Diagnostic mycologique dr benlaribi imane halima

1. DR. BENLARIBI IMANE HALIMA Pharmacienne praticienne spécialiste Assistante en parasitologie _ mycologie médicale Année: 2018/2019

2. INTRODUCTION Le diagnostic mycologique: Identification Culture Examen direct Prélèvement Collaboration clinicien/ biologiste

3. FICHE DE RENSEIGNEMENT • Identité du patient; • Adresse; • Profession; • Notion de voyage; • Contact avec les animaux; • Signes cliniques et paracliniques; • Signes radiologiques; • Antécédents médicaux; • Prise de traitement (antifongique ou autres).

4. PRELEVEMENT La qualité du prélèvement détermine la qualité du diagnostic.

5. PRELEVEMENT • Les modalités du prélèvement dépendent de la localisation des lésions • Les prélèvements: – Effectués au labo – Acheminés rapidement au labo – Conservés à +4°C.

6. PRELEVEMENT • Conditions: – Avant toute toilette – Avant traitement spécifique ou après une fenêtre thérapeutique: • 15 jours (ATF local) • 2-3 mois (ATF systémique, vernis ou une solution filmogène).

7. Matériel

8. Modalités du prélèvement • Lésions squameuses : grattage en périphérie des lésions.

10. Modalités du prélèvement • Lésions squameuses : grattage en périphérie des lésions. • Lésions suintantes/ Plaies: écouvillonner les lésions.

12. Modalités du prélèvement • Lésions squameuses : grattage en périphérie des lésions. • Plaies: écouvillonner les lésions. • Nodules: ponctionner avec une aiguille stérile, ou faire une biopsie • Pityriasis versicolor: scotch-test cutané

14. Modalités du prélèvement • Lampe de Wood

15. •Verte: une teigne microsporique, •Jaune-vert: une teigne favique •Absence: teigne trichophytique, teigne inflammatoire

16. Modalités du prélèvement • Lampe de Wood • Arracher avec une pince à épiler les cheveux fluorescents

18. Modalités du prélèvement • Lampe de Wood • Arracher avec une pince à épiler les cheveux fluorescents • Ou prélever les cheveux cassés à la loupe • Prélever les squames et les croûtes en raclant à la curette. • Lésion inflammatoire/suppurée: prélever le pus par écouvillon

19. Périonyxis Récolter le pus avec un écouvillon stérile Leuconychie superficielle Gratter à la surface blanche Onyxis Couper la partie atteinte de l’ongle Gratter le matériel friable à l’interface saine Modalités du prélèvement

20. Modalités du prélèvement • Bouche: écouvillon, en grattant la zone atteinte.

23. Modalités du prélèvement • Bouche: écouvillon, en grattant la zone atteinte. • Anus: racler les squames en périphérie. • Cavité vaginale: écouvillonnage sous spéculum • Oreille: bouchon noirâtre ,le prélever à la pince.

24. Modalités du prélèvement Les prélèvements réalisés LBA Crachats Aspiration bronchiqueExpectoration induite Biopsie pulmonaire

25. Modalités du prélèvement • Désinfection soigneuse des parties génito- urinaires • Urines du milieu du jet • Récolte dans un récipient stérile

26. Modalités du prélèvement • Récolter les selles dans des boites stériles à fermeture hermétique •Écouvillonnage rectal : nourrisson

27. Modalités du prélèvement • Asepsie rigoureuse • À l’aide d’une aiguille, la ponction se fait entre les vertèbres L4-L5 ou L3-L4 • La récolte se fait dans un tube stérile

29. Modalités du prélèvement • 5-10 ml sur anticoagulant •Directement sur milieu de culture •Un tube sec sans anticoagulant: sérologie.

30. sang hémoculture sérum Sérologie antigénémie Tube sec Sur anticoagulant 5-10ml • Fongémie • Formes disséminées

31. Modalités du prélèvement Diviser en 2 parties: • Culture: dans l’eau physiologique • Examen anatomopathologique: fixation dans du liquide de Bouin ou du formol.

32. Prélèvement et conditionnement Localisation Prélèvement Conditionnement Délai d’acheminement Conservation Superficielle  Peau (squame)  Phanères : cheveux, poils et ongles Grattage (curette ou vaccinostyle) Pince à épiler (cheveux parasités) Ciseaux Boites stériles 1 à 3 jours +4°C Sous cutanée (nodules) Ecouvillonnage Biopsie Flacons stériles 24 heures +4°C Broncho-pulmonaire Lavage broncho-alvéolaire (LBA) Aspiration Crachats Flacons stériles 24 heures +4°C Pleurale Articulaire Péritonéale Liquide de ponction Liquide de dialyse, drains Flacons stériles 2 heures Traiter immédiatement Cérébrale Ponction lombaire (LCR) Flacons stériles de 1ml 2 heures Traiter immédiatement Septicémie Sang Cathéters centraux Hémoculture fongique Flacons stériles 24 heures Température ambiante Tissus profonds Biopsie Flacons stériles 2 heures Traiter immédiatement

39. Question N°1 Quelles sont les étapes du diagnostic mycologique?

40. Question N°2 Quelles sont les conditions de prélèvement mycologique?

41. Question N° 3 Quelles sont les modalités de prélèvement des lésions squameuses?

42. Question N° 4 Quelles sont les modalités de prélèvement de Pityriasis versicolor?

43. Question N° 5 Quelles sont les modalités de prélèvement des teignes?

44. Question N° 6 Quelles sont les modalités de prélèvement d’onyxis?

45. Question N° 7 Quelles sont les modalités de prélèvement de périonyxis?

46. Question N° 8 Quelles sont les modalités de prélèvement de muguet buccal?

47. EXAMEN DIRECT Indispensable, ED+: Oriente le diagnostic Suspecter ou confirme la pathogénicité Apprécier la présence et l’abondance Débuter un traitement antifongique

48. EXAMEN DIRECT Technique Objectif X40

49. EXAMEN DIRECT Liquide de montage Liquide de montage Eau phy: muqueuses, par l’écouvillon, selles Eclaircissant: •Lactophénol : cheveu, crachat, pus… •Potasse à 30% : squames, ongles Lugol 2% : tous les prélèvements, levures et filaments mycéliens brun. Encre de chine diluée au 1/5e : indispensable et obligatoire pour LCR. capsule des Cryptocoques Noir chlorazol : éléments fongiques en noir Bleu lactophénol (bleu coton) : éléments fongiques en bleu.

50. EXAMEN DIRECT Eau physiologique

51. EXAMEN DIRECT Liquide de montage Liquide de montage Eau phy: muqueuses, par l’écouvillon, selles Eclaircissant: •Lactophénol : cheveu, crachat, pus… •Potasse à 30% : squames, ongles Lugol 2% : tous les prélèvements, levures et filaments mycéliens brun. Encre de chine diluée au 1/5e : indispensable et obligatoire pour LCR. capsule des Cryptocoques Noir chlorazol : éléments fongiques en noir Bleu lactophénol (bleu coton) : éléments fongiques en bleu.

52. EXAMEN DIRECT Eclaircissement Objectif X40

53. EXAMEN DIRECT Liquide de montage Liquide de montage Eau phy: muqueuses, par l’écouvillon, selles Eclaircissant: •Lactophénol in colore : cheveu, crachat, pus… •Potasse à 30% : squames, ongles Lugol 2% : tous les prélèvements, levures et filaments mycéliens brun. Encre de chine diluée au 1/5e : indispensable et obligatoire pour LCR. capsule des Cryptocoques Noir chlorazol : éléments fongiques en noir Bleu lactophénol (bleu coton) : éléments fongiques en bleu.

54. EXAMEN DIRECT Encre de chine

56. EXAMEN DIRECT Noir chlorazol

58. EXAMEN DIRECT Bleu coton

59. EXAMEN DIRECT LCR, LBA, liquides biologiques Centrifugation 1500t/mn pd 3mn

60. EXAMEN DIRECT Biopsie d’organes ou tissus, pièces opératoires, MO… Giemsa : bonne résultats ; cytoplasme violet, la paroi reste blanche. Gram : tous les champignons sans gram +. Bleu de méthylène : recouvrir la lame de BM ; laisser agir 3 minutes, rincer, les éléments fongiques bleu.

61. EXAMEN DIRECT MGG

62. EXAMEN DIRECT Biopsie d’organes ou tissus, pièces opératoires, MO… Giemsa : bonne résultats ; cytoplasme violet, la paroi reste blanche. Gram : tous les champignons sans gram +. Bleu de méthylène : recouvrir la lame de BM ; laisser agir 3 minutes, rincer, les éléments fongiques bleu.

63. EXAMEN DIRECT Biopsie d’organes ou tissus/ colorations spécifiques de l’anapath Gomori Grocott ou imprégnation argentique : parois fongiques en noir, le fond de la préparation vert pâle. pas pour cytoplasme et noyau. L’Acide Périodique Schiff (PAS): polysaccharides de la paroi et glycogène champignons rouge-violet. cytoplasme et noyaux bien visibles.

64. EXAMEN DIRECT Imprégnation argentique

65. EXAMEN DIRECT Biopsie d’organes ou tissus/ colorations spécifiques de l’anapath Gomori Grocott ou imprégnation argentique : parois fongiques en noir, le fond de la préparation vert pâle. pas pour cytoplasme et noyau. L’Acide Périodique Schiff (PAS): polysaccharides de la paroi et glycogène champignons rouge-violet. cytoplasme et noyaux bien visibles.

66. EXAMEN DIRECT PAS

67. EXAMEN DIRECT- RESULTATS- Levure du genre Candida

68. EXAMEN DIRECT Levure Malassezia furfur

69. EXAMEN DIRECT- RESULTATS- Genre Aspergillus

70. EXAMEN DIRECT- RESULTATS- Dermatophytes –squames et ongles-

71. EXAMEN DIRECT- RESULTATS- Dermatophytes –cheveux et poils- Parasitisme endo-ectothrix Intrapilaire ou endothrix Microsporique Miroïde Mégasporé Tricophytique Favique

72. EXAMEN DIRECT- RESULTATS- Dermatophytes –cheveux et poils-

77. Culture Culture Isolement Identification

78. Culture Le milieu Sabouraud : • Universel, +simple • Glucose + peptone +agar • Tous les champignons responsables de mycoses. Le milieu Sabouraud – chloramphénicol et/ ou gentamycine • Inhiber la pousse des bactéries Le milieu Sabouraud – chloramphénicol – actidione : • Inhibiteur des moisissures saprophytes • Inhibe la croissance de certains champignons: critère d’identification. Milieux d’isolement:

79. Culture Milieux d’isolement: • Milieux spécifiques des champignons • Milieu MycosisLes hémocultures: • Malassezia furfur. Milieu Sabouraud +l’huile d’olive • Dermatophytes exigeants. Milieu Brain Heart agar

80. Culture En boite : • Grande surface d’isolement (association de champignons) • Contamination facile • Milieu se dessèche rapidement En tube : • Bonne conservation • Moins de contamination • Surface d’ensemencement réduite.

81. Culture • Ensemencer en abondance et stérilement. – Hotte à flux laminaire – Bec Bunsen. Techniques d’ensemencement: Sabouraud- chloramphénicol Sabouraud- chloramphénicol-actidione Examen direct/ reste du produit

82. Culture Techniques d’ensemencement: • Couler le produit liquide sur le tube incliné • Ensemencer par stries en boiteLiquide • Frotter l’écouvillon en le roulant sur toute la surface du milieu Ecouvillons • Déposer le produit pathologique à la surface du milieu de culture.Squames, fragments d’ongle ou cheveux • Prélever avec une pipette Pasteur recourbée, ensemencer largement sur toute la surface.Expectorations, selles • Découper dans une boite de Pétri stérile avec un bistouri, le produit en petits fragments ou broyer avec un peu d’eau physiologique stérile, • Ensemencer plusieurs fragments sur la surfaces du milieu. Biopsies

83. Culture Incubation: 27°C 37°C

84. Culture Lecture: Tous les 5j pendant 4semaines Après 24h et tout les jours pendant 8 j

85. IDENTIFICATION Levures:

88. 24-48h à 27°C

91. IDENTIFICATION Levures: • Etude de l’assimilation des sucres Auxanogramme • Etude de la fermentation des sucres Zymogramme

93. IDENTIFICATION Champignons filamenteux:

94. IDENTIFICATION Champignons filamenteux: Critères morphologiques Examen macroscopique : • Délai de pousse • La consistance de la colonie • La couleur : du recto et du verso • La présence d’un pigment diffusible Examen microscopique : • Prélever un fragment de la colonie à l’aide d’une spatule, • Technique de drapeau

96. Espèce Délai de pousse Examen macroscopique Examen microscopique Epidermophyton floccosum Rapide 5 à 6 jours Colonie poudreuse Recto : vert olive Verso : chamois Pas de microconidies Macroconidies : en raquette, à paroi lisse et mince, disposés en bouquet « régime de banane »

97. Espèce Délai de pousse Examen macroscopique Examen microscopique Epidermophyton floccosum Rapide 5 à 6 jours Colonie poudreuse Recto : vert olive Verso : chamois Pas de microconidies Macroconidies : en raquette, à paroi lisse et mince, disposés en bouquet « régime de banane »

98. Espèce Délai de pousse Examen macroscopique Examen microscopique Microsporum canis Rapide 5 à 6 jours Colonie duveteuse, étoilée Recto : blanc Verso : pigment jaune orangé Microconidies : piriformes, peuvent être présentes. Macroconidies : de grandes tailles, renflées au centre, pointues aux 2extémités, parois épaisses, échinulées, contiennent 6-12 logettes

99. Espèce Délai de pousse Examen macroscopique Examen microscopique Microsporum canis Rapide 5 à 6 jours Colonie duveteuse, étoilée Recto : blanc Verso : pigment jaune orangé Microconidies : piriformes, peuvent être présentes. Macroconidies : de grandes tailles, renflées au centre, pointues aux 2extémités, parois épaisses, échinulées, contiennent 6-12 logettes

100. Espèce Délai de pousse Examen macroscopique Examen microscopique Trichophyton rubrum 10 jours Colonie duveteuse Recto : blanc Verso : pigment rouge Microconidies : plus ou moins nombreuses, piriformes et disposées en aclafium. Macroconidies : absentes

101. Espèce Délai de pousse Examen macroscopique Examen microscopique Trichophyton rubrum 10 jours Colonie duveteuse Recto : blanc Verso : pigment rouge Microconidies : plus ou moins nombreuses, piriformes et disposées en aclafium. Macroconidies : absentes

102. Espèce Délai de pousse Examen macroscopique Examen microscopique Trichophyton mentagrophytes Rapide 5 à 6 jours Colonie poudreuse Recto : blanc à crème Verso : jaune rouge ou brun Microconidies : nombreuses, rondes et disposées en aclafium. Macroconidies : en massues, à paroi lisse et mince et contiennent de 5-6 logettes. Ornementations particulières : vrilles, organes pectinés.

103. Espèce Délai de pousse Examen macroscopique Examen microscopique Trichophyton mentagrophytes Rapide 5 à 6 jours Colonie poudreuse Recto : blanc à crème Verso : jaune rouge ou brun Microconidies : nombreuses, rondes et disposées en aclafium. Macroconidies : en massues, à paroi lisse et mince et contiennent de 5-6 logettes. Ornementations particulières : vrilles, organes pectinés.

105. Espèce Incubation Délai de pousse Recto des colonies Conidiophore Tête aspergillaire Vésicules Rangées de phialides Conidies A.fumigatus 37°C 24-48 heures Poudreuses Vert à gris Lisse, incolore En colone Hémisphérique 1 Globuleuses Vertes Echinulées

106. Espèce Incubation Délai de pousse Recto des colonies Conidiophore Tête aspergillaire Vésicules Rangées de phialides Conidies A.fumigatus 37°C 24-48 heures Poudreuses Vert à gris Lisse, incolore En colone Hémisphérique 1 Globuleuses Vertes Echinulées

107. Espèce Incubation Délai de pousse Recto des colonies Conidiophore Tête aspergillaire Vésicules Rangées de phialides Conidies A.nidulans 27°C 4-5 jours Poudreuses Vert cresson Lisse, sinueux Court En colone Hémisphérique 2 Rondes Vertes Echinulées

110. Espèce Incubation Délai de pousse Recto des colonies Conidiophore Tête aspergillaire Vésicules Rangées de phialides Conidies A.flavus 27°C 4-5 jours Poudreuses Vert jaune Rugueux, incolore Radiée Sphérique 1-2 Globuleuses Vertes Echinulées

111. Espèce Incubation Délai de pousse Recto des colonies Conidiophore Tête aspergillaire Vésicules Rangées de phialides Conidies A.flavus 27°C 4-5 jours Poudreuses Vert jaune Rugueux, incolore Radiée Sphérique 1-2 Globuleuses Vertes Echinulées

112. Espèce Incubation Délai de pousse Recto des colonies Conidiophore Tête aspergillaire Vésicules Rangées de phialides Conidies A.niger 27°C 4-5 jours Granuleuses Noir Lisse, incolore à brun Très long Radiée Globuleuse 2 Globuleuses Noires Echinulées

113. Espèce Incubation Délai de pousse Recto des colonies Conidiophore Tête aspergillaire Vésicules Rangées de phialides Conidies A.niger 27°C 4-5 jours Granuleuses Noir Lisse, incolore à brun Très long Radiée Globuleuse 2 Globuleuses Noires Echinulées

114. IDENTIFICATION Champignons filamenteux: Milieux Champignons Intérêt Milieu eau gélosée à 2% ( EG) Trichophyton rubrum Meilleure fructification Brain-Heart en boite de pétri T.ochraceum,T. violaceum, T. schoenleinii Dermatophytes exigeants Milieu P.D.A (pomme de terre- glucose-agar) Microsporum canis Pigments Milieux lactrimel de Borelli T. rubrum , M.canis Pigments Milieu Czapek Aspergillus Pigments Milieu Corn meal agar (CMA) Aspergillus Pigments Milieu extrait de malt Aspergillus Pigments

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