Les outils de la biologie moléculaire appliqués à la recherche d’OGM. Authentification des espèces et variétés végétales, et recherche d’OGM, par les outils de biologie moléculaire.
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Authentification des espèces et variétés végétales, et recherche d’OGM, par les outils de biologie moléculaire. Karine LACOTTE‐BOTELHO (Laboratoire Phytocontrol)
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- 1. Sûreté alimentaire Quelles innovations pour la maîtrise des contaminants et l'authentification des produits agricoles et alimentaires ? > 13 & 14 novembre 2013 > Montpellier SupAgro INRA www.rencontres-qualimediterranee.fr
- 3. Le génie génétique Définition: Méthode qui permet d'introduire dans une cellule un gène (étranger) qu'elle ne possède pas. Le fonctionnement de ce gène (son expression) dans la cellule receveuse aboutit à la production d'une protéine qui n'est pas normalement fabriquée par cette cellule. Nom Prénom Intervenant / Organisme
- 5. REGLEMENT CE n°1829/1830/2003 du 22 septembre 2003 L’Union Européenne a mis en place une réglementation, afin de donner aux consommateurs européens le libre choix de consommer ou non des OGM, imposant que les produits contenant des OGM fassent l’objet d’un étiquetage spécifique et a fixé le seuil de détection de ces OGM à 0,9 %. La mise en oeuvre de cette politique n’est possible que s’il existe des méthodes de détection fiables et validées des OGM et que les OGM non autorisés soient détectables.
- 6. PCR (Polymerase Chain Reaction) Le principe de base de la PCR est l’amplification génique, après extraction d’ADN ou d’ARN. La PCR en temps réel utilise le principe de base de la PCR classique (amplification cyclique d’un fragment d’ADN, basée sur une réaction enzymologique) avec pour différence une amplification mesurée non pas en final mais tout au long de la réaction, donc en temps réel.
- 7. PCR (Polymerase Chain Reaction)
- 8. Le résultat d’une PCR en temps réel est représenté graphiquement sous forme de courbes sigmoïdes.
- 9. A chaque cycle d’amplification, la quantité d’ADN est mesurée grâce à un marqueur fluorescent dont l’émission est directement proportionnelle à la quantité d’amplicons produits. Ceci permet d’obtenir une cinétique de la réaction et donc la quantification de l’ADN alors que la PCR classique ne donne que la mesure finale.
- 10. Promoteur (P35S) Terminateur (Tnos) Gène codant pour le caractère désiré Méthode de criblage (screening) Méthode spécifique
- 11. Tableau identification OGM 26/03/13 Date de mise à jour: Identification espèces OGM Espèces Autorisé en UE pour la culture Autorisé en UE dans l'alimentation humaine / animale P35S X 2008/730/CE - X 2008/933/CE soja OGM DP-305423-1 - En attente - soja OGM DP356043-5 - X 2012/84/UE soja OGM MON87705 - En attente - soja OGM MON87708 - En attente - soja OGM MON87701 Espèce plante Maïs maïs OGM MON 810 - X 2012/83/UE X X 98/294/CE maïs OGM MON 863 - X 2005/608/CE maïs OGM Bt11 - X 2010/419/UE maïs OGM Bt10 - - 2007/157/CE maïs OGM MON88017 - X 2009/814/CE maïs OGM Bt176 - Retiré 2007/304/CE maïs OGM GA21 - X 2008/280/CE maïs OGM MIR 604 - X 2009/866/CE maïs OGM NK 603 - X 2004/643/CE maïs OGM Herculex 1507 - X 2005/772/CE maïs OGM DAS 59122 - X 2007/702/CE maïs OGM T25 - X 2008/470/CE maïs OGM Starlink CBH 351 - - - maïs OGM MIR 162 - X 2012/651/UE maïs OGM MON 89034 - X 2009/813/CE maïs OGM EVENT 3272 Espèce plante colza colza OGM RT/GT 73 - En attente - - X 2005/635/CE colza OGM MS8/ RF3 - X 2007/232/CE colza OGM TOPAS 19/2 - Retiré 2007/307/CE colza OGM T45 - X 2009/184/CE colza OGM MS1/ RF1 Espèce plante riz riz OGM LL62 - Retiré 2007/305/CE - - - riz OGM LL601 - - - riz OGM BT63 - - - riz OGM KMD 1 - - - riz OGM Kefeng 6 Espèce plante pomme de terre AMFLORA EH92-527-1 Espèce plante lin lin OGM Triffid FP967 Espèce plante papaye 63-1 - - - X X 2010/135/UE NptII Pat - - + + - Tnos FMV Bar NptII Pat + + + + + + + + + + + + - + + + + + + + + + + + + - + + - + - + + + + - Tnos FMV Bar NptII Pat + + - + + + - + + + + + + - Tnos FMV Bar NptII Pat + + + + + + + - + + - - - Tnos FMV Bar NptII Pat - + - - + - P35S - soja OGM MON 89788 Bar + + - P35S soja OGM A 2704-12 FMV + - P35S 2012/82/UE 2012/81/UE + + + + - P35S X X Tnos P35S - X17-2 Multiscreening Règlementation UE Espèce plante Soja soja OGM RRS (MON GTS40-3-2) soja OGM A5547-127 Tnos FMV Bar NptII Pat - - - - - - - - - + - - + - P35S - Tnos FMV Bar NptII Pat + + + + - - + + -
- 12. Expression des résultats Si le résultat est supérieur à la limite de détection (0,01% ) et inférieur à la LQ (0,1%) le résultat est rendu positif <0,1 % Si le résultat est > LQ la teneur en OGM peut être quantifiée: Calcul de la teneur en ADN de végétaux génétiquement modifiés: Teneur: (nb de copies ADN OGM/nb de copies ADN de l ’espèce ) x 100 La teneur est exprimée par rapport à l’espèce végétale ce qui signifie qu’il faut passer par l ’identification si mélanges de plusieurs espèces dans l’échantillon
- 13. Les équipements - Spectrophotomètre (quantification de l’ADN) : Nanodrop - Centrifugeuse réfrigérée - Bain-marie - Vortex - Robot Epmotion (préparation et distribution des plaques PCR) - Thermocycleur (amplification de l’ADN – RT PCR)
- 14. w w w . r e n c o n t r e s ‐ q u a l i m e d i t e r r a n e e . f r