Présentation de Samiha Ben Hadj Ali, BEN HADJ ALI Samiha Laboratoire de Bactériologie, 16 Février 2017

1. BEN HADJ ALI Samiha
Laboratoire de Bactériologie,
Institut Pasteur de Tunis
Le 16 Février 2017

2. Buts
Protection:
 du personnel
 des personnes en dehors du laboratoire
 de l'environnement

3. Introduction
La majorité des contaminations recensées par Sulkin et Pike En
1978 sont dues :
 aux bactéries : 42% dont 71 décès sur 1701 cas
Aux virus : 29 % dont 55 décès sur 1179 cas
Les infections les plus fréquentes contractées au laboratoire de
Microbiologie sont (Pike 1978):
Brucellose
Fièvre Q
Hépatite
Fièvre typhoïde
Tularémie, Tuberculose …..

4. Contaminations au laboratoire
dues à divers micro-organismes
(Sulkin puis Pike, 1978-CNRS)
Type de
Micro-organisme
Nombre de cas
recensés(%)
Nombre
de décès
Nombre
d’agents
biologiques
Nombre de
cas publiés
Bactéries
Virus
Rickettsies
Champignons
Chlamydiae
Parasites
1704 (42 %)
1179 (29 %)
598 (14 %)
354 (09 %)
128 (03% )
116 (03 %)
71
55
25
5
10
2
37
85
8
9
3
17
744
915
381
313
71
74
Total 4079 (100%) 168 ( 4.1 %) 2498

5. Infections les plus fréquentes
contractées au laboratoire de Microbiologie
(Pike 1978-CNRS)
Infections Nombre de cas Nombre de décès
Brucellose
Fièvre Q
Hépatites
Fièvre typhoïde
Tularémie
Tuberculose
Dermato mycoses
Encéphalite équine du Venezuela
Psittacose
Coccidioimycose
426
280
268
258
225
194
162
146
116
93
5
1
3
20
2
4
0
1
10
2

7. Contaminations /Infections
comment et pourquoi ?
Tout simplement soit:
Qu’aucunes directive d’hygiène n’ont été entreprises au sein
du laboratoire.
Ou les directives d’hygiène ne sont pas respectées par le
personnel.
 Qui est responsable de les instaurer ?
 Y’a t-il une procédure qualité qui recense tous les micro-organismes
pathogènes utilisés à l’IPT et les moyens de prévention à appliquer en cas
d’accident ?
 Y’a-t-il une procédure qui recense les souches multi-résistantes
( bactéries , BK, et virus … ) et la manière d’éliminer leur déchets :
très hauts risques infectieux dont la thérapie est difficile à trouver!!!
 Y’a-t-il un audit ou une inspection pour évaluer les dysfonctionnements au
niveau des infrastructures mises en place dans les laboratoires?

8. 4 Niveaux de Sécurité Biologique (BSL):
fonction de la pathogénicité
des micro-organismes utilisés
1- non pathogènes
2- modérément pathogènes
3- causant des maladies sévères ou potentiellement létales (HIV,
Bacillus anthracis)
4- risque élevé de transmission par aérosol et causant des
infections létales (EBOLA)
 Le Laboratoires de diagnostic microbiologique: BSL-2
( Biohazard Safety Level 2= Niveau de Sécurité Biologique 2)

9. Classification des niveaux de risques
établie selon:
 La pathogénicité du micro-organisme et sa virulence
 La résistance du micro-organisme dans l’environnement
- Chaleur, froid
- Dessiccation
- Antiseptiques
 Le mode de contamination
• Voie pulmonaire
• Voie digestive
• Voie cutanée et transcutanée
• Voie conjonctivale
 L’existence d’un traitement efficace ( difficile pour les multi-résistants !!)
• Préventif: vaccination
• Curatif: antibiotiques…

10. Risque infectieux :
inhérent à la situation
( micro-organismes pathogènes sont là malgré les contrôles existants )
Sécurité :
mesures à prendre face à un risque
quelles sont les mesures de sécurités
biologiques à mettre en place?

11. Mesures de sécurités biologiques
1. Infrastructures
2. Pratiques microbiologiques
3. Elimination des déchets
4. Hygiène du lieu de travail
5. Hygiène et prévention personnelle

12. 1. Infrastructures : Le local
Un panneau de risque biologique doit être suspendu sur
chaque porte d'accès des laboratoires.
L'accès au laboratoire est limité.
Portes et fenêtres des lieux de travail doivent être fermées
pendant le travail.
Utilisation d’une hôte à flux laminaire PS II : protection
du produit biologique et du manipulateur.

13. 2. Pratiques microbiologiques standards(1)
 Pas de pipetage à la bouche
 Utilisation de matériel jetable de préférence
 Aiguilles et seringues:
jetables et le recapuchonnage des aiguilles est
proscrit.

14. 2. Pratiques microbiologiques standards(2)
 Minimiser la production d’aérosols!
Lorsqu'il y a possibilité de production d'aérosols
entraînant un risque d'infection aérogène, la manipulation
d'échantillons doit s'effectuer sous un flux de sécurité de
classe II (PS II).
 Port de gants obligatoire pour éviter :
- Le risque de contact cutané avec du matériel infectieux,
une surface ou un équipement contaminés.
- Le risque d’un récipient ouvert contenant du sang ou un
autre liquide biologique.

15. 2. Pratiques microbiologiques standards(3)
 Désinfection des récipients d'échantillons dont l'extérieur
est souillé avant toute manipulation
 Contrôle de l'identité des micro-organismes de référence
utilisés.

16. Pratiques microbiologiques spéciales
Prélèvements respiratoires
ou de tissus
Production d'aérosols
potentiellement infectieux
(Exemple BK )
les multi-résistants PS3 ??
Manipulation sous un flux laminaire de classe II
PS2

17. Mesures de sécurité supplémentaires
pour le laboratoire des
mycobactéries(BK)
 Port des gants obligatoire pour toutes les manipulations de
cultures.
 Port d'une blouse à usage unique obligatoire
Cette blouse ne doit pas quitter le laboratoire de tuberculose.
Les blouses à usage unique doivent être jetées dans les
poubelles biologiques réservées à cet effet (sacs appropriés
dangereux).
Entrée du laboratoire restreinte au personnel autorisé.

18. 3. Elimination des déchets et classification
Les déchets sont classés en 4 groupes :
A. Déchets médicaux ne posant pas de problème, composition
similaire à celle des déchets urbains
B. Déchets spéciaux
1. Danger de contamination (contenant du sang,
des excrétions etc.….)
2. Danger de blessures inactivation des déchets contaminés
3. Médicaments périmés avant de les sortir des Laboratoires
4. Cytostatiques
C. Infectieux
D. Autres déchets spéciaux (chimiques, radioactifs…)

19. Déchets infectieux solides
• Cultures de microorganismes
ou de cellules
• Échantillons de patients,
reste d'analyse
• Objets ayant touchés des
échantillons (Tips de
pipetage de sérum, …)
Fermeture du sac avec
une attache zip
Dépôt dans les chariots
prévus à cet effet
Autoclavage

20. Déchets infectieux liquides
• Tubes de cultures
• Flacons de cultures
• Les Objets tranchants
Inactivation
chimique
(eau de Javel)
Evier

21. Déchets présentant un danger de blessure
• Aiguilles, lames et pipette Pasteur
• Objets tranchants
Incinération

23. 4- Hygiène du lieu de travail (2)
Place de travail:
responsable: personnel technique
- maintient de l'ordre
- nettoyage et désinfection après chaque travail ou à la
fin de chaque journée, et après chaque souillure par du
matériel viable.

24. 4. Hygiène du lieu de travail (3)
 Equipements: responsable: personnel technique
- Désinfection selon fiche technique
Un équipement devra être désinfecté avant de le
sortir du laboratoire (lors de changement de laboratoire,
ou réparation ou mise à la casse).
 Surfaces (sols et murs): responsable: service d’hygiène.
- Selon le plan d'hygiène
 En cas de présence d'insectes ou de rongeurs, faire
appel au service approprié pour leur élimination.
 Les animaux de compagnie sont interdits d'accès.

25. 5. Hygiène personnelle (1)
Port de la blouse fermée (ou autres vêtements de protection):
– obligatoire dans les lieux de travail!
– La blouse reste dans le laboratoire!!!

26. 5. Hygiène personnelle(2)
Il est interdit de manger, de boire, de fumer, de manipuler
des verres de contact, d’utiliser des produits cosmétiques ou
d’entreposer de la nourriture dans les lieux de travail.

27. 5. Hygiène personnelle (3)
Lavage/désinfection des mains
Il convient de se désinfecter (solution alcoolique) ou de se
laver (savon désinfectant) soigneusement les mains:
• à la fin de chaque opération de travail
• après le port de gant
• avant de quitter le laboratoire

29. Prévention personnelle (1)
• Vaccination contre les hépatites B:
hautement recommandée pour tout le personnel
• Vaccination contre le méningocoque:
recommandé pour le personnel des laboratoires de
diagnostique
• Vaccin contre la grippe:
recommandé
•Test à la tuberculine à l'engagement, puis à rythme annuel s'il
est négatif
(chaque année pour le personnel du labo de BK)
• Mise à jours des vaccins généraux (Tétanos …):
Ces contrôles devraient être faits par la Médecine du
Personnel lors de l'engagement

30. Prévention personnelle (2)
•Grossesse suspectée ou confirmée:
Informer le médecin du personnel ou/et le supérieur
responsable, afin que soient appréciés et discutés les
risques éventuels du poste de travail actuel.
Pourquoi ?
Pour protéger la biologie de la procréation et les futures
générations.

31. Ne sont pas autorisées pour les femmes
enceintes
(*: + 3 premiers mois d’allaitement)
 les manipulations du virus HIV, herpès simplex ou varicelle
*les manipulations de sang ou autres liquides biologiques HIV ou
HBV ou HCV positifs ou suspects de l’être.
 les manipulations de prélèvements déclarés infectieux .
 les manipulations d’agents bactériens* (tuberculose, listeria,
gonocoque), viraux (en l’absence d’immunité démontrée : CMV, virus
varicelle-zona, herpès, rougeole, rubéole, parvovirus B19) ou
parasitaire (toxoplasmose): l’évaluation doit être rigoureuse.
* Les activités avec des agents infectieux dans le cadre des
laboratoires de recherches doivent dans tous les cas être évalués avec
la Médecine du personnel.

33. Mesures en cas de contamination (1)
Contamination par du liquide??
(tube de bouillon de culture ou
récipient contenant un liquide
biologique cassé, etc.)
Contamination par contact??
(plaques de milieux de cultures qui
tombent par terre, échantillon clinique
qui tombe sur la surface de travail,
etc...)

34. Mesures en cas de contamination (2)
 Porter des gants
 Recouvrir de papier absorbant imbibé de
désinfectant. Eviter de verser le désinfectant
de haut(surtout pour les sprays), ce qui peut
engendrer des aérosols
 Laisser agir
 Éponger et jeter le matériel souillé dans
un conteneur adéquat (Ne jamais manipuler
du verre cassé directement avec les mains,
même gantées, mais utiliser une brosse et
une ramassoire,…)

35. Mesures en cas d'accident
 Mesures d'urgences
- Piqûre et blessures: laver immédiatement la partie lésée à
l'eau et au savon, la rincer abondamment et la désinfecter
(alcool ou Bétadine).
- Projections sur les muqueuses (bouche, yeux): rincer
abondamment avec du sérum physiologique ou à défaut de
l'eau du robinet.
 Conseil médical rapide
-Semaine, nuit, week-end et fériés: Tél d’urgence nécessaire.
 Déclarer l'accident
- Déclaration avec le responsable du service adressée à la
Médecine du personnel (obligation légale)

36. EXEMPLES DE DÉSINFECTANTS
SELON LES NORMES FRANÇAISES
AFNOR

37. Quelques désinfectants utilisés en France
(selon les normes françaises)
Stérilium (alcool, ammonium quaternaire):
désinfection des mains
Septochuv 2000 (alcool, ammonium
quaternaire):
désinfection des surfaces
Lysetol AF (amines)
désinfection des instruments (trempage)

38. Effets de ces désinfectants sur les
différents micro-organismes
Stérilium
mains
Septochuv
surfaces
Lysetol
instruments
Bactéries végétatives +++ +++ +++
Mycobactéries ++ +++ +++
Virus +++ +++ +++
Champignons +++ +++ +++
Spores - - ±

39. Les désinfectants de l’IPT

40. CONCLUSION
Un cadre légal est nécessaire et même obligatoire
 Etablissement d’ordonnances
– Ordonnance sur l'utilisation d’organisme en milieu
confiné.
– Ordonnance sur la protection des travailleurs contre les
risques liés aux micro-organismes.
– Ordonnance sur la protection de la maternité.
 Recommandations à instaurer:
– Prévention des maladies professionnelles dans les
laboratoires de microbiologie diagnostique.

41. CONCLUSION
 Prévention des atteintes à la santé lors des opérations de
désinfection.
 Prévention des maladies infectieuses transmises par voie
sanguine (AES).
Tuberculose dans le cadre professionnel: Risques et
prévention surtout avec la présence des souches multi-
résistantes( vaccin inefficace ?).
 Vaccination du personnel de santé.
 Allergie au latex pour certaines personnes.

42. Suggestions à l’équipe d’hygiène , comité
de sécurité et de santé du travail et aux
laboratoires de Microbiologie
Recenser et répertorier tous les micro-organismes
pathogènes utilisés et isolés à l’Institut Pasteur de Tunis
( Souches de références , isolats conservés….)
Etablir une procédure pour leur conservation et pour leur
élimination dans le but d’une bonne gestion du risque
infectieux.

43. Sensibiliser tout le personnel et surtout les ouvriers de
l’intérêt à porter pour l’inactivation avant d’éliminer les
déchets à risque infectieux (tri- entreposage et
autoclavage)
Et aux autorités: direction et ministères , d’allouer plus
de rigueur et surtout les moyens nécessaires
( autoclaves suffisants , tri, emballage, entreposage …)
pour bien les éliminer et inactiver leurs virulences car
notre sécurité et santé sont en jeu ( surtout pour les multi
résistants ).
 Tous les prélèvements biologiques en phase pré-
analytique sont inconnus donc on doit prendre les mêmes
directives d’hygiènes et précautions .

44. MERCI