1. Le Virus de l’Hépatite Delta:
Virus et Marqueurs
Dr. Elyanne Gault
Laboratoire de Microbiologie
Hôpital Ambroise Paré
Boulogne-Billancourt
elyanne.gault@apr.aphp.fr

2. Le Virus de l’Hépatite Delta
Virus satellite du Virus de l’Hépatite B
Maladies graves du foie, aiguës ou chroniques
Diagnostic difficile
Traitement par l’Interféron-α partiellement efficace

3. Le virus de l’Hépatite Delta
sHD LHD
Ag HBs
HDV
(Virus de l’hépatite B) Virus défectif
Satellite d’HBV
(Bonino, J Virol, 1986; Wang, Nature, 1986; Ryu, J Virol 1993)

4. Le génome viral
sens génomique
1-1679
Homologie 70%
ARN 1679 nt
circulaire - polarité négative

5. ARN antigénomique
sens antigénomique
1679-1
ORF
1598 1012
ARNm sHD
ARNm LHD

6. Les protéines du VHD
DOMAINES
riche en aa riche en site
torsadé basiques arginines d’isoprénylation
LHD
30 51 66 88 97 146 195 214 aa
sHD
site de signal de site de signal
polymérisation localisation fixation d’assemblage
nucléaire à l’ARN
FONCTIONS

7. Le cycle de réplication HDV
AgHBs
Hépatocyte
R AgHBs
GO
LG
I/R
E
Transcription
CYTOPLASME
NOYAU
Réplication
ADN ccc
HBV

8. Le cycle de réplication HDV
Récepteur hépatocyte non identifié (idem HBV…)
Réplication via enzymes cellulaires (RNA pol)
Pas d’action des inhibiteurs d’enzymes virales
Inhibition de la réplication de HBV (LHD)
Pas d’action des inhibiteurs du HBV (Lamivudine)
Nécessité d’un niveau suffisant d’AgHBs
Rôle potentiel des inhibiteurs de l’ADN ccc de HBV
Etape finale clé (isoprénylation, interaction Ag HBs)
Rôle potentiel des inhibiteurs de l’isoprénylation

9. Diversité génétique
du virus de l’hépatite delta

10. Répartition géographique de l’infection chronique par HBV
Prévalence de l’AgHBs
< 2% - faible
2 à 7% - moyenne
> 8% - forte

11. Prévalence de l’infection par HDV
< 10% 10 à 20% 20 à 60% > 60%
Très faible endémie Faible endémie Endémie Moyenne Forte endémie

12. Variabilité génétique de HDV
PERU
VNZD8349
VNZD8624 HDV-3 HDV-4 L215
VNZD8375
MIYAKO
HDV-2
SOMALIA
ETHIOPIA JAPAN TAIWLEE
TW2476
LEBANON AF209859 PT26
NAURU TAIWU YAKOUSK6
dFr2139
TK6HDV
99 PT62 SOMALIA
100 100 100
TK5HDV
US2 HDV-6 100
100 100 100 100
HDV-1
CAGLIARI ETHIOPIA LEBANON
DFR48 100
HDViran
NAURUTK6HDV
100
ITALY HDV-1 100 TK5HDV
US2
W5 100 100
CAGLIARI
W15
100 W15
W5
US1 DFR910 95 100 ITALY
TK7HDV 100 100 HDViran
89 US1
TK3HDV HDV-5 69
100
99 90 TK7HDV
TAIWCHAO TK3HDV
DFR47 95 TAIWCHAO
TWD2667 100 TWD2667
CHINA 100
100 CHINA
DFR45 DFR73 100 100
dFr1986 100
dFr2158 dFr2005 100
dFR2072
DFR644
dFr2005
DFR73 DFR644
DFR47 dFR2072
DFR910 dFr2158
DFR48 HDV-8 dFr1986 DFR45
dFr2139
TAIWU HDV-7
AF209859
MIYAKO HDV-2b
L215
JAPAN HDV-3 PERU
TAIWLEE
VNZD8349
TW2476
PT26
HDV-2a Maximum de parcimonie
VNZD8375 VNZD8624
PT62
YAKOUSK6 Distance : Kimura-2
0.1

13. Variabilité génétique de HDV
100% des isolats HDV-5, -6, -7 et -8 correspondent à des patients nés en Afrique
NORTH MEDI
TERR
ANEA
IA
ATLANTIC N SE A
TUNIS
OCEAN
CO
OC
OR
M
A
R
A
H
SA
ALGERIA
N
LIBYA
R
EGYPT
TE
ES
W
MALI
dFr2072
MAURITANIA dFr910
dFr489
dFr1972 dFr2180 NIGER F OF
GUL EN
dFr69 SENEGAL AD
GAMBIA SO
A FA CHAD SUDAN
dFr2005GUINEA- GUINEA
BISSAU BU
RK
IN
BENIN
DJIBOUTI
dFr2401
TOGO
A
dFr47SIERRA dFr48
AN
IVORY NIGERIA
H
LEONE
ETHIOPIA
G
COAST
dFr2317 LIBERIA CENTRAL AFRICAN
IA
REPUBLIC
dFr2020 dFr73 dFr48 CAMEROON
L
A
dFr2502 dFr2055 dFr1953
M
dFr45 EQU.
É
dFr2204 UGANDA
M
O
TO
O
GUINEA
dFr644
S
dFr2301 dFr1986 GABON KENYA
NG
O
SÃ
dFr2154
O
dFr2066 RWANDA
C
ZAIRE INDIAN
dFr1843 BURUNDI
dFr2458 OCEAN
TANZANIA
S
RO
MO TT
E
CO AO
SOUTH M
ANGOLA A
BI
MA
ATLANTIC
dFr1594 M
L
ZA
AW
OCEAN
UE
R
I
CA
Q
BI
AS
M
ZIMBABWE
ZA
AG
NAMIBIA
O
M
AD
BOTSWANA
M
CA
HDV-5 RI
SWAZILAND
AF
H
HDV-6 UT LESOTHO
SO
HDV-7
MAURITIUS
HDV-8
RÉUNION

14. Variabilité génétique de HDV
NORTH MEDI
TERR
ANEA
IA
ATLANTIC N SE A
TUNIS
OCEAN
O
CC
ORO
M
A
R
A
H
SA
ALGERIA
N
LIBYA
R
EGYPT
TE
ES
W
MALI
MAURITANIA
NIGER F OF
GUL EN
SENEGAL AD
GAMBIA SO
FA CHAD SUDAN
GUINEA- NA
KI
BISSAU GUINEA B UR
BENIN
DJIBOUTI
TOGO
A
AN
SIERRA IVORY NIGERIA
H
LEONE
ETHIOPIA
G
COAST
LIBERIA CENTRAL AFRICAN
IA
REPUBLIC
CAMEROON
L
A
M
EQU. UGANDA
O
O
GUINEA
16% femmes enceintes AgHBs+
S
KENYA
NG
GABON
O
sont infectées par HDV RWANDA
C
ZAIRE INDIAN
BURUNDI
HDV-8 plus fréquent que HDV-1 OCEAN
TANZANIA
S
RO
MO TT
E
CO AO
SOUTH M
ANGOLA A
BI
MA
ATLANTIC M
L
ZA
AW
OCEAN
UE
R
I
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Q
BI
AS
M
ZIMBABWE
ZA
AG
NAMIBIA
O
M
AD
BOTSWANA
M
CA
RI
SWAZILAND
AF
H
UT LESOTHO
SO
MAURITIUS
RÉUNION
Makuwa et al, J Clin Microbiol 2008

15. Epidémiologie de HDV en France (CNR)
Janvier 2003 - Août 2006
650 échantillons
HDV-7 (3.5%)
HDV-6 (2%) HDV-8 (0.5%)
HDV-5 (15.5%)
HDV-1 (78.5%)

16. Caractéristiques des patients suivis en France (2001-2006)
n=605
- Homme (70,6%)
- Age médian: 40 ans (14ans à 83ans)
- Pays de naissance: Albanie (n=1)
Bulgarie (n=1)
Georgie (n=8)
Grèce (n=1)
Espagne (n=7)
Kosovo (n=1)
France (n=146) Moldavie (n=4)
Italie (n=21) Roumanie (n=18)
Portugal (n=6) Russie (n=7)
Suisse (n=2) Serbie (n=2)
Mongolie (n=3)
Turquie (n=16)
Vietnam (n=9)
Afrique du Sud (n=1)
Algérie (n=7)
Angola (n=1)
Bénin (n=1)
Burkina Faso (n=3) 9,8% Europe de l’Est (n=59)
Cameroun (n=74) 1,9% Asie (n=12)
Cap Vert (n=1)
Comores (n=1) 30,1% Europe de l’Ouest (n=182)
Congo Brazzaville (n=10)
Cote d’Ivoire (n=46)
Égypte (n=8)
Gabon (n=6)
Gambie (n=1)
Ghana (n=2)
Guinée / Guinée Bissau (n=17)
Madagascar (n=4) 54,2% Afrique (n=328)
Mali (n=45)
Maroc (n=9)
Mauritanie (n=14)
Mayotte (n=3)
Niger (n=1)
Nigeria (n=2)
République de Centre Afrique (n=32)
République Démocratique du Congo (n=4)
Sénégal (n=18) Antilles (n=2)
Sierra Léone (n=1) Colombie(n=1)
Tchad (n=5) Australie (n=1) 4% Autres (n=24)
Togo (n=4) Inconnue (n=20)
Tunisie (n=7)

17. Evolution de l’origine géographique des patients infectés par
HDV entre 2001 et 2006
Afrique : Europe de l’Ouest :
Afrique du Sud France
Algérie Italie
Angola 80%
Espagne
Bénin Suisse
Burkina Faso 70% Portugal
Cameroun
Cap Vert 60%
Comores
50%
Congo (Brazzaville) Europe de l’Est :
Cote d’Ivoire 40% Roumanie
Égypte Russie
Gabon 30% Moldavie
Gambie Turquie
Ghana 20% Serbie
Guinée Bulgarie
Madagascar 10%
Georgie
Mali Kosovo
Maroc
2001 2002 2003 2004 2005 2006
Mauritanie
n=127 n=101 n=43 n=65 n=171 n=110
Mayotte
Niger Asie :
Nigeria Mongolie
Répub.Centrafrique Vietnam
Répub. D. Congo
Sénégal
Tchad Inconnu
Tunisie

18. Evolution des génotypes HDV entre 2001 et 2006
90%
80%
70% HDV-1
60%
50%
40%
30%
HDV-5
20%
10%
HDV-6, -7, -8
2001 2002 2003 2004 2005 2006
n=127 n=101 n=43 n=65 n=171 n=110

19. Epidémiologie de HDV en France
Circulation de virus d’origine africaine
Emergence de nouveaux génotypes en France
Pouvoir pathogène des variants par rapport aux virus HDV-1
Diagnostic moléculaire des variants
Association des variants HDV avec certains génotypes
HBV (co-spéciations?)
Origine géographique de HDV?

20. Marqueurs diagnostics de l’infection
par HDV

21. Diagnostic de l’Hépatite delta
MARQUEURS DISPONIBLES
Sérologie
Ag delta sérique (pas de valeur diagnostique)
Ac anti-delta totaux (dépistage)
IgM anti-delta (infection aiguë, réplication)
Marqueurs moléculaires (techniques « maison »)
Recherche qualitative de l’ARN delta (sérum)
Quantification de l’ARN delta (sérum)

22. Infection aiguë résolutive
ARN Delta
IgM anti-Delta
Ag Delta
IgG Anti-HD
Primo-infection Hépatite aiguë

23. Infection chronique
ARN Delta
IgG Anti-HD
IgM anti-Delta
Primo-infection Hépatite aiguë Hépatite chronique

24. Indications: dépistage
PORTEURS CHRONIQUES de l’ Ag HBs :
PENSER AU DEPISTAGE DU DELTA
(Ac anti-delta totaux)
IgG Anti-HD
Hépatite chronique

25. Dépistage positif
ARN Delta
IgG Anti-HD
IgM anti-Delta

26. Marqueurs du suivi thérapeutique
Apport essentiel des techniques moléculaires
PCR Qualitative (à Avicenne) :
Technique maison « consensus » pour tous les génotypes connus
Seuil de sensibilité 100 copies/mL
PCR Quantitative:
Technique maison « consensus » pour tous les génotypes connus
Seuil de sensibilité 100 copies/mL - Linéarité: 103 à 109 copies/mL
Intérêt secondaire des IgM
Moins sensible que la PCR (faux négatifs) et moins spécifique de la
réplication virale (faux positifs)
Kits ELISA commerciaux
Recherche de l’ARN viral intra-hépatique
Suivi quantitatif de l’Ag HBs
Zachou et al, Liver Int, 2009; Manesis et al, Antiviral Therapy, 2007

27. Marqueurs du suivi thérapeutique
Service d’Hépatologie
Hôpital Général Hippokration
Athènes
E. Manesis
Quantitative analysis of HDV-RNA and HBsAg serum
levels in chronic delta hepatitis improves treatment
monitoring
E. Manesis, M. Schina, F. Le Gal, O. Agelopoulou,C.
Papaioannou, C. Kalligeros, V. Arseniou,
S.Manolakopoulos, E. Hadziyannis, E. Gault, J. Koskinas,
G. Papatheodoridis and A. Archimandritis
Antiviral Therapy, 2007, 12: 73-82

28. Protocoles thérapeutiques
Service d’Hépatologie
Inserm U481
Hôpital Beaujon
P. Marcellin, C. Castelnau
Efficacy of Peginterferon alpha-2b in Chronic
Hepatitis delta: Relevance of Quantitative RT-PCR for
Follow-Up
C. Castelnau, F. Le Gal, M.P. Ripault, E. Gordien, M.
Martinot, N. Boyer, B. Pham , P. Bedossa, P. Dény, P.
Marcellin, E. Gault
Hepatology, 2006, 4: 728-735

29. OBJECTIFS
- Evaluer l’efficacité et la tolérance d’un
traitement de 12 mois par Interferon-PEG α-2b
chez 14 patients porteurs d’une hépatite
chronique B-D.
- Evaluer l’intérêt de la quantification de l’ARN-
VHD dans le suivi et la réponse virologique

30. RESULTATS
n=14
12 mois PEG-Interferon α2b
PCR HDV qualitative et quantitative
- Avant mise sous traitement
-Au cours du traitement
- Au cours du suivi post-thérapeutique
43% répondeurs 43% non
répondeurs
14% répondeurs-
rechuteurs

31. Profils de réponse au traitement: REPONDEURS
8
7
Charge virale
6 (log10 copies/mL sérum)
Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL
5
4
3
2
5
ALT (xN)
4
3
2
1
T0 M6 M12 M18 M24 M41

32. Profils de réponse au traitement:
REPONDEURS - RECHUTEURS
8
7
6
Charge virale
5 (log10 copies/mL sérum)
Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL
4
3
2 ARN intra-hépatique?
22
ALT (xN)
4
3
2
1
T0 M6 M12 M18 M24 M30

33. Profils de réponse au traitement: NON REPONDEURS
8
7
6
5 Charge virale
(log10 copies/mL sérum)
4
Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL
3
2
5
4 ALT (xN)
3
2
1
T0 M6 M12 M18 M24 M30

34. Profils de réponse au traitement: REPONDEURS LENTS
8
7
6 Charge virale
5 (log10 copies/mL sérum)
Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL
4
3
2 ARN intra-hépatique?
8
ALT (xN)
4
3
2
1
T0 M6 M12 M18 M24 M30

35. 9
7
6
HDV-RNA
5
4
3
HBV-DNA
2
22
4
3
2
ALAT
1
PEG-IFN Lamivudine
T0 M6 M12 M18 M24 M30

36. Protocoles thérapeutiques
Etude multicentrique (Turquie)
C. Yurdaydin
Treatment of chronic delta hepatitis with lamivudine
vs lamivudine+interferon vs interferon
C. Yurdaydin, et al
J Viral Hep, 2008, 15: 314-321
39 patients (17 LAM, 14 LAM-IFN, 8 IFN)
Suivi par PCR semi-quantitative (seuil de
détection 100000copies/mL)
Aucun intérêt à utiliser la lamivudine,
même en association avec IFN

37. Protocoles thérapeutiques
Case report
Resolution of chronic hepatitis delta after 1 year of combined
therapy with PEG-IFN, tenofovir and emtricitabine
Mansour W, Ducancelle A, Le Gal F, Le Guillou-Guillemette H,
Abgueguen P, Pivert A, Calès P, Gordien E, Lunel F
J Clin Virol 2009
Homme 47 ans Dagestan
CV HBV >9 log UI/mL
CV HDV 5.6 log copies/mL
Association PEG-IFN + tenofovir + emcitrabine (Viread)
Clairance virale + séroconversion HBs après 10 mois de
traitement