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Topo3
Le document décrit les méthodes d'identification bactérienne à partir de cultures, incluant l'analyse morphologique, culturale et biochimique. Il détaille également la réalisation d'un antibiogramme pour évaluer la sensibilité des bactéries aux antibiotiques, ainsi que les tests de résistance. Des démonstrations pratiques sont également prévues pour illustrer les techniques de laboratoire utilisées.
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- 1. Identification bactérienne àpartir d’une culture de 18 à 24 heures Antibiogramme TP 3 (DCEM1) Section de Microbiologie Département des Sciences de Base B Faculté de Médecine de Tunis
- 2. IDENTIFICATION CARACTÈRES: 1- MORPHOLOGIQUES 2- CULTURAUX 3- BIOCHIMIQUES
- 3. Caractères culturaux • Tailleet aspect des colonies sur la gélose, pigmentation • L’exigence nutritive des bactéries en culture
- 4. Caractères culturaux • Hémolyse sur GS β α γ
- 5. Caractères morphologiques • Etatfrais : forme & mobilité • Coloration de Gram : – Forme des bactéries : bacille ou cocci – Gram + ou – – Mode regroupement (cocci ++)
- 6. Caractères biochimiques • Typerespiratoire • Caractères biochimiques de base Catalase (+ Staphylococcus) Oxydase (BGN)
- 7. BGN 1er test d’identification = cytochrome oxydase Positif Négatif -BGN non fermentaires -Entérobactéries - Vibrio/ Aeromonas - Acinetobacter Type respiratoire AAF Aerobie strict AAF Aérobie strict Vibrio/Aeromonas Pseudomonas Entérobactéries Acinetobacter Identification biochimique complète : galerie classique ou système Api
- 8. Cocci à Grampositif Test catalase Négatif Positif Streptocoques Staphylococcaceae Entérocoques
- 9. Cocci à Grampositif en amas catalase + Croissance milieu hypersalé sélectif avec ou sans virage (Milieu Chapmann) Staphylococcaceae Plusieurs tests Le plus important : Coagulase Négatif Positif = S. aureus Staphylocoques à coagulase négative Galerie d’identification Api Staph
- 10. Cocci Gram positifcatalase négative Exigent Non exigent Absence de croissance en milieux hostiles Croissance en milieux hostiles : NaCl 6,5% , bile esculine Hémolyse Béta Alpha Enterococcus Sensibilité à l’optochine Streptocoques groupables A, C, B, G, F … Galerie d’identification biochimique S S.pneumoniae R Autres streptocoques non groupables Sérogroupage de Lancefield Galerie identification : Api
- 11. ETUDE DE LASENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES ANTIBIOGRAMME
- 12. MÉTHODE DE DIFFUSION = Antibiogramme Conditions standardisées +++ • Milieu de culture (nature et épaisseur) : gélose Mueller Hinton (MH) • Suspension bactérienne (inoculum) • Disques d’antibiotiques : concentration d’antibiotique bien déterminée • Choix des molécules par famille d’antibiotique +++ Déduire les mécanismes de résistance Suivre les Normes proposés par les Comités d’experts • Ensemencement par écouvillonnage • Déposer les disques à la surface • Incuber 18 à 24 h à 37°C
- 13. Antibiogramme Culture pure de 24h Préparer inoculum Ensemencer par stries serrées dans trois sens en tournant la boîte de 1/3 de tour chaque fois
- 14. ANTIBIOGRAMME 3cm Diffusion de l’antibiotique
- 15. Résultat après 24h à 37°C
- 16. ANTIBIOGRAMME 24h incubation 37°C Lecture et interprétation des diamètres d’inhibition: comparer aux valeurs de référence (d et D) S–I-R
- 17. Lecture brute :insuffisante Parfois ne permet pas d’évaluer correctement la sensibilité de certains antibiotiques vis-à-vis de certaines espèces bactériennes Tests de dépistage et tests complémentaires Lecture interprétative de l’antibiogramme ++ But : rechercher une résistance insuffisamment exprimée à l’antibiogramme Transformé un résultat S en I ou R Risque échec thérapeutique
- 18. Pneumocoque de sensibilitédiminuée aux pénicillines : PSDP PSDP = Résistance croisée entre les β-lactamines à des degrés variés Oxacilline< 26mm Faire CMI β-lactamines E-test +++
- 19. β-lactamase à spectreétendue : BLSE • Essentiellement, les entérobactéries : Klebsiella et E. coli … • Test double synergie ++ Image en bouchon de champagne Souche R à toutes β-lactamines sauf les céphamycines et les carbapénèmes
- 20. S. aureus résistantà la méticilline : SARM Céfoxitine R Résistance croisée à toutes les β-lactamines Oxacilline R
- 21. SALLE DE TP • 20 min : Présentation du topo à la salle de Staff • 10 min : Démonstration aspect des colonies sur différents milieux de culture • 20 min : Préparation de l’étalement pour la coloration de Gram Réalisation de la coloration de Gram Lecture au microscope optique (objectif 100) • 10 min : Réalisation des tests biochimiques : catalase et oxydase en démonstration • 10 min : réalisation d’un antibiogramme : démonstration (10min) • 20 min : Démonstration de certains phénotypes de résistances acquises aux antibiotiques (20min) PSDP BLSE SARM