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  1. 1. Identification bactérienne à partir d’une culture de 18 à 24 heures Antibiogramme TP 3 (DCEM1) Section de Microbiologie Département des Sciences de Base B Faculté de Médecine de Tunis
  2. 2. IDENTIFICATION CARACTÈRES: 1- MORPHOLOGIQUES 2- CULTURAUX 3- BIOCHIMIQUES
  3. 3. Caractères culturaux• Taille et aspect des colonies sur la gélose, pigmentation• L’exigence nutritive des bactéries en culture
  4. 4. Caractères culturaux • Hémolyse sur GSβ α γ
  5. 5. Caractères morphologiques• Etat frais : forme & mobilité• Coloration de Gram : – Forme des bactéries : bacille ou cocci – Gram + ou – – Mode regroupement (cocci ++)
  6. 6. Caractères biochimiques• Type respiratoire• Caractères biochimiques de base Catalase (+ Staphylococcus) Oxydase (BGN)
  7. 7. BGN 1er test d’identification = cytochrome oxydase Positif Négatif -BGN non fermentaires -Entérobactéries - Vibrio/ Aeromonas - Acinetobacter Type respiratoire AAF Aerobie strict AAF Aérobie strict Vibrio/Aeromonas Pseudomonas Entérobactéries AcinetobacterIdentification biochimiquecomplète : galerie classique ousystème Api
  8. 8. Cocci à Gram positif Test catalase Négatif Positif StreptocoquesStaphylococcaceae Entérocoques
  9. 9. Cocci à Gram positif en amas catalase +Croissance milieu hypersalé sélectif avec ou sans virage (Milieu Chapmann) Staphylococcaceae Plusieurs tests Le plus important : Coagulase Négatif Positif = S. aureus Staphylocoques à coagulase négative Galerie d’identification Api Staph
  10. 10. Cocci Gram positif catalase négative Exigent Non exigent Absence de croissance en milieux hostilesCroissance en milieux hostiles : NaCl 6,5% , bile esculine Hémolyse Béta Alpha Enterococcus Sensibilité à l’optochine Streptocoques groupables A, C, B, G, F … Galerie d’identification biochimique S S.pneumoniae R  Autres streptocoques non groupables Sérogroupage de Lancefield Galerie identification : Api
  11. 11. ETUDE DE LA SENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES ANTIBIOGRAMME
  12. 12. MÉTHODE DE DIFFUSION = AntibiogrammeConditions standardisées +++• Milieu de culture (nature et épaisseur) : gélose Mueller Hinton (MH)• Suspension bactérienne (inoculum)• Disques d’antibiotiques : concentration d’antibiotique bien déterminée• Choix des molécules par famille d’antibiotique +++  Déduire les mécanismes de résistance Suivre les Normes proposés par les Comités d’experts• Ensemencement par écouvillonnage• Déposer les disques à la surface• Incuber 18 à 24 h à 37°C
  13. 13. Antibiogramme Culture pure de 24h Préparer inoculum Ensemencer par stries serrées dans trois sens en tournant la boîte de 1/3 de tour chaque fois
  14. 14. ANTIBIOGRAMME3cm Diffusion de l’antibiotique
  15. 15. Résultat après 24 h à 37°C
  16. 16. ANTIBIOGRAMME24h incubation 37°C Lecture et interprétation des diamètres d’inhibition: comparer aux valeurs de référence (d et D) S–I-R
  17. 17. Lecture brute : insuffisante Parfois ne permet pas d’évaluer correctement la sensibilité de certains antibiotiques vis-à-vis de certaines espèces bactériennes Tests de dépistage et tests complémentaires Lecture interprétative de l’antibiogramme ++But : rechercher une résistance insuffisamment expriméeà l’antibiogramme Transformé un résultat S en I ou R Risque échec thérapeutique
  18. 18. Pneumocoque de sensibilité diminuée aux pénicillines : PSDP PSDP = Résistance croisée entre les β-lactamines à des degrés variésOxacilline< 26mm Faire CMI β-lactamines E-test +++
  19. 19. β-lactamase à spectre étendue : BLSE• Essentiellement, les entérobactéries : Klebsiella et E. coli …• Test double synergie ++  Image en bouchon de champagne  Souche R à toutes β-lactamines sauf les céphamycines et les carbapénèmes
  20. 20. S. aureus résistant à la méticilline : SARM Céfoxitine R Résistance croisée à toutes les β-lactamines Oxacilline R
  21. 21. SALLE DE TP• 20 min : Présentation du topo à la salle de Staff• 10 min : Démonstration aspect des colonies sur différents milieux de culture• 20 min : Préparation de l’étalement pour la coloration de Gram Réalisation de la coloration de Gram Lecture au microscope optique (objectif 100)• 10 min : Réalisation des tests biochimiques : catalase et oxydase en démonstration• 10 min : réalisation d’un antibiogramme : démonstration (10min)• 20 min : Démonstration de certains phénotypes de résistances acquises aux antibiotiques (20min) PSDP BLSE SARM

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