REPUBLIQUE ALGERIENNE DE DEMOCRATIQUE ET POPULAIAREMINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE  ...
Sommaire*Introduction             *Mecanisme du clonage                             -clonage par plasmide.                ...
Introduction   La biotechnologie moderne, fondée sur la manipulation del’ADN ,permet de modifier et /ou d’analyser des gèn...
Définition Terme issu du grec klôn : rejeton. Le terme clonage estlopération qui à partir de cellules isolées, permet dobt...
Le principe du clonage:     Le principe du clonage est simple. Il consiste à insérer un segment dADN étranger dans une pet...
quelques definitions :• Les enzymes de restriction :    Sont une sorte de ciseaux moléculaires servant à couper lADN en de...
• Notion d’ADN recombinant:    Il s’agit d’un ADN hybride obtenu au laboratoire par la combinaison de deux ADN appartenant...
• Notion de clone      Le clone correspend à un grand nombre de molècules ou  de cellules identiques provenant   d’un seul...
• L’ADN ligase :   Sont des enzymes qui sontcapables de reconstituer la liaisonphosphoester.
Mecanisme du clonage:• Isolement de l’ADN à partir des plasmides des  bactéries et de l’ADN de cellules humaines.• Action ...
A quoi sert le clonage?L’utilisation du clonageProduction des vaccins  Déterminant antigénique introduction du gènecorresp...
Production d’hormones    La synthèse chimique de l’insuline humaine étanttrop chère et classiquement extraite de pancréas ...
Applications :  Par   exemple    on   peut   utiliser   leclonage bactérien pour préparer unesonde moléculaire dans la mét...
Conclusion   Le clonage est un mode de reproductionpermettant la copie dune cellule ou dunindividu (son clone) à partir de...
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  1. 1. REPUBLIQUE ALGERIENNE DE DEMOCRATIQUE ET POPULAIAREMINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE UNIVERSITE MOUHEMED KHIDER- BISKRA FACULTE DES SCIENCES EXACTE ET DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE DEPARTEMENTDE DE SCIENCE DE LA NATURE ET DE LA VIE Option: biochimie et biologie moléculaire - Master 1 Module : culture cellulaire Présenté par: - Hattouche Nour el-houda. - Hiouani Samia. *ANNEE UNIVERSITAIRE 2011/2012*
  2. 2. Sommaire*Introduction *Mecanisme du clonage -clonage par plasmide. -clonage par phage.*Definition du clonage *Example clonage phagique*Principe du clonage *A quoi sert le clonage*Quelque definitions * l’utilisation du clonage *Conclusion
  3. 3. Introduction La biotechnologie moderne, fondée sur la manipulation del’ADN ,permet de modifier et /ou d’analyser des gènes de manièrespécifique . Elle permet aussi de les transférer entre des organismesaussi distincts que des bactéries ,les plantes et les animaux. Elle se base sur le génie génétique ,qui regroupe lestechniques permettant de manipuler l’ADN in vitro ,on peut ainsifabriquer de l’ADN recombinant, une molécules d’ADN contenantdes séquences nucléotidiques provenant d’au moins deux sourcesdifférentes. Parmi ces techniques , on a la technique de clonagemoléculaire .à quoi sert cette technique ?
  4. 4. Définition Terme issu du grec klôn : rejeton. Le terme clonage estlopération qui à partir de cellules isolées, permet dobtenir unelignée (plusieurs cellules similaires appelées clones) dérivantdun seul ancêtre. Lorsque les scientifiques parlent de clonage génétique, ils nepensent pas à la reproduction dun organisme mais plutôt àcelle dun gènes spécifique. Le clonage génétique est unélément du génie génétique.
  5. 5. Le principe du clonage: Le principe du clonage est simple. Il consiste à insérer un segment dADN étranger dans une petite molécule capable de se répliquer de façon autonome. Ce type de molécule dADN est appelé un vecteur de clonage. Un vecteur de clonage courant est le plasmide bactérien. LADN du plasmide est coupé par une enzyme de restriction et lié in vitro au fragment dADN étranger coupé par la même enzyme de restriction ou une enzyme qui donne des extrémités compatibles. Lorsquun transformant stable a été obtenu, la séquence est dite clonée.
  6. 6. quelques definitions :• Les enzymes de restriction : Sont une sorte de ciseaux moléculaires servant à couper lADN en des sites bien précis, Ces enzymes sont des endonucléases ; elles possèdent donc un site actif d’hydrolyse de l’ADN, mais aussi un site de reconnaissance de la séquence cible, aussi appelée site de restriction
  7. 7. • Notion d’ADN recombinant: Il s’agit d’un ADN hybride obtenu au laboratoire par la combinaison de deux ADN appartenant àdeux espèces diffèrentes.• Notion de vecteurs : On appelle vecteur l’ADN dans lequel on insère le fragement d’ADN à ètudier.l’ADN insère est appelè insert ou ADN ètranger ou ADN exogène.cette sèquence nuclèotidique est capable de s’auto-rèpliquer.
  8. 8. • Notion de clone Le clone correspend à un grand nombre de molècules ou de cellules identiques provenant d’un seul ancètre(cellule ou molècule).l’opèration qui consiste à obtenir ce grand nombre de cellules ou de molècules s’appele le clonage.• Les banques d’ADN complèmentaire (CADN) Les ADN complementaires(ou CADN)proviennent des mARN et donc ne possèdent pas d’intron.Apartir d’un même type de cellules.on prèpare les mARN totaux de ces cellules puis les CADN correspondants.ces derniers insèrès dans des vecteurs constituent une banque de CADN.
  9. 9. • L’ADN ligase : Sont des enzymes qui sontcapables de reconstituer la liaisonphosphoester.
  10. 10. Mecanisme du clonage:• Isolement de l’ADN à partir des plasmides des bactéries et de l’ADN de cellules humaines.• Action de l’enzyme de restriction.• Action de la ligase.• Réintroduction des plasmides dans les bactéries.• Identification des plasmides recombinés.
  11. 11. A quoi sert le clonage?L’utilisation du clonageProduction des vaccins Déterminant antigénique introduction du gènecorrespondant dans les cellules procaryotes oueucaryotes protéines vaccinantes. Exemple: protéine vaccinante contre la rage etl’hépatite B. Le gène recombiné provient de l’agent pathogène etcode l’antigène responsable de l’immunisationprotectrice.
  12. 12. Production d’hormones La synthèse chimique de l’insuline humaine étanttrop chère et classiquement extraite de pancréas debovins et porcins. A partir de 1983, de l’insuline humaine produitepar culture d’Escherichia coli a commencé à êtrevendue en pharmacie d’autres hormones ont étéégalement produit par génie génétique tel que :l’hormone de croissance, GRF (Growth hormonReleasing Factor) des expériences ouvrent desperspectives intéressantes pour l’augmentation deproduction laitière bovine en utilisant ce facteur.
  13. 13. Applications : Par exemple on peut utiliser leclonage bactérien pour préparer unesonde moléculaire dans la méthode deSouthern, pour produire certainesprotéines (médicaments, polymérases)ou encore pour rechercher un gène dansle génome (clonage positionnel).
  14. 14. Conclusion Le clonage est un mode de reproductionpermettant la copie dune cellule ou dunindividu (son clone) à partir de son ADN.Sauf erreur ou mutation lors du recopiage,le clone est génétiquement identique àloriginal: il a même ADN. Dans la nature, certaines espèces nonsexuées comme les bactéries utilise leclonage pour se reproduire. En laboratoire,on lexpérimente sur des espèces sexuées.

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