INTRODUCTION Les actinobactéries sont l'un des groupes dominants les microorganismes à Gram-positif, filamenteuses à forte teneur en G + C. Ces bactéries sont caractérisées par une différenciation morphologique complexe et ont longtemps considérées comme un groupe intermédiaire entre les bactéries et les champignons. La diversité écologique a permis aux chercheurs de les exploiter en tant que source la plus riche de produits pharmaceutiques et biologiquement actifs , tel que les antibiotiques, les antioxydants, les vitamines, les antiviraux, une large gamme d’enzymes généralement fonctionnelles à une large gamme de températures, de pH, de salinité ou d'autres conditions extrêmes. Pour répondre à la demande croissante des industries en biocatalyseurs, la recherche est toujours canalisée pour l’obtention de nouvelles enzymes, notamment la recherche de nouvelles souches microbiennes, y compris les actinobactéries qui ont la capacité de produire et de sécréter une variété de ces métabolites. Cependant, de nombreux genres rares d'actinobactérie n'ont pas été explorés malgré leur potentiel biotechnologique. L’étude du potentiel microbien des environnements extrêmes peut ouvrir de nouvelles portes pour produire de nouvelles enzymes pouvant servir la biotechnologie verte. Dans cette optique nous nous sommes intéressées à l’étude de quelques activités enzymatiques de trois souches d’actinobactéries isolées à partir d’échantillon de sol de la région de Bejaia. Ce document est présenté en trois parties dont  La première est consacrée à une synthèse bibliographique sur les actinomycètes ainsi que sur leur métabolisme secondaire.  La deuxième regroupe l’ensemble des techniques et la méthodologie utilisée.  La troisième partie présente les résultats et leur discussion, suivie par une conclusion. RESUME Résumé L’objectif de ce travails’inscrit dans le cadre de mettre en évidence de neuf activité enzymatiques (amylase, cellulase, caséinase, gélatinase, estérase, lécithinase, uréase, tyrosinase et nitrate réductase) de trois souches d’actinobactéries (NA44, ND101 et SC20) isolées de sol à la région de Bejaia.Les cultures ont été incubées à 30°C pendant 7, 14 et 21 jours. Les résultats obtenus ont révélé la production des neuf enzymes recherchées par les actinobactéries étudiées. Les enzymes produites présentent une importance particulière dans diverses industries biotechnologiques, et en biotransformation (agroalimentaire, biodégradation des déchets et production de biocarburant).

1. 1

2. Ministère de la recherche et de l’enseignement supérieur.
Université Abderrahmane Mira de Bejaia.
Faculté des sciences de la nature et de la vie.
Département de microbiologie.
Master II biotechnologie microbienne .
Mémoire de Fin de Cycle
En vue de l'obtention du diplôme
Master
Etude de quelques activités biologiques de
souches d’actinobactéries
Présenté par:
Bouzid Kahina
2
Encadrée par:
Souagui. S

3. Plande travail
Introduction
Matériel et méthodes
Conclusion et perspectives
Résultats et discussion
3

4. Introduction

5. Synthétique
semi-synthétique
Naturelle
5
Industrie

6. Bacteries a Gram positif avec un GC% élevé.
Peuvent présenter diverses morphologies
(filamenteuse, bacilles, cocci,,,)
Souvent telluriques.
Synthétisent les métabolites bioactifs.
6
Généralités sur les actinobatéries
Le genre Streptomyces est une composante prédominante de la population
microbienne dans les sols et est connu pour être commercialement et
thérapeutiquement, une source majeure de métabolites secondaires importants
appliqués dans différents domaines.

7. Applications biotechnologique des actinobatéries
7

8. Etude des l’activités enzymatiques
des souches d’actinobactéries
OBJECTIFS DU TRAVAIL
8

9. Materiéls et Méthodes
9

10. 10
Matériels
Souches
d’actinobactéries
NA44.
SC20.
ND101.
Isolées à partir de sol de la
région de Béjaia
Millieux de cultures
Tween 80.
Gélose au lait ecrémé .
Gélose à la gélatine .
Gélose au jaune d’œuf.
Gélose à la tyrosine.
CMC.
Gélose de Gausse.
Urée indole.
Bouillon nitraté.

11. 11
Étude des l’activités
enzymatiques
Sur milieu
solide
sur milieu liquide
Méthodologies

12. 12
milieu solide
Ensemencement
Tween 80
CMC
Gélose à la gélatine
Gélose à la Tyrosine
Gélose de Gausse
Gélose au jeune d’œuf
Gélose au lait crémé
Souches d’actinobactéries

13. 13
Milieu liquide
Tube 3
Urée Indole
Bouillon Nitraté
Tube 1 Tube 2
Tube 1 Tube 2 Tube 3
Souches d’actinobactéries
Ensemencement

14. RÉSULTATSET DISCUSSIONs
14

15. 15
Résultats
1. Sur milieu liquide
Tableau I: Activités enzymatiques des trois souches d’actinobactéries sur milieu
liquide
Substrat
dégradé
Les souches d’actinobactéries
NA44 ND101 SC20
Urée + + +
Nitrate + + +
Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques
+: Présence de l’enzyme

16. 16
Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques

17. 17
Résultats
Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques
2. Sur milieu solide
Substrat
dégradé
Les souches d’actinobactéries
NA44 ND101 SC20
Amidon Halo clair Halo clair Halo clair
Caséine
Halo clair Halo clair Halo clair
Cellulose
Halo jaunâtre
Halo jaunâtre
Halo jaunâtre
Gélatine halo clair Pas d’halo Halo clair
Tween 80
Halo opaque
Halo opaque Halo opaque
Lécithine
Halo opaque Halo opaque Halo opaque
Noircissement de milieu
Noircissement de milieu Noircissement de milieu
L-Tyrosine
Tableau II :Activités enzymatiques des trois souches d’actinobactéries sur milieu solide

18. 18
Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques

19. 19
Discussions
 Après 7jours d’incubation à 30C°,les tubes de milieu Urée-Indol déjà ensemencés avec chacune des
trois souches d’actinobactéries (ND101, NA44, SC20) ont viré au rouge violet; ceci confirme
l’alcalinité du milieu suite à la production d’ammoniac après catalyse de l’urée par l’uréase produite
par nos souches.
 Après l’addition des deux réactif NR1 et NR2 pour les tubes de milieu bouillon nitraté déjà
ensemencés par les souches d’actinobactéries (ND101, NA44,SC20);seul le tube correspond à la
souches ND101 qui a viré vers le rouge; ceux qui indique que cette souche a produit la nitrate
réductase.
 Pour les deux autre souches NA44 et SC20 aucun virage n’a été observé mais l’addition de
quelque Mg de poudre de zinc nous a aidé à confirmer le résultat positif de la présence d’une activité
nitrate réductase.

20. 20
Discussions
 la présence d’un halo clair autour des colonies dans les deux milieu « Gausse » et « Gélose au lait
écrémé » signifié que les deux substrat « Amidon » et « Casiéne » ont été dégradé par les deux enzymes
« Amylase » et « Caséinase » respectivement produites par nos trois souches d’actinobactéries
(NA44,ND101,SC20),
 L’halo opaque qui a été manifesté autour des colonies dans les deux milieu « T ween80 » et « Gélose au
jaune d’œuf » indique la présence de l’activité estérasique et lécithinasique respectivement chez les trois
souches d’actinobactéries testées.
 L’apparition d’halo jaunâtre dans le milieu CMC montre que nos souches d’actinobactéries ont une
activité cellulolytique.
 Noircissement du milieu « Gélose à la tyrosine » s’explique par l’hydrolyse de L-tyrosine et la
production de la milanine.
 L’halo clair présenté chez les deux souches NA44 et SC20 sur le milieu « Gélose à la gélatine »
désigne une activé gélatinase positive ,le résultat négatif de cette activité chez la souche ND101 se
traduit par l’absence d’une zone autour des colonies.

21. 21
CONCLUSION
 Les trois souches d’actinobactéries (NA44, ND101 et SC20) présentent plusieurs
activités enzymatiques (Amylolytique,cellulolytique,caséinase,estérasique,
lécitinasique, tyrosinase, uréasique, nitrate réductase).
 L’activité Amylolytique de deux souches d’actinobactéries (NA44
SC20) est relativement plus élevée par rapport à la souche ND101 .
 L’activité gélatinase est présenté chez les deux souches d’actinobactéries (NA44,
SC20) cependant la souche d’actinobactérie ND101 n’a pas pu hydrolysée la gélatine.

22.  L’identification des souches testées.
 Caractérisations des enzymes produites.
 Compléter l’étude avec les testes d’autres activités biologiques pour évaluer leurs
éventuelles intérêt dans d’autres applications.
22
PERSPECTIVES

23. Merci pour votre attention
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