Développement de nouveau antipaludique: ou en est-on avec la ferroquine? - Conférence du 6e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - BROCARD Jacques - France - jacques.brocard@univ-lille1.fr

1. UNIVERSITE DES SCIENCES ET
TECHNOLOGIES DE LILLE
1562
Fondation par Philippe II
roi d’Espagne
1854
Louis Pasteur fonde
la Faculté des Sciences de
l’Université de Lille
Il en est le premier Doyen.
Il travaille sur la fermentation de la bière ---> microbiologie
1

2. Stratégie innovante :
utilisation d’un composé organométallique
dans la lutte contre le paludisme.
Synthèse et pharmacologie spécifique
de la ferroquine.
J. BROCARD, C. BIOT, L. MACIEJEWSKI, J. LEBIBI;
Université des Sciences et Technologies de Lille ; France
D. DIVE; Institut Pasteur de Lille ; France
L. FRAISSE; Sanofi-Aventis
2

3. COMMENT DÉCOUVRE T-ON
UN NOUVEAU MÉDICAMENT?
3

4. MALARIA
IN THE WORLD
One third of
the world
population
is affected
Malaria remains the most important widespread parasitic disease
Clinical cases : 270 to 480 millions occured in Africa
Mortality : 1,5 to 2,7 millions a year,
Large majority in Africa, childrens aged 0 – 5 years
The major concern in the treatment of the disease :
increase resistance of the malarial Plasmodium falciparum to drugs.
- In Africa : chloroquine (Nivaquine) resistance 70%
- In Asia : mefloquine (Lariam) (important secondary effects) resistance4
50%

5. Factors impacting on malaria
Parasite resistance to drugs Increasing resistance to low cost treatments
(chloroquine, antifolates).
Mosquito resistance to Increasing resistance to low cost insecticides
insecticides (pyrethroids).
War and Civil disturbances Population migrations, collapse of Health services…
Environmental and climatic Global warming, associations with agriculture practice.
changes
Travel Increasing travel between endemic areas and free areas
in endemic countries.
Population increase Doubling of the population of countries with endemic
malaria in the past two decades.
Quasi-absence of new drugs Loss of interest in malaria programs during the last 25
years after the elimination of malaria in north America
and Europe.
5

6. A human,
a mosquito, Anophele gambia
a parasite, Plasmodium falciparum
6

7. Hôte intermédiaire : Anopheles gambiae
7

8. MOTIVATION?
pour prolonger une collaboration utile pour l’Afrique
avec Jacques Lebibi, ancien Membre du groupe
actuellement Recteur de l’Université de Masuku / Gabon..
8

9. Hypothèse : Vectorisation
Arrivée :
De la flèche au centre de la cible
Du médicament sur sa cible
--> Guider la molécule active vers le plasmodium
agent pathogène : Plasmodium falciparum
point vulnérable du parasite :
le Plasmodium falciparum a besoin de fer pour
son développement intraérythrocytaire
Notre stratégie simpliste :
combiner poison et appât
combiner chloroquine et atome de fer
9

10. L’atome de fer semble être le bon candidat
pour vectoriser la molécule vers le Plasmodium
le fer est le métal le plus important en biologie :
rôle dans l’hémoglobine
--> Problème : la séparation des ions en solution
Na Cl
Na+ Cl-
--> comment éviter cette séparation?
10

11. Chimie organométallique :
Liaisons fortes, non ioniques entre un métal et une molécule organique
Le ferrocène = molécule sandwich
Fe = Fc QuickTime™ et un décompresseur
Photo - JPEG sont requis pour visualiser
cette image.
Stable Thermiquement jusqu’à 400°C
Stable en milieu aqueux
11

12. Activités du groupe de Synthèse Organometallique
Synthèse de metallocènes chiraux comme auxiliaires
Catalyse homogène Asymmetrique
R1 R1 R1
H2
H + OH
R2 O
catalyseur R2 OH R2
H
50% 50% statistique
H2
> 99% < 1%
Catalyseur asymétrique
« efficace » = auxiliaire chiral + métal (Rh)
HO
* NHR
*
N NHR
Fe Fe
12
amino alcool diamine

13. Plasmodium falciparum a besoin de fer pour son développement
intraerythrocytaire.
N ous comb inons un pois on et un app ât = chlo roquine et ferrocene
NEt2
HN N NR2
Fe
Cl N chloroquine diamine
HN NMe2
Fe
ferroquine
Cl N 13

14. Analo gue of chlor oq uine (niv aquine)
Synthesis of ferroq uine
Starting materia l diméth ylaminome thylferrocene commercially availa ble
Fc
BuLi Fc DMF Fc
NH 2OH Fc
NMe2 NMe2 NMe2 N NMe2
Li HO
commercial CHO
(*) oxime
Fc
NMe2
Cl NH
réduction Fc +
NMe2
NH2
Cl N Cl N ferroquine
14

15. Attempts to optimize ferroquine activity
Effect of the nature of the side chain
R = N Et 2
Fc R with N
NH N R
R =
N
NCH3
Cl N = N
O
N
No improve ment in the antimalarial activity
ferroquine remains the most ac tive
15

16. Mo difica tion of the pos ition of the ferrocene moi ety
*1
Et Et
2 N
N
NH Et N Et
4
3
Cl N+
Cl N
chloroquine
Fc
5
Mole cules bear ing the ferroceny grou p in 3, 4 and 5 posi tions sy nthesiz ed.
activity low er or close to that of ferroquine (pos ition 1).
16

17. SYNTHE OF POTEN
SIS TIAL METABOLITE OF FER
S ROQUINE
Similarto chloroquine (IIandI terminal
amines)
Et Et H
N Et N H N H
HN HN HN
Cl N Cl N Cl N
chloroquine
Ferroquine expected
metabolites
Fc Me
Fc H
NH N H
NH N H
Cl N
Cl N
17

18. fe rroce ni c quin ine a nalogu es
quinine
Fc Fc
N HO NMe2 HO
HO N
MeO MeO MeO
N N N
activity be twe en chloroquine and ferroquine
against chloroqui ne -resi stant strains
ferroqu ine remains the most activ e
18

19. FERROCENIC D IHYDROARTEMISI NE AN ALOGU ES
A RTEMISININE isolat ed from Artemis ia annua L.
More so luble and more potent in hydrog enated form : dih ydroartémis inine
H CH 3
H CH 3
O
O CH 3
CH 3
O
O
O O
H H
O
O CH 3
CH 3
OH
O
ARTEMISININE DIHYDROARTEMISININE
Comb ination dihydroartemi sinine/ferrocene
via an ester or ether fun ction : analogy wi th arteme ther or artesu nate
19

20. With ether or ester function
H
O
O
O
H
O
H Fc
Fc Fc
H O N
Fc
Fc
O
CO 2 - Et +
CO 2 Na
two mol ecu les display activi ty close , but not m uch low er th an
artemis in ine a nd d ihy droartemi si ni ne
no in teres t for devel op me nt
fer roquine rema in s the most activ e 20

21. Compound Criteria FQ
Lipinski’s rule MW < 500 433.8
Calc. logP <5 3.9-4.7
(ACD) 5.1
H donors <5 1
H acceptors < 10 3
FQ fulfills the Lipinski’s criteria.
21

22. In vitro antimalarial activity of FQ
Antimalarial activity on strains of P. falciparum
Chloroquine sensitive : HB3 chloroquine resistant : Dd2, FCR3
IC 50 nM IC 50 nM
300
75 Chloroquine
Ferroquine
200
50
100
25
0
0 HB3 FCR3 Dd2
HB3 Dd2
Strain strain
Chloroquine-sensitive threshold is IC50 = 100 nM
Ferroquine : active against chloroquine-sensitive and chloroquine–resistant strains
22

23. In vivo studies(mice) P. bergh (CQ sensitive)
ei
Parasitemy study : ED50 etED90 (mg/kg):
daily doseduring 4 days,subcutaneous injection (SC)
CQ FQ
ED50 1,39 1,22
ED90 2,70 1,95
--> small difference CQ/FQ
Survival study : survival up to 40 days after the end of 4-daystest
CQ CQ CQ FQ FQ
Dose mg/kg/day (4 days) 1 10 20 1 10
Number of surviving mice 0/15 0/15 2/3 0/15 14/15
Higher sensitivity toerroquine
f
23
better survival ratio with ferroquine

24. Mi ce inf ected by P. yoelli
N S=CQ sensitive and N =CQ resistant
ED50 (mg/kg/j our) daily dose during 4 days,
orally (PO) or subcutaneous injection(SC)
CQ FQ
Pl. yoelli N SC 2,76 2,63
Pl. yoelli N PO 3,56 3,79
Pl. yoelli NS SC 8,53 2,63
Pl. yoelli NS PO 6,68 3,87
in vivo tests in agreement wt ih the in vitro results on resistant strain
Comparison oral administration / subcutaneous injection :
good absorption of ferroquine
24

25. Pharmacologie spécifique
in vitro Souches de laboratoire CQ, CI50 FQ, CI50
(nM) (nM)
3D7 12 7
HB3 22 20
D10 23 18
Dd2 62 19
W2 149 13
FCR3 152 21
K1 352 14
Isolats de terrain CQ, CI50 FQ, CI50
(nM) (nM)
Gabon (103) 370 11
Sénégal
CQS (24) 29 6
CQR (29) 351 10
Cambodgia (127) 129 31
Gabon Haut-Ogooué (116)
Franceville 141 16
Bakoumba 398 28
Gabon Lambarene (81) 113 2
Thaïlande (65) 341 9

26. Pharmacologie spécifique
in vitro Pas de résistance croisée CQ/FQ
Toxicologie
Test de Ames
in vivo Test FETAX
Test micro-noyau in vitro et in vivo
P. vinckei curative ~ 8 mg/kg/d

27. Synthesis of in vitro and in vivo ADME data
In vitro In vitro In vitro In vitro interspecies In vitro Intersubject Main
Solubility absorption absorption variability in mics Clearance in variability metabolites
human hep.
(Caco-2) (BBB) Qualitative Quantitative
SSR97193 Papp= 30 10-7 Pe = 0.8 10-3 Dog = Man Mk = Ms > 0.055-0.067 low N-demethyl
cm/sec cm/min R>D=H
CYP Inhibnitio Pharmacokinetics Blood cell Tissue Distribution
CYP Contribution
(IC50) (F %) distribution 10 mg/kg p.o.
-2C9 -2D6 -3A4 (%)
-2D6 -3A4 10 mg/kg 100 mg/kg Brain Liver
58 % 29 % 70-fold vs 2300-fold
SSR97193 ♠35% < 10 % ♠ 55% 4 µM 100 µM 68 to 85 % plasma vs plasma
Non linear response
No problem during drug development is anticipated
This parameter has to be investigated during development
This problem will slow down the development process
• following oral administration in humans
FQ should exhibit an adequate pharmacokinetic profile
following oral administration in humans
27

28. Mechanism of action
X-Ray crystal structures
neutral FQ charged FQ
monoclinic space group P21/n
stabilized by a strong
no intramolecular H-bond
intramolecular H-bond
N(24)•••(N11) distance = 4.07 Å
N(24)•••(N11) distance = 2.95 Å
proR and proS-H C(12)•••H(3)
proR and proS-H C(12)•••H(3)
distance = 3.49 and 2.18 Å
distance = 2.38 and 2.48 Å 28
Q and Fc are almost orthogonal

29. Mechanism of action
X-Ray crystal structures
packing diagram of the charged FQ
d = 3.32 Å
29

30. Deux “coups de chance” ou les atouts de la ferroquine
La ferroquine agit trois fois
Echec de la création
d’une souche de paludisme résistante à la ferroquine
30

31. La ferroquine agit trois fois
Dans le foie : métabolisation favorable
Fc CH 3
NH N
CH 3
Premier métabolite
Cl N
De la ferroquine :
Aussi actif
Ferroquine
Fc
H
NH N
CH 3
Cl N
Fc H 150
NH N
H chloroquine
100
ferroquine
Cl N-monodemethylé
N
N-didemethylé
50
Deuxième métabolite
De la ferroquine : 31
0
Presque aussi actif

32. Metabolic Pathways in Human Hepatic Models
NH2 NH2
OH
Cl N Cl N
Met "A" Met "B"
Fe CYP2C9 Fe H Fe
N N NH2
NH CYP3A4 NH NH
SSR97193 HH-3 HH-2
Met "D" Met "C"
Cl N Cl N Cl N
JBCQ19
Fe Fe
Fe Fe O O
OH OH
N N NH OH
NH OH NH OH
NH NH
Met "E" Cl N Cl N Cl N
Met "H" Met "F"
Cl N Cl N
Met "G"
HH-4, Glucuronide
HH-1, Glucuronide
32

33. In vitro Metabolism using Human Hepatocytes
• N-Demethyl Metabolite Formation
6 6
HTL-200 HTL-200
5 HTL-201 5 HTL-201
• SSR97193
4 4
3
Disappearance 3
2 2
1 1
0 0
0 6 12 18 24 0 6 12 18 24
TIME (Hours) TIME (Hours)
FQ exhibits an intermediary metabolic clearance ranging between 0.055
and 0.067 mL.h-1.(106 hep)-1 .
FQ disappearance quantitatively associated with N-demethyl metabolite
formation.
33

34. FQ and its enantiomers are equally active: in vitro on P. falciparum.
in vivo on P. vinckei. on chloroquine resistant and chloroquine sensitive strains .
(-)-Sp-ferroquine (+)-Rp-ferroquine
HN N N NH
Fe Fe
Cl N N Cl
in vitro
150
CQ
FQ
N=4 (+)-FQ
IC50 (nM)
100
(-)-FQ
N=4
Ferroquine can be
50
administrated in its
racemic costly form
0
HB3 Dd2
34
strain

35. Antimalarial activity of FQ enantiomers
Effect in vitro of SSR97193A enantiomers on P. falciparum strains :
IC 50 nM
FQ and its enantiomers are
equally active:
in vitro on P. falciparum.
in vivo
in vivo on P. vinckei.
on chloroquine resistant and
chloroquine sensitive strains .
Effect in vivo of FQ enantiomers on rodent strains :
Strains Way Dose (mg/kg/day)-mice survival
chloroquine SR97193B SR97211B SR97212B
P vinckei po 50 70 5 10 5 10 15 5 10 15
CQs 5/8 6/8 2/10 9/10 0/10 10/10 3/3 0/10 7/10
P vinckei po 300 400 5 10 5 10 15 5 10 15
CQr 0/10 0/5 0/5 5/5 2/10 8/10 10/10 0/10 5/10 10/10
35

36. CH2 OH CH2 OH
* N(CH3 )2 (CH3 ) 2 N
* enzyme C.r.L.
alcohol ester separation
Fe + Fe acétate de vinyl
racémique
O
CH 2 OH C
O * N(CH 3 )2
(CH 3 )2 N * CH3
Fe
Fe
ee > 98% ee > 86%
enzyme C.r.L.
MnO 2 BuOH
HOCH 2
* N(CH3 ) 2
CHO
(CH3 )2 N *
Fe
MnO 2
Fe
CHO
(-) ee > 98% * N(CH3 ) 2
Fe
36
FQ(-) ee > 98% FQ(+) ee > 98%

37. Mechanism of action
Inhibition of β-Hematin Formation
Collaborative work with Prof. Egan, Cape Town, South Africa
hematin
1662 cm-1
1209 cm-1
β-hematin
37
Egan et al., FEBS Lett. 1994, 352, 54-57

38. Mechanism of action
Inhibition of β-Hematin Formation
Collaborative work with Prof. Egan, Cape Town, South Africa
1662 cm-1
1209 cm-1
Infrared spectra of hematin in the presence of ferroquine (3 eq.)
∆ 60°C at pH 4.5 in 4.5 acetate solution
38

39. Mechanism of action
Molecular electrostatic potential (MEP) surfaces
similarity in the quinoline area similar mode of interaction with hematin
FQ / hematin should form parallel stacked complexes in aqueous solution
39

40. Mécanisme d’action de la chloroquine
Catabolisme de l’hémoglobine chez P. falciparum
N N
OH
Fe
N N
O OH
OH O

41. ECHEC DE LA TENTATIVE D’INDUCTION EXPERIMENTALE DE LA
RESISTANCE A LA FERROQUINE
Souche W2 aptitude importante pour acquérir la résistance à divers antipaludiques
(Rhatod et al, 1997, PNAS, 94, 9389-9393
Première expérience 0.86x1010 parasites, aucun parasite survivant après deux mois de
pression de FQ (100 nM )
Deuxième expérience 2.76x1010 parasites, très faible quantité de parasites survivants
MAIS : ces parasites meurent si on continue la pression ou si on arrête la pression de
FQ !!!
Subculture under FQ pressure Subculture without FQ pressure
50 50
P+ 1 P- 1
40 40
P+ 2 P- 2
PARASITES / 106 RBC
30 30
20 PARASITES / 106 RBC 20
10 10
0 0
30 40 50 60 70 80 30 40 50 60 70 80
DAY OF EXPERIMENT DAY OF EXPERIMENT
41

42. PROTOCOL :
Cooper et al., 2002, Mol Pharmacol, 6, 35-42
MONITORING EACH THREE DAYS BY GIEMSA CONFIRMATION BY FLOW
CYTOMETRY
Control RBC Control culture Under FQ pressure
42

43. COMPORTEMENT RED-OX DE LA FQ
Vacuole digestive = siège de réactions Red-Ox
--> production H2 O2 concentration = 15 micromoles
Réaction de Fenton
Fe 2+ + H2O2 ----> Fe 3+ + HO - + HO °
H H + Fe Cl2
H NaOH H H Na
+ H2O Fe++ Fe
H H H H
2 2
H
H
- e- - e-
Fe+++ Fe+
Ion ferricinium
43

44. 1) Stabilité de FQ en présence de H2O2 Spectroscopie MALDI-TOF
. MALDI-TOF spectrum of the FQ solution in presence of 100 equivalents of H2O2 at t0
and after 6, 24 and 31 hours.
390.96
389.95
385.11
t 31h 391.97 406.10
414.95 434.07
434.09
Le premier produit de
450.09
dégradation apparaît après 436.09
389.03 435.10
24h pour 10 mM de H2O2 t 24h 391.81 432.09 437.10
433.92
449.91
435.92
434.93
388.90
t 6h 391.45 431.93
436.92
434.06
436.06
435.06
389.01
432.07
to 391.75 437.06
380 396 412 Mass 428 444 460
44
(m/z)

45. 2) Etude électrochimique voltamétrie cyclique
Etude de FQ (II)/ FQ (III)
Cyclic voltammograms of ferrocene (green line), DMAF (black line), DMAF.HCl
(dark blue line), FQ (blue line), and FQ.2HCl (red line) recorded at 1 mM in acetonitrile (0.1
M TEAP)and at a scan rate of 100 mV/s.
200
Current density [ｵA/cm?]
150
ｵ
100
50
0
-50
-100
-150
-400 -200 0 200 400 600 800
Potential (mV) vs SCE
45

46. 3) Mise en évidence de la présence de HO°
EPR spin trapping spectra at room temperature .
(a) FQ.2HCl (1 mM), H2O2 (1 mM) (b) FQ.2HCl (1 mM),
H2O2 (15 mM) (c) simulated spectrum with hyperfine coupling
constants aH = aN= 14,9 G.
The final DMPO concentration was 0.16 M.
a
b
c
15G
46

47. Que peut on proposer?
On a montré que :
- La stabilité de la ferroquine est compatible avec les conditions internes à la vaccuole
digestive (H2O2)
- Dans ces conditions on observe la formation de l’ion HO°
FQ est en millimolaire et HO° en micromolaire
--> mais HO° réagit en 10 -9 secondes donc autour de son site de formation*.
FQ par sa lipophilie s’accumule au niveau des membranes où a lieu la polymérisation
de l’hème. Le mécanisme conduisant à la résistance ne peut avoir lieu.
Le mécanisme d’attaque des acides gras par HO°produit de la malonaldéhyde (et du 4 et 8
hydroxynonénal) qui réagit sur les NH2 en bout de chaîne pour former des ponts entre les
protéines.
Ces ponts sont détectables par anticorps spécifiques.
--> La mise en évidence de ces anticorps est notre prochain objectif.
*Aucun mécanisme contre les radicaux libres = pas de détoxification possible
47

48. Malaria and toxoplasmosis infections are caused by related
Apicomplexa protozoa:
Plasmodium falciparum and Toxoplasma gondii.
Recently, more attention to Toxoplasma gondii :
most common cause of focal encephalitis or focal
central nervous system abnormalities
in immunocompromised patients with AIDS or in transplant recipients
pyrimethamine plus sulfadiazine or clindamycin are the drugs of choice for therapy
but some patients are intolerant.
toxicity effects = allergies (especially in AIDS patients)
there is currently a great need for alternative therapies.
48

49. O H Cl
20 compounds bearing
OH H various ferrocenic groups
O to found the efficient substituent
atovaquone
R = (CH2)n:
O
Cl
N
R
OH Fe
H
O
OH
H
Chemical structures of the atovaquone and its different tested derivatives.
These molecules have been named APW following by there synthesis number.
49

50. 80000
Atovaquone
70000 APW15
APW16
60000 APW17
50000
40000
30000
20000
10000
0
0 5.10-8 5.10-7 1.10-6 2.10-6 5.10-6 1.10-5 2.10-5
Concentrations en µg/ml
Inhibitory effect of APW15, APW16 and APW17 compared
to the effect of atovaquone on atovaquone-resistant strains of T. gondii
R4A to R strain. 50

51. Anti HIV-1 Activity, Cytotoxicity, and
Selectivity Index in MT-4 Cells.
cpda EC50, µMb CC50, µMc SId
2 > 2.3 > 2.3 -
HN N X
3 2.9 ± 1.1 9.1 ± 6.6 3
Fe R 4 10 > 10 -
Cl N 2: R=H FQ > 2.4 > 2.4 -
3 : R = CH3
4 : R = C2H5 HCQ > 12 > 12 -
CQ 8.86 ± 1.18 54.4 ± 23.9 6
a FQ = ferroquine; CQ = chloroquine; HCQ = hydroxychloroquine
b Effective concentration required to reduce HIV-1-induced cytopathic effect by 50% in MT-4 cells.
c Cytotoxic concentration required to reduce MT-4 cell viability by 50%.
51
d Selectivity index: ratio CC50/EC50.

52. N X
Anti-coronavirus activity
HN
Fe R
Cl N 2: R=H
3 : R = CH3
4 : R = C2H5
cpda Feline coronavirusb Human corona (SARS) virusc
EC50, µM CC50, EC50, µM CC50, µM SId
µM
2 >4 12 ｱ 0 4.9 ｱ 4.3 23 ｱ 15 4
3 σ 10 12 ｱ 0 1.9 ｱ 0.1 30 ｱ 3 16
4 >4 13 ｱ 0 3.6 ｱ 2.0 61 ｱ 1 17
FQ 2.9 ｱ 1.2 12 ｱ 0 1.4 ｱ 0.1 20 ｱ 8.0 15
HCQ 28 ｱ 27 84 ｱ 14 34 ｱ 5 >100 >3
CQ >0.8 3.6 ｱ 0.3 6.5 ｱ 3.2 >100 >15
FQ = ferroquine; CQ = chloroquine; HCQ = hydroxychloroquine
b Feline corona virus in Crandell-Reese feline kidney (CRFK) cells
c SARS-coronavirus in Vero cells 52
d Selectivity index(for SARS-coronavirus): ratio CC /EC .
50 50

53. Motivation Premiers Évaluation
Drug Première Tests
Objectif Tests biologique
Design sélection biologiques
Concept de biologiques In vivo
synthèses Pharmacologie
recherche In vitro
“préliminaire”
Brevet :
Qui? projet
Quand?
Environs
5000 10 à 15
molécules molécules
Première phase : Recherche “amont” 2 à 3 ans
53

54. Production
Développement pharmaceutique
Pharmaceutique
Analyse/galénique
Toxicologie
Chien Clinique
Approbation Clinique Clinique Phase 3
rat
Pour l’étude Phase 1 Phase 2 Efficacité
pharmacocinétique clinique tolérance efficacité standard
Métabolisme
déceloppement FQ
chimique
Labo
puis pilote Production
chimique
4/5 2
molécules molécules
deuxième phase : troisième phase :
développement développement
préclinique 1 à 2 ans clinique 4 à 5 ans
54

55. Enregistrement Clinique
commercialisation Phase 4
AMM épidémiologie
9 à 13 ans
Enregistrement 2 à 3 ans Investissement
Coût total : 100-600 millions €
800 millions/1,2 milliards USD
(selon les sources) 55

56. 56

57. Collaborations Natio nales et Internationales
Participation des chercheurs du Sud
France :
Service de Parasitolo gie de la Facul té de Médec ine de L ille : Dan iel Camus,
Laurence D elhaes.
Insti tut Pasteur de Lille : Monique Capron, D aniel D ive, Huguette Abessol o,
Wassim Da her.
Insti tut de Médec ine Tropi cale du Se rvice de Santé de l’Armée : Colonel Parzy.
Gabon :
Universi té de Masuku à Francevi lle USTM : Jacques Lebibi
Centre In ternational de Recherches Médic ales de France vil le
Pascal M ill et, Ol ivier Domarle , Philippe D eloron.
Thaïlande :
Universi té Mahidol Bang kok : Juntra Karbw ang, Kesara Na -Bangchang
Universi té de Chiang Maï : Apiwat Baramee
Sénég al :
Universi té Cheikh Anta D iop de D akar : Chei kh N ’Di aye
Mad agascar :
Insti tut Malgache de Recherc hes A ppliquées : Philippe Raso anaivo
Camb odge :
Pasteur Inst itut : Thierry Fandeur
Afriq ue du sud :
Cape T own Universi ty : Thimo ty Egan, Kel ly Chibal
Organisa tion Mondiale de la Santé World Health Organiza tion :
Contracts, réun ione de travail à Genèv e. 57

58. Merci de votre
aimable attention
58