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Raymond TABUE
Entomologiste Médical
PNLP Cameroun
Elisabeth RAVAOARISOA
Institut Pasteur de Madagascar
27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
EVALUATION
par les FACILITATEURS
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Raymond TABUE
Entomologiste Médical
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27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
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27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
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27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
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27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
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Diagnostic Test. The Journal of infectious diseases 2005,192: 870-877.
 Berwal R. et al. Plasmodium falciparum: Enchanced soluble expression,
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Experimental Parasitology 2008, 120: 135-141.
 Howard J.R. et al. Secretion of a Malarial Histidine Rich Protein (PfHRP-II)
from P. falciparum infected erythrocytes. The Journal of Cell Biology 1986, 103: 1269-
1277.
 Makler M.T. et al. Lactate dehydrogenase and the diagnosis of malaria.
Parasitology Today 1998, 14: 376-377.
 Mayxay M. et al. Persistence of Plasmodium falciparum HRP-2 in successfully
treated acute falciparum malaria Transactions of The Royal Society Of Tropical Medicine
And Hygiene 2001, 9 5: 179-182.
 Lee N. et al. Effect of sequence variation in P. falciparum Histidine Rich Protein
II on binding of specific monoclonal antibodies: implication of Rapid Diagnostic
Tests for Malaria. Journal of Clinical Microbiology 2006, 2773-2778.
 Talman A.M. et al. Evaluation of the intra-and inter-specific genetic variability
of Plasmodium Lactate déhydrogenase. Malaria Journal 2007, 6: 140-146.
27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
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Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium

  • 1. Raymond TABUE Entomologiste Médical PNLP Cameroun Elisabeth RAVAOARISOA Institut Pasteur de Madagascar 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009 EVALUATION par les FACILITATEURS
  • 2. Adressez vos questions ou commentaires à : atelier.paludisme@pasteur.mg Bonne lecture !
  • 3. Raymond TABUE Entomologiste Médical PNLP Cameroun Elisabeth RAVAOARISOA Institut Pasteur de Madagascar 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009 EVALUATION par les FACILITATEURS
  • 4.  Du gène à la protéine  Histidine Rich Protein II (HRP-II)  Expression  Séquence  Plasmodium Lactate Deshydrogenase (pLDH)  Expression  Séquence  Polymorphisme intra-spécifique de HRP-II  Polymorphisme inter-spécifique de pLDH  Conclusion Mots clés: Gène, polymorphisme, HRP-II, pLDH, diagnostic, espèce 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 5. Gène: Un gène est une séquence d‘Acide DésoxyriboNucléique (ADN) qui spécifie la synthèse d'une chaîne de polypeptide ADN ARNm Protéine Transcription Traduction Inactivation de la protéine Augmentation de l’efficacité de la protéine ADN Mutation (Insertion, Délétion,Substitution) Phase de lecture respectéeDécalage de phase de lecture Mutation silencieuse Mutation non silencieuse 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 6.  Utilisation fréquente de HRP-II et pLDH en Test de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme: Immunocapture des antigènes circulants Système anticorps capture- révélation  TDR d’une grande utilité dans la prise en charge du paludisme dans les zones rurales sans microscopie.  Polymorphisme des antigènes cibles affecte la sensibilité des tests? 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 7.  Expression (Howard J. 1986, Mayxay M. 2001) : Spécifique de Plasmodium falciparum Protéine abondante Expression à tous les stades asexués Demi-vie élevée (environ 10 jours)  Séquence (N° accession Swiss-Prot: sp|P05227|HRP1_PLAFA ): Poids moléculaire 72 Kda 35% Histidine, 40% Alanine et 12% Aspartate 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 8.  Expression (Makler M.T. et al. 1998, Berwal R. et al. 2008): Pan- spécifique Enzyme abondante Demi-vie courte (2,5 jours environ)  Séquence LDH présent chez l’homme pLDH diffère de la LDH humaine: épitope unique, utilisation cofacteur APAD (Pyridine Adénine Dinucléotide) 296-310 acides aminés selon l’espèce plasmodiale Région C-terminale très conservée. N d’accession Swiss-Prot Q76NM3|Q76NM3_PLAF7 P. falciparum Q6JH30|Q6JH30_PLAVI P. vivax Q6JH31|Q6JH31_PLAMA P. malariae Q6JH32|Q6JH32_9APIC P. ovale 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 10.  Evidence 1: Baker J. et al. 2005 Collecte de 75 échantillons provenant de 19 pays. Extraction, amplification et génotypage, évaluation du nombre 14 séquences répétitives de Pf HRP-II Etude comparative avec les TDR actuels Le nombre des répétitions affecte la sensibilité des tests basés avec HRP-II Diversité génétique varie d’une région à une autre 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 11.  Evidence 2: Lee N. et al. 2006 46 échantillons provenant de 4 pays, 8 souches de P. falciparum Evaluation de 4 anticorps monoclonaux Extraction d’antigène des isolats (analyse par Dot et Western blot, épitope mapping par ELISA) Substitution au niveau des épitopes, diminution de la reconnaissance des anticorps La fréquence des épitopes diffère d’un pays à un autre 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 12. F1:Séquence de réference FCCI/HN F:Seuence des isolats P. falciparum M:Sequence des isolats de P. .malariae O1:Séquence des isolats de P. ovale O2 et O3: Séquences des isolats de P. ovale V: Séquence de la souche de référence de P. vivax Y: Séquence de la souche de référence de P. berghei C: Séquence de la souche de référence de P. chabaudi Collection des 8 espèces plasmodiales de part le monde Extraction, amplification, Nested- PCR et génotypage Variabilité intra-spécifique n’affecte pas l’efficacité des TDR pan-spécifiques  Evidence: Talman A. et al. 2007 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 13. Polymorphisme HRP-II: faux-négatifs  Criblage des régions conservées, épitopes universellement connus, synthèse d’anticorps monoclonaux spécifiques à ces épitopes  Ou utilisation d’anticorps monoclonaux qui ne sont pas affectés par la variation génétique  Combinaison des anticorps reconnaissant différents épitopes 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 14.  pLDH très conservée et élimination rapide Couplage avec HRP-II pour une meilleure sensibilité  Développement d’une nouvelle génération de TDR basé sur pLDH spécifique de P. vivax couplé avec pLDH spécifique de P. falciparum Fiabilité du diagnostic différentiel? Epitope(s) cible(s)? Zone géographique cible? 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 15.  Il en ressort que le polymorphisme est l’un des facteurs contribuant à la sensibilité des test, il est donc nécessaire de: - Développer des tests de TDR sensibles à toutes les régions - Améliorer la bonne stabilité des TDR à la température - Améliorer les bonnes pratiques de laboratoire  Avec le programme de lutte visant l’élimination du paludisme (P. falciparum), il convient de: - Développer des tests différentiels de P. vivax (meilleure prise en charge, limitation des résistances et diminution du risque de recrudescence à P. vivax ) 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  • 16.  Baker J. et al. Genetic diversity of P. falciparum Histidine Rich Protein –II (PfHRP-II) and its effect on the performance of PfHRP-II based Rapid Diagnostic Test. The Journal of infectious diseases 2005,192: 870-877.  Berwal R. et al. Plasmodium falciparum: Enchanced soluble expression, purification and biochemical characterization of lactate dehydrogenase. Experimental Parasitology 2008, 120: 135-141.  Howard J.R. et al. Secretion of a Malarial Histidine Rich Protein (PfHRP-II) from P. falciparum infected erythrocytes. The Journal of Cell Biology 1986, 103: 1269- 1277.  Makler M.T. et al. Lactate dehydrogenase and the diagnosis of malaria. Parasitology Today 1998, 14: 376-377.  Mayxay M. et al. Persistence of Plasmodium falciparum HRP-2 in successfully treated acute falciparum malaria Transactions of The Royal Society Of Tropical Medicine And Hygiene 2001, 9 5: 179-182.  Lee N. et al. Effect of sequence variation in P. falciparum Histidine Rich Protein II on binding of specific monoclonal antibodies: implication of Rapid Diagnostic Tests for Malaria. Journal of Clinical Microbiology 2006, 2773-2778.  Talman A.M. et al. Evaluation of the intra-and inter-specific genetic variability of Plasmodium Lactate déhydrogenase. Malaria Journal 2007, 6: 140-146. 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009