosensibilitéé in vitroin vitroMicroscopiqueMicroscopiqueOMS, CTD/MAL/97.20OMS, CTD/MAL/97.20 RevRev. 2 2001. 2 2001ColorimColoriméétrique (pLDH, HRPII)trique (pLDH, HRPII)Moreno etMoreno et alal.. MedMed Trop 2001; 61:545Trop 2001; 61:545--5757NoedlNoedl etet alal.. AntimicrobAntimicrob AgentsAgents ChemotherChemother 2002; 46:16582002; 46:1658--6464Isotopique (hypoxanthine tritiIsotopique (hypoxanthine tritiéée)e)Desjardins, ClinDesjardins, Clin PharmacolPharmacol TherTher 1979; 26:3271979; 26:327--2929Le Bras,Le Bras, AmAm J TropJ Trop MedMed HygHyg 1983; 32: 4471983; 32: 447--5151CytomCytoméétrie en fluxtrie en fluxPattanapanyasatPattanapanyasat etet alal.. CytometryCytometry 1997; 27: 841997; 27: 84--9191MicrofluorimetriqueMicrofluorimetrique ((PicoGreenPicoGreen,, SybergreenSybergreen))Corbett et al. Am J Trop Med Hyg 2004; 70:119-24
  24. 24. 24ProcProcéédure:dure:Randrianarivelojosia etRandrianarivelojosia et alal, 2002, 2002Le Bras & Deloron, 1983Le Bras & Deloron, 1983Plasmodium falciparumPlasmodium falciparum (synchronis(synchroniséé))PrPrééparation de la suspension parasitaire dans du RPSH (200paration de la suspension parasitaire dans du RPSH (200µµllpar puits sur plaque de 96 puits; 0,5% de parasitpar puits sur plaque de 96 puits; 0,5% de parasitéémie; 1,5%mie; 1,5%dd’’hhéématocrite; hypoxanthine tritimatocrite; hypoxanthine tritiéée 0,5e 0,5 µµCiCi/puits)/puits)Incubation 42hIncubation 42h àà 3737°°C (atmosphC (atmosphèère micro are micro aéérophile et humide)rophile et humide)Evaluation de la radioactivitEvaluation de la radioactivitéé incorporincorporéée et calcul des CI50e et calcul des CI50Conduite du test isotopiqueConduite du test isotopique in vitroin vitro
  25. 25. 25SchSchéématisation de lmatisation de l’’incorporation de lincorporation de l ’’hypoxanthinehypoxanthinetrititritiéée dans le dans l’’ADN du parasiteADN du parasite+Hypoxanthine-3HADN plasmodialADN plasmodial(d(déébut du test)but du test) ADN marquADN marquéé auautritiumtritium
  26. 26. 26CompteurCompteur àà scintillation liquide pilotscintillation liquide pilotéé par ordinateurpar ordinateur. Comptage de la radioactivit. Comptage de la radioactivitéé((cpmcpm))àà ll ’’aide duaide du MicrobetaMicrobeta.. Calcul desCalcul des CI50CI50 (concentration(concentrationinhibitrice 50%)inhibitrice 50%)
  27. 27. 27IllustrationIllustrationEvaluationEvaluation de lactivitde lactivitéé antiplasmodialeantiplasmodialede plantes malgaches amde plantes malgaches amèères de la famille desres de la famille desGentianaceae et des MeliaceaeGentianaceae et des MeliaceaeThThèèse de Pharmaciese de PharmacieLLääetitiaetitia MorinMorinLe 18 dLe 18 déécembre 2006cembre 2006
  28. 28. 28SSéélection des Planteslection des Plantes àà éétudiertudierTachiadenus longiflorusTachiadenus longiflorus(Gentianaceae)(Gentianaceae)felampelanafelampelana ouou kifelapelanakifelapelana( celle qui a de jolies fleurs)( celle qui a de jolies fleurs)SSéélectionnlectionnéée sur la base dese sur la base desrenseignements ethnobotaniquesrenseignements ethnobotaniquesUtilisUtiliséée contre la fie contre la fièèvre (vre (tazotazo ououtazomokatazomoka en malgache)en malgache)
  29. 29. 29PlantesPlantes éétuditudiééesesTachiadenus carinatusTachiadenus carinatus(Gentianaceae)(Gentianaceae)Elle nElle n’’est pas utilisest pas utiliséée contre lee contre le«« tazotazo »»SSéélectionnlectionnéée sur la base de lae sur la base de lachimiotaxonomiechimiotaxonomie
  30. 30. 30PlantesPlantes éétuditudiééesesExacum quinquenerviumExacum quinquenervium(Gentianaceae)(Gentianaceae)mamoahelymamoahely ( celle qui fructifie en( celle qui fructifie enéétant petite)tant petite)UtilisUtiliséée contre lee contre le «« tazotazo »»
  31. 31. 31PlantesPlantes éétuditudiééesesMalleastrum gracileMalleastrum gracile(Meliaceae)(Meliaceae)AndriamagnamoraAndriamagnamoraUtilisUtiliséée contre lee contre le «« tazotazo »»
  32. 32. 32Plante antipaludique de rPlante antipaludique de rééfféérencerenceArtemisia annuaArtemisia annua((AsteraceaeAsteraceae))Fournie gracieusementFournie gracieusementpar la socipar la sociééttéé BionexxBionexx
  33. 33. 336 g de mat6 g de matéériel vriel vééggéétal + 40 ml dtal + 40 ml d’’eau distilleau distillééeeEbullitionEbullition pendant 5 minpendant 5 minLaisser refroidir 1hLaisser refroidir 1h àà temptempéérature ambianterature ambianteCentrifugations puis filtrationCentrifugations puis filtrationSSééchage dchage d’’1 ml du d1 ml du déécoctcoctéé (estimation quantit(estimation quantitéé de matide matièère)re)Filtration stFiltration stéérilisante du reste de drilisante du reste de déécoctcoctéé sous hottesous hotteDilutions en cascade (6 concentrations dDilutions en cascade (6 concentrations d’’extraits de plantes)extraits de plantes)PrPrééparation des dparation des déécoctcoctééss
  34. 34. 34Points importants :Points importants :Entretenir quotidiennement les culturesEntretenir quotidiennement les culturesEviter les contaminations (bactEviter les contaminations (bactééries ou champignons)ries ou champignons)Surveiller les charges parasitairesSurveiller les charges parasitairesRespecter les bonnes pratiquesRespecter les bonnes pratiquesde laboratoirede laboratoireCulture continue deCulture continue de Plasmodium falciparumPlasmodium falciparum
  35. 35. 35Test de sensibilitTest de sensibilitéé sur 2 souches :sur 2 souches :P. falciparumP. falciparum FCM29FCM29 (r(réésistantsistant àà la chloroquine)la chloroquine)P. falciparumP. falciparum 3D7 (sensible3D7 (sensible àà la chloroquine)la chloroquine)MMééthode isotopiquethode isotopiqueBasBaséée sur le sur l’’inhibition de linhibition de l’’incorporation de lincorporation de l’’hypoxanthinehypoxanthine trititritiééeeConditions du testConditions du testSynchronisation au sorbitolSynchronisation au sorbitol àà 5%5%Test antiplasmodial in vitroTest antiplasmodial in vitro
  36. 36. 36RRéépartition sur la plaque 96 puitspartition sur la plaque 96 puitsRPMI-1640 glucoséPuits TémoinT(extrait aqueux brut)(extrait aqueux brut)(extrait aqueux brut)Plante A. fruitsPlante A. tigesPlante A. racinesHTS1S1TS1S1TS1S1GTS2S2TS2S2TS2S2FS3S3S3S3S3S3S3S3S3ES4S4S4S4S4S4S4S4S4DS5S5S5S5S5S5S5S5S5CTS6S6TS6S6TS6S6BA121110987654321
  37. 37. 37Comptage de la radioactivitComptage de la radioactivitéé((cpmcpm)) àà ll’’aide du compteuraide du compteurMicrobetaMicrobetaCalcul desCalcul des CI50CI50(concentration inhibitrice(concentration inhibitrice50%)50%)Incubation des plaquesIncubation des plaquespendant 24 hpendant 24 h àà 3737°°C;C;atmosphatmosphèère humidere humidemicroamicroaéérophilerophileCongCongéélationlation--ddéécongcongéélationlation desdesplaquesplaquesCollecte des parasites sur filtreCollecte des parasites sur filtreen fibre de verreen fibre de verre
  38. 38. 38Illustration des résultats de test antiplasmodialavec les extraits de plantesDécocté de feuilles de Artemisia annua contre la souchechloroquinorésistante Plasmodium falciparum FCM29956613,48966291,74937550,877317860,433537350,22652080,110,0055150*Inhibitionde croissance de parasiteen 24 h (%)Moyenne deradioactivité(coups/min)Concentration de l’extrait(en µg/ml dans le puits)CI50
  39. 39. 39Inhibitionde croissance de parasiteen 24 h (%)Moyenne deradioactivité(coups/min)Concentration de l’extrait(en µg/ml dans le puits)9414081418,7872685709,4676375354,73711717177,3191493888,7221446444,30185570*Illustration des résultats de test antiplasmodialavec les extraits de plantesDécocté d’écorce de tiges de Malleastrum gracile contre la souchechloroquinorésistante Plasmodium falciparum FCM29CI50
  40. 40. 40Activités anti-PlasmodiumExacum quinquenervium407,2374,6Fruits386,2359,8Racines504,1416,3TigesTachiadenus longiflorus422,0409,4Racines548,0474,7TigesArtemisia annua (référence)0,320,31FeuillesTachiadenus carinatus309,1350,6Fruits651,8540,0Racines512,0627,1Tiges276,1280,2Ecorce de tiges445,4475,8BranchesMalleastrum gracileP. falciparum 3D7P. falciparum FCM29Plantes testéesMoyenne des CI50 (µg/ml)x900
  41. 41. 41ActivitActivitéé antianti--PlasmodiumPlasmodium des fractions obtenuesdes fractions obtenuesàà partir des extraits aqueux des plantes testpartir des extraits aqueux des plantes testééesesParasite utilisParasite utiliséé ::Plasmodium falciparumPlasmodium falciparum FCM29 (FCM29 (chloroquinorchloroquinoréésistantsistant))
  42. 42. 42Obtention des fractionsObtention des fractions àà partirpartirdes extraits aqueuxdes extraits aqueuxCulture deP. falciparumTestanti-PlasmodiumDDéécoctcoctééssEvaluationde l’activitéantiplasmodialeextraitsextraitsàà fractionnerfractionnerFractionsFractionsChromatographieChromatographieColonne de chromatographieCuve de CCM
  43. 43. 43Front de solvantLigne de dépôtAE/MeOH/H2O77/15/8Plante XT A B C D E FUV à 365nmUV à 254nmAcide sulfurique 50%Regroupement des fractionsRegroupement des fractions mmééthanoliquesthanoliques similaires obtenuessimilaires obtenues àà partir despartir desextraits aqueuxextraits aqueuxA et B fraction F1C et D fraction F2E et F fraction F3
  44. 44. 442424> 100> 100F2F2--MeOH sans tanninsMeOH sans tannins2626> 100> 100F2F2--MeOHMeOH3030> 100> 100F1F1--MeOH sans tanninsMeOH sans tannins1919> 100> 100F1F1--MeOHMeOH4949> 100> 100DichloromDichloromééthanethane3636> 100> 100HexaneHexaneFractionsFractions504,1504,1 ±± 112.9112.9Extrait aqueux brutExtrait aqueux brutàà 100100 µµg/ml (%)g/ml (%)((µµg/ml)g/ml)Produits testProduits testééssInhibition maximaleInhibition maximaleCI50CI50ActivitActivitéés antis anti--PlasmodiumPlasmodium des fractions obtenuesdes fractions obtenues àà partir dupartir duddéécoctcoctéé de tiges dede tiges de Exacum quinquenerviumExacum quinquenervium
  45. 45. 45Que pouvonsQue pouvons--nous tirer de cettenous tirer de cette éétude ?tude ?Les extraits des quatre plantes malgaches sLes extraits des quatre plantes malgaches séélectionnlectionnéées etes ettesttestéées nes n’’ont pas dont pas d’’activitactivitéé antiplasmodialeantiplasmodialePourtant les Meliaceae et les Gentianaceae sont aussi connues poPourtant les Meliaceae et les Gentianaceae sont aussi connues poururleurs vertus antipaludiques dans dleurs vertus antipaludiques dans d’’autres paysautres paysKhayaKhaya grandifoliagrandifolia (Meliaceae), utilis(Meliaceae), utiliséée au Cameroune au CamerounAzadirachtaAzadirachta indicaindica (Meliaceae)(Meliaceae)Mais extraction avec des solvants organiques.Mais extraction avec des solvants organiques.
  46. 46. 46Que pouvonsQue pouvons--nous tirer de cettenous tirer de cette éétude ?tude ?Nos rNos réésultats ne justifient pas lsultats ne justifient pas l’’utilisation des plantesutilisation des planteséétuditudiéées pour traiter le paludismees pour traiter le paludisme«« TazoTazo »» ddéésigne plutôtsigne plutôt «« la fila fièèvrevre »»Donc ces plantes pourraient soitDonc ces plantes pourraient soit-- agiragir sur la fisur la fièèvrevre, activit, activitéé antipyrantipyréétiquetique-- ou agirou agir sur dsur d’’autres pathogautres pathogèènesnes pouvant donner des maladiespouvant donner des maladiesdont les signes cliniques comprennent la fidont les signes cliniques comprennent la fièèvrevre
  47. 47. 47Que pouvonsQue pouvons--nous tirer de cettenous tirer de cette éétude ?tude ?Pour notre laboratoire d’accueil,nous avons contribué àll’é’établissement de proctablissement de procééduresdurespour tester les décoctés des plantesdites « antipaludiques »Inutile (perte de temps etInutile (perte de temps etdd’’argent) de fractionner lesargent) de fractionner lesextraits aqueux avec desextraits aqueux avec des CI50>CI50>1010µµg/mlg/ml
  48. 48. 48CCHHIIMMIIEEEthnobotanique,Ethnobotanique,taxonomietaxonomieSSéélection de plantelection de planteTest antiTest anti--PlasmodiumPlasmodiumTest de cytotoxicitTest de cytotoxicitéé in vitroin vitroTest antipaludiqueTest antipaludique in vivoin vivo (souris)(souris)Autres modAutres modèèlesles (inhibition de la(inhibition de lapolympolyméérisation de hrisation de héématine, stadematine, stadehepatiquehepatique……))PlantesPlantesBiologieBiologie ((efficacité? Innocuité?)Chercher des molChercher des moléécules actives = cribler un grand nombrecules actives = cribler un grand nombrede plantes, criblagede plantes, criblage àà haut dhaut déébit, etbit, et éélargir les testslargir les testsbiologiquesbiologiquesPerspectivesPerspectives ……
  49. 49. 49Conclusion gConclusion géénnééralerale
  50. 50. 50DDéécouverte de nouveaux mcouverte de nouveaux méédicaments : processus long et cherdicaments : processus long et cher
  51. 51. 51Travaux pratiquesTravaux pratiquesTest de chimiosensibilitTest de chimiosensibilitéé in vitro pourin vitro pourll’é’évaluation de la sensibilitvaluation de la sensibilitéé dede PlasmodiumPlasmodiumfalciparumfalciparum aux extraits de plantesaux extraits de plantesMarie Ange Rason, Laetitia Morin, Michel RatsimbasonMarie Ange Rason, Laetitia Morin, Michel Ratsimbasonet Milijaona Randrianarivelojosiaet Milijaona RandrianarivelojosiaAtelier PaludismeAtelier Paludisme –– 5eme5eme ééditiondition19 F19 Féévrier au 30 Mars 2007vrier au 30 Mars 2007

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