Le document traite des colorations spéciales en bactériologie, en se concentrant sur la coloration de Gram, le bleu de méthylène, l'encre de Chine et la coloration de Ziehl-Neelsen. Chaque méthode est décrite en termes d'utilité, de principe et d'interprétation pour différencier et visualiser les bactéries selon leur morphologie et leurs propriétés spécifiques. Ces techniques permettent de classer les bactéries en fonction de leur réaction aux colorants, facilitant ainsi leur identification.

1. LES COLORATIONS SPECIALES EN BACTERIOLOGIE
 1. COLOTION DE GRAM
 Utulité
Elle permet de différencier les bactéries Gram + et Gram – en mettant en évidence les propriétés de la paroi
bactérienne:la morphologie des bactéries et leur mode de groupementet pour les distingue et classifie; elle nous
permet aussi de donner une information rapide, facile et bon marché sur les bactéries présentes dans un produit ou
un milieu, tant sur le type que sur la forme
 Principe
La coloration de Gram est fondée sur l'action successive d'un colorant d'aniline, le cristal violet, d'iode puis d'un
mélange d'alcool et d'acétone. Dans un premier temps, le colorant pénètre dans la paroi et le cytoplasme. Dans un
second temps, l'iode réagit avec le colorant et le rend insoluble

2. INTERPRETATION
 La coloration de gram permet en colorant l’intérieur de la bactérie de différencier sur un
échantillon selon leur forme: paires; groupes; chaines…et leur affinité pour le
colorant ;grâces à ces dernier on affine la caractérisation du type de bactéries à gram positif
coloré en rose ou bleu et gram négatif coloré rouge et leur morphologie en bacilles ou
coques

3. COLORATION AU BLEU DE METHYLENE
 Utilité
La coloration au bleu de méthylène est une coloration simple où un seul colorant est utilisé pour
souligner des structures particulières dans l'échantillon, la forme (la taille et la disposition des
bactéries). Les organismes d'un échantillon seront de la même couleur, même si l'échantillon contient
plus d'un type d'organisme.
 Principe
Étant donné que les cellules ont généralement des parois cellulaires chargées négativement, les
chromophores des colorants basiques, chargées positivement, ont tendance à coller aux parois
cellulaires, ce qui en fait des taches positives.
 Interpretation
Les structures colorables apparaissent bleues, la coloration permet de détecter la morphologie de ces
structures, leur mode de groupement et dans certains cas le type cellulaire

4. COLORATION AU BLEU DE METHYLENE

5. COLORATION A L’ENCRE DE CHINE
UTILITE
Le but principal de la coloration à l’encre de chine est d'étudier la forme morphologie, la taille
et la disposition des cellules bactériennes difficiles à colorer ou trop délicats pour être fixés à la
chaleur elle est la seule technique de coloration dans laquelle les cellules bactériennes ne sont
pas colorées mais elles sont rendues visibles sur un fond
Principe
La nécessite d’un colorant acide tel que l'encre de Chine ou la Nigrosine ;la coloration
négative est une coloration acide. Cela signifie que le colorant cède facilement un ion
hydrogène (proton) et le chromophore du colorant devient chargé négativement. Étant donné
que la surface de la plupart des cellules bactériennes est chargée négativement, la surface
cellulaire repousse le colorant.

6. COLORATION A L’ENCRE DE CHINE
Les bactéries apparaîtront sous forme de points clairs sur un fond sombre.

7. COLORATION DE ZIEHL NEELSON
1. A.UTILITE
La méthode de choix pour la bacilloscopie des frottis d’expectoration est la coloration de Ziehl-Neelsen (ZN)
car elle permet de différencier les bactéries acido-résistantes et non acido-résistantes et elle est la seule à
fournir régulièrement de bons résultats sans nécessiter un équipement spécial
2. Principe
La présence d'acides mycoliques dans les parois cellulaires des bactéries acido-alcoolo-résistantes est la base
cytologique de cette coloration. L'acide mycolique donne à ces bactéries une plus grande affinité pour le
colorant primaire et une résistance à la décoloration par une solution d’alcool-acide
La fuchsine est utilisé comme colorant primaire parce qu'elle est liposoluble et pénètre la paroi cellulaire
cireuse.La coloration est encore améliorée en chauffant jusqu’à émission de vapeur la préparation pour faire
fondre la cire et permettre au colorant de se déplacer dans la cellule.
Le mélange acide-alcool est utilisé pour décolorer les cellules non acido-alcoolo-résistantes. Une contre-
coloration, telle que le bleu de méthylène, est ensuite appliquée. Une fois terminées, les bactéries acido-alcoolo-
résistantes sont colorées en rouge-violet sur un fond bleu.

8. INTERPRETATION DE ZIEHL
Les BAAR sont colorés en bâtonnets rouge et les non BAAR en bleu

9. Références
 Laboratory manuel and workbook in mibrobiology applications to patient care 7th edition
 Microbiologia Ambiental
 Himedia: Methylene blue staining
 Livre: Clinical microbiology procedures Handbook 4e edition
 Livre: Texte book of diagnostic microbiology 4th ED
 Bactériologie médicale