Atelier Paludisme - IPM - 2007ADN ET GENOTYPAGERazafinjato CélestinINSPC ANTANANARIVOMADAGASCAREVALUATIONpar les FACILITAT...
Atelier Paludisme - IPM - 2007PLAN• Définition et historique• Rappel sur la structure de l’ADN• Diversité• Outils de génot...
Atelier Paludisme - IPM - 2007Définition et historique (1)• Acide désoxyribonucléique (ADN) : hérédité.• Watson et Crick- ...
Atelier Paludisme - IPM - 2007Définition et historique (2)• Ensemble gènes = génome• Génotype: forme allélique d’un gène(j...
Atelier Paludisme - IPM - 2007Rappel sur la structure de l’ ADN (1)• La biologie moléculaire permet d’explorer l’ADN pardi...
Atelier Paludisme - IPM - 2007Rappel sur la structure de l’ ADN (2)LADN = 3 éléments:• un groupe phosphate• un sucre, le d...
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Atelier Paludisme - IPM - 2007Diversité (2)Génération du polymorphisme– Mutations ponctuelles.– Délétions et duplication.–...
Atelier Paludisme - IPM - 2007Outils de génotypage (1)• Hybridation:– technique particulière d’hybridation moléculaire qui...
Atelier Paludisme - IPM - 2007Outils de génotypage (2)PCR ou réaction de polymérisation en chaîne de l’ADNla production de...
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Atelier Paludisme - IPM - 2007Outils de génotypage (4)L’application :Diagnostic.Thérapie.Dépistage systématique.Médecine l...
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Atelier Paludisme - IPM - 2007ConclusionGénotypage :– Diverses techniques puissantes.– Amélioration de notre connaissance....
Atelier Paludisme - IPM - 2007Référence• http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/genophenotype/phenotype.html• http://www.cns.fr/...
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ADN et génotypage

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ADN et génotypage - Présentation de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Célestin RAZAFINJATO - Médecin - INSPC - Antananarivo, Madagascar - razafinjatocelestin@yahoo.fr

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ADN et génotypage

  1. 1. Atelier Paludisme - IPM - 2007ADN ET GENOTYPAGERazafinjato CélestinINSPC ANTANANARIVOMADAGASCAREVALUATIONpar les FACILITATEURS
  2. 2. Atelier Paludisme - IPM - 2007PLAN• Définition et historique• Rappel sur la structure de l’ADN• Diversité• Outils de génotypageHybridationSéquençagePCRRFLP• Paludisme et génotypage• Conclusion
  3. 3. Atelier Paludisme - IPM - 2007Définition et historique (1)• Acide désoxyribonucléique (ADN) : hérédité.• Watson et Crick- 1953• ADN: le support de linformation génétique :• longues molécules agglomérées sous forme deCHROMOSOMES• Unité d’information(transcription) = gène.
  4. 4. Atelier Paludisme - IPM - 2007Définition et historique (2)• Ensemble gènes = génome• Génotype: forme allélique d’un gène(jeu de gène ).• ADN = diverses formes.• Génotypage = technique pour différencier les génotypes.
  5. 5. Atelier Paludisme - IPM - 2007Rappel sur la structure de l’ ADN (1)• La biologie moléculaire permet d’explorer l’ADN pardiverses méthodes.• Sa structure moléculaire– sorte déchelle constituée de 2 brins;– une double chaîne de nucléotides en formehélicoïdale.
  6. 6. Atelier Paludisme - IPM - 2007Rappel sur la structure de l’ ADN (2)LADN = 3 éléments:• un groupe phosphate• un sucre, le désoxyribose• Les quatre nucléotides, sous-unités de lADN: 2 groupes debases azotées :– les bases PURIQUES: guanine (G) et adénine (A),– les bases PYRIMIDIQUES: cytosine (C) et thymine (T).
  7. 7. Atelier Paludisme - IPM - 2007Rappel sur la structure de l’ ADN (3)La synthèse de l’ADNLes protéines sont assemblés à partir des acides aminés enfonction de l’information présente dans les gènes.2.Etapes:TranscriptionTraductionChaque étapes a 3 phases:– Initiation– Élongation– terminaison• bases azotées attachées / liaisons faibles. cassées par uneenzyme lADN polymérase thermostable la chaîne ouverte 2ADN (2 brins nouvellement formés)..
  8. 8. Atelier Paludisme - IPM - 2007http://fr.wikipedia.org/wiki/Image:R%C3%A9plicationdelADN.png
  9. 9. Atelier Paludisme - IPM - 2007Diversité (1)• Le développement des techniques de biologie a permisla mise en évidence dune très importante variabilité delADN = polymorphisme.• Le polymorphisme génétique a été défini commelexistence, dans un même génome, d’un gène sousdeux ou plusieurs formes alléliques.
  10. 10. Atelier Paludisme - IPM - 2007Diversité (2)Génération du polymorphisme– Mutations ponctuelles.– Délétions et duplication.– Conversion génique.– Insertions de séquences mobiles.– Lexcision de boucles chromatiniennes.– Le glissement intra-chromatidien (VNTR).– Recombinaisons.
  11. 11. Atelier Paludisme - IPM - 2007Outils de génotypage (1)• Hybridation:– technique particulière d’hybridation moléculaire quipermet de déterminer la ressemblance entre lesséquences de deux brins d’ADN que l’on veutcomparer.– Degré de parenté• Séquençage:fragmentation d’un génome et vérifier lordredenchaînement des nucléotides de l’ADN: détectiondes maladies génétiques.
  12. 12. Atelier Paludisme - IPM - 2007Outils de génotypage (2)PCR ou réaction de polymérisation en chaîne de l’ADNla production de grandes quantités de l ’ADN en utilisantune réaction enzymatique.• l amplification in vitro de lADN.• technique est basée sur la combinaison de 2 facteurs :les propriétés de synthèse enzymatique et d’initiation.• analyse quantitative et qualitative pour la détection dupolymorphisme génétique.• utilisé en général pour diagnostic.
  13. 13. Atelier Paludisme - IPM - 2007Outils de génotypage (3)RFLP ou polymorphisme de longueur des fragments de restriction:• Couper lADN en morceaux, à laide denzyme de restriction :– pour distinguer les unes des autres les molécules d’ADN,– technique de laboratoire pour différencier ou comparer desmolécules dADN = empreintes génétiques et dans les tests depaternitéséparation des fragments de restrictionÉTAPES DE LA TECHNIQUE RFLPextraction de lADNhydrolyse de lADNDénaturation de lADN transfert sur membranerenforcement de la fixation
  14. 14. Atelier Paludisme - IPM - 2007Outils de génotypage (4)L’application :Diagnostic.Thérapie.Dépistage systématique.Médecine légale: Typage d’un individu, recherche criminelle, testde paternité.Organismes génétiquement modifiés en agronomie: plantes;Lesanimaux.
  15. 15. Atelier Paludisme - IPM - 2007Le génotypage permet:de déterminer l’efficacité thérapeutique (recrudescenceet nouvelle infection).Ex: MSP 1- MSP2 ( PCR, hybridation, RFLP) .de diagnostic pour le traitement adéquat.analyse épidémiologique moléculaire (prévalence de telou tel allèle ou génotype dans une région donnée).de guider de stratégies de lutte contre le paludisme.indicateur pour évaluer les programmes de lutte contrele paludisme (diminution des clones parasitaires).Paludisme et génotypage
  16. 16. Atelier Paludisme - IPM - 2007ConclusionGénotypage :– Diverses techniques puissantes.– Amélioration de notre connaissance.– Un outil très utile à la gestion de la santé de la population.– Bon diagnostic pour traitement adéquat.– Moyen de lutte efficace
  17. 17. Atelier Paludisme - IPM - 2007Référence• http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/genophenotype/phenotype.html• http://www.cns.fr/externe/Francais/Presentation/ADN_historique.html• http://wcentre.tours.inra.fr/sfpar/bulletin/2000/affiches/thellier.htm• http://www.pathexo.fr/pdf/Articles-bull/2004/2004n4/T97-4-2648-2p.pdf• http://fr.wikipedia.org/wiki/Adn• http://www.proadn.com/fr/communique_communique_18
  18. 18. Atelier Paludisme - IPM - 2007

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