ELISA is a commonly used analytical biochemistry assay, first described by Engvall and Perlmann in 1972. The assay uses a solid-phase enzyme immunoassay to detect the presence of a ligand in a liquid sample using antibodies directed against the molecules to be measured.

1. La technique d’enzym linkedLa technique d’enzym linked
immunoSorbent AssayimmunoSorbent Assay
(E.L.I.S.A)(E.L.I.S.A)
Réalisé par : M Zidane QRIOUET

2. L’antigène : substance douée de la propriété de provoquer une
réponse immunitaire, soit humorale, soit à médiation cellulaire.
Définitions
•Les types d’antigènes

3. Définitions
http://www.technobio.fr/article-18589062.html
Les anticorps :

4. Définitions
Une enzyme qualifie une molécule, en général
protéique, qui catalyse des réactions biochimiques
chez un organisme vivant.
Les enzymes sont classées selon le type de
réactions qu'elles produisent en six classes : les
oxydoréductases, les transférases, les hydrolases,
les lyases, les isomérases et les ligases ou
synthétases.

5. Principe d’ELISA
La technique ELISA (Enzyme Linked
ImmunoSorbent Assay) est une technique
immunoenzymatique de détection qui permet
de visualiser une réaction antigène-anticorps
grâce à une réaction colorée produite par
l'action sur un substrat d'une enzyme
préalablement fixée à l'anticorps.
http://www.technobio.fr/article-18589062.html

6. Les différentes méthodes
existantes
DAS : Double Antibody Sandwich

7. • Nous allons détecter la présence
d’anticorps dans le sérum du patient
dirigés contre le VIH.

8. La première étape : le
« cotting » : il s’agit de
tapisser le fond des puits
avec des protéines de la
capside du VIH (antigènes)
par effet électrostatique

9. Deuxième étape : on
verse ensuite deux
gouttes du sérum à
tester dans le puits

10. Si le patient est
« contaminé », son
sérum possède des
anticorps anti-VIH

11. Ces anticorps anti-VIH
viennent se fixer sur les
antigènes qui tapisse le
fond du puits. On vide
ensuite le puits d’un
geste rapide.

12. Puis le puits est lavé
avec une solution
tampon pour enlever
les quelques anticorps
non fixés.

13. Troisième étape: on
verse l’anticorps de
détection. Il est couplé
à une enzyme: la
péroxydase.

14. Les anticorps de
détection se fixent
aux anticorps anti-
VIH.

15. Le puits est vidé et
lavé deux fois avec la
solution tampon

16. Quatrième étape:
On verse dans le puits la
solution révélatrice contenant
le substrat de la péroxydase: le
tétra-méthyl-benzidine (TMB).

17. Le TMB se colore en
bleu en présence de
l’enzyme

18. La coloration bleue indique donc la présence d’anticorps
anti-VIH.
L’intensité de la coloration est proportionnelle à la
concentration d’anticorps anti-VIH ; cette méthode permet
donc un dosage par colorimétrie