1. Les plasmides

2.  Introduction
 Définition des plasmides
 Les types des plasmides
 Autre propriétés
 Les plasmides comme vecteurs
 Comment on obtient les plasmides?
 Mode d’insertion des plasmides
 La selection des bactéries transformé
 Application des plasmides
 Conclusion
 Référence

3. En 1952 JOSHUA LEDBERG découvert les plasmides lorsque leur études des
salmonelle
dans notre exposer en va voire les types ; des propriétés en plus les plasmides
comme des vecteurs de clonage .

4.  Les plasmides: sont des petites molécules circulaires d’ADN double brin qui existe
indépendamment du chromosome , elles sont capables de se répliquer de manière
autonome .
 Les plasmides ont relativement peu de gène généralement moins de 30
leur information génétique n’est pas nécessaire à l’hôte et les cellules(Prescott et al;2010).
 Les plasmides transmissibles de façon stable à la descendance(primerose et al;2004).
 les plasmides ne sont pas circulaire toujours . Par exemple, les plasmides de
Streptomyces sp et Bor relia burgdorferi sont linéaires et sont protégés de l’attaque des
nucléases par une association covalente avec une protéine (Str eptomyces) ou par la
formation d’une structure en épingle à cheveux (Bourrelai)(primorce et al;2004).

5.  1- des plasmides de fertilité:
 Plasmide porteur des gènes de la conjugaison Bactérienne transforme sa cellule
hôte ou cellule donneuse , ex plasmide F E coli. (Prescott et al ; 2010).
 c'est a dire qu’ont un rôle dans la formation d’un couple de cellules ( Michael Met
John Martinko ;2007 ).

6.  Des plasmides R qui portent des gènes codants une résistance aux antibiotiques
sulfamides, streptomycine et à la spectinomycine et ç la tétracycline ex:R100 (
Michael Met John Martinko ;2007)

7.  les plasmide de virulence rendent les bactéries plus pathogènes .
 Exemple Ti: plasmides inducteur de tumeur trouvé chez la bactérie
agrobacteium tumefaciens .(Prescott et al ;2010).

8.  Qui porte des gènes cordant pour des enzymes qui dégradent des substances telles
que composée aromatique ,glucides… (Prescott et al 2010).
 5- plasmide col:
 col contiennent des gènes de synthèse de bactériocines connues sous le nom de
colicine . Les bactériocines son des protéines bactériennes qui détruisent d’autres
bactéries (Prescott et al;2010) .

9.  F Les plasmides sont des ADN CCC (Covalent Ly Cl osed Circles), mais si un des
deux brins est ouvert, ils sont des ADN OC (Open Circle). (Primorse et al 2004).
Forme I : forme relachéeOC Open Circle
orme II : Forme normale surenrouléeCCC Covalent Close
Circle
Fig1: les formes des plasmides.
www.sante.univ-nantes.fr/med/ticem/.../1444.pdf

10. Certains plasmides ne cohabitent pas durablement dans la même bactérie (F’gal et
F’lac), culture en milieux non sélectifs . Elimination de l’un des
plasmides => compétition(www.sante.univ-nantes.fr/med/ticem/.../1444.pdf)

11. - un vecteur faut contiens :
 origine de réplication
 Un marqueurs permette la sélection
 Une région permette d’inséré fragment d’ADN exogènes.
Fig2 :vecteur plasmidiques (Lodish et
al,2005)

12. La plus utiliser => lyse alcaline
 Lyse : altération des enveloppes bactériennes
Alcaline : dénaturation ADN
 après => La neutralisation :
L'ADN chromosomique étant très long n'arrive pas à se rapparier
L'ADN plasmidique plus court arrive à se reformer à l‘état initiale
 Ultracentrifugation à l’équilibre de densité:
CsCl + bromure d’ethidium(http://bioinfo2010.wordpress.com/).
Fig3: lextraction des plasmides apartire gradien de CsCl(Prescott et al;2010) .

13.  1- préparation du plasmide et l’insert par la coupure de même enzyme de
restriction.
Fig4: préparation l’insert et plasmide .
ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

14. Pour éviter la recirculation
Fig5 réparation par phosphatase alcaline.
ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

15. Fig6: mode d’insertion des plasmides
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Recombinant_DNA.JPG

16.  Les plasmides peut inséré a laide d’une choc thermique ou électrique
Fig7: l’utilisation de choc électrique pour l’introduction les vecteur plasmidique.
mon.ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

17.  Le taux de transformation des bactéries est généralement très faible.
 Si on utilise un gène de résistance dans plasmide on obtient une sélection séparer les
bactéries comportant des plasmides et les bactéries sans plasmides car ces dernières
sont tuées.
 cette méthode permet pas de distinguer les bactéries avec plasmides intacts des
bactéries avec plasmides recombinants.
 On utilise pour cela une résistance à un second antibiotique , ou plasmide a un gène
code (LacZ) pour un protéine β galactosidase.

18. Fig8: la double sélection
mon.ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

20.  En agriculture.
 En médicine:
-Production des hormones et des protéines :
-insuline → traitement de diabète.
-Interférons α β, δ agent antiviraux , anti-tumoraux et anti-inflammatoires.
-Streptokinase →anticoagulant (Prescott et la ; 2010).

21. Les plasmides sont utilisées par les bactéries comme moyen d’adaptation mais il
y a un grand développement d’utilisation des plasmides permettre de développer
plusieurs sciences et défend plusieurs maladies.

22.  _MICHAEL T.MADIGANT et JOHN M. MARTTNKO 2007
 Brock Biologie des micro – organismes 11 e Ed PEARSON France , 1047P.
 _PRESCOTT , HARLEY , KLEIN , WILLEY , SHERWOOD et WOOLVERTON 2010
Microbiologie 3eEd De Boeck Paris . 1088 P.
 _S. PRIMROSE , TWYMAN et R. OLD 2004 GENIE GèNETIQUE 6eEd De Boeck
Pris . 400 P .
 _ WILLIAM , S.KLUG , MICHAEL , R. CUMMINGS et CHARLOTTE , A. SPENCER ,
2006 Genetique 8eEd PEARSON Paris .704 P
 http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Recombinant_DNA.JPG
 .ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf
 www.sante.univ-nantes.fr/med/ticem/.../1444.pdf