tp

1. REPUBLIC ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
Ministère de L Enseignement supérieure et de la Recherche
Scientifique
Centre Universitaire Belhadj BOUCHAIB Ain Témouchent
Institue des Sciences et Technologie
Département de La Science de la Nature et de la Vie
Réaliser par :
 Merzouk chahrazed
 Saidi sara
Année Universitaire:2015/2016

2. Les bactéries lactiques appartiennent à un groupe des bactéries
bénéfiques, dont le trait commun est la production d’acide lactique.
Elle ont une activité antibactérienne due à une substance chimique
organique d’origine naturelle ou synthétique inhibant (bactériostatique)
ou tuant ( bactéricide) les bactéries pathogènes à faible concentration et
possédant une toxicité sélective
Dans se TP nous avons faire deux méthode de criblage des souches qui
signifier l'identification avec sélection
nous avons isolé deux souches lactiques, pour testé leur pouvoir acidifiant,
leur effet bactéricide et observé la zone des inhibition autours des cultures de
souche A ou B

3. i. Objectif de tp :
 Sélection des souches productrices des substances
antibactériennes .
 L'observation des zones de l'inhibition au toure des cultures.
 Apprenez les deux méthode de criblage des souche.
ii. Choix des souches :
 Souche à tester sont deux souches de bécteries lactiques (A et
B)
 Souche indicatrice (test) (C)

4. 1. criblage directe sur boit pour la production d’antibiotique :
1.1. Matériel :
1. Deux Souchede bactéries lactique (A et B) milieu gélosé.
2. milieu Muller-Hinton (semi solide) .
3. soucheindicatrice C.
4. bec bunsen.
5. pépettes pasteure.
6. Incubateur.

5. 1.2Protocol de méthode:
Ensemencement d'une
souche A etB sur milieu
gélosé et une Souche
inducatrice (C)
Souche indicatrice C
Ensemencementdans4ml de
milieuMuller-Hinton
Coulerla gélose molle sur
Les biotesensemencées
déjà A et B
Incubation 37°c /24à48
Observation
Incubation desboite une
nuit à 37°c /24à48

6. 1.3 Résultat:
 On observe une croissance de la bactérie souche(C) au tour de la boite
Pétré et au milieu
 il n ya pas une zone d'inhibition au tour de souchelactique B
 L'apparition d'une petite zone d'inhibition au tour de souche lactique A
1.4 Interprétation :
L'apparition d'une zone de inhibition autour de souche A indiquer que la souche A elle
produit des substances antibactériennes inhibitrices (antibiotique) qui inhibe la croissance au
tue la souche indicatrice (c) qui est sensible.
L'absence de zone d'inhibition autour de souche B indiquer que la souche B elle n'a pas
produit des substrats antibectienne.
1.5Remarque :
La condensation des colonies au milieu de boite pétré indique la présence d'un
contamination qui faussait nous résultat.

7. 2 .Criblage par analyse du pouvoir bactériostatique de surnageant de culture :
2.1 Matériel:
1. Pré -culturede soucheA et B.
2. boite de pétré coulé par milieu Müller-Hinton souche(c).
3. disque de papier buvarde.
4. centrifugeur.
5. Incubateur.

8. 2.2Protocol de méthode:
Ensemence une souche C
dans la boitde pétri par
inondation
Séchage 20 min 37 °c
Centrifugationdespré-cultures
AetB (6000 T pendent 10 min )
Surnagent BSurnagent A
A B
C
A
B
Incubation
24 h à37°C
Un disque de papier
buvard impégné dans
le surnaget A
Un disque de papier
buvard impégné dans
le surnaget B
déposerlesdisques
sur la boite c

9. 2.3Resultat :
 On observe une croissancede la souche(C) au milieu de la boite Pétré
 il n ya pas une zone d'inhibition au tour de disque de papier buvard
imprégné dans le surnagent de souche lactique B
 L'apparition d'une petite zone d'inhibition au tour de disque de papier
buvard imprégné dans le surnagent de souchelactique A
2.4Interpritaion:
 L'apparition d'une zone de inhibition autour de soucheA indiquer que la
souche A elle produit des substances antibactériennes inhibitrices
(antibiotique) qui se trouvent dans le surnagent ,inhibe la croissance au
tue la soucheindicatrice (c) qui est sensible.
 L'absence de zone d'inhibition autour de souche B indiquer que la souche
B elle n'a pas produit des substrats antibactériennes et leur surnagent ne
contient pas des substances antibactériennes.

10. III.Milieu Mueller-Hinton :
La gélose Mueller-Hinton est une gélose riche pour la réalisation de
l'antibiogramme standard
 Leur Composition:
 infusion de viande de bœuf : 300,0 ml
 peptone de caséine : 17,5 g
 amidon de maïs : 1,5 g
 agar : 17,0 g
 pH = 7,4
 Leur intérêt:
Nous avons utilisé le milieu de Mueller Hinton car il est reconnu par tous les
experts comme étant le milieu de référence pour l’étude de la sensibilité des
germes aux antibiotiques.

11. Les deux méthodes décrites pour la détection de souches
Lactiques productrices de bactériocines sont basées sur le principe que
ces substances protéiques peuvent diffuser dans un milieu de culture
solide ou semi solide qu’on inocule préalablement avec une souche
cible. La production de bactériocine est détectée par le pouvoir
inhibiteur du filtrat du micro-organisme testé sur la croissance du
germe cible.