3. Depuis plus d’une vingtaine d’année les anticorps
thérapeutiques ont permis de grandes avancées
en recherche biomédicale .
Ils sont très largement utilisés en biologie et
en médecine, à la fois comme outils de
diagnostic et dans des buts thérapeutiques.
4. macromolécules protéiques (PM > 150 000 Da)
Issu d’ un clone unique de lymphocyte B
Reconnaissent le même épitrope d’un antigène
mélange d'anticorps reconnaissant
différents épitopes sur un antigène donné
sécrété par un clone de plasmocytes
différent.
5. ACM ACP
Temps et cout de
fabrication
Rapide et moins cher Lent et plus cher
Reproductibilité Variable Constante
Affinité Variable Constante
Concentration et degré
de pureté
Faible Elevé
Stabilité de pH Plus stable Moins stable
Disponibilité Limitée Illimitée
9. Culture sur milieu HAT
(Hypoxanthine Aminoptérine
Thymidine)
Méthodes
D’IMMUNOPRECIPITATION
Une ou zéro
cellules par puit
Par méthode PHYSIQUE
Fusion des membranes
cellulaires Par
ELECTROPORATION
HYBRIDOME
SELECTIONNE
Dès que la croissance est suffisante, il faut
propager les cultures d'hybridomes productrices de
l'anticorps désiré, les conserver et les cloner. Deux
méthodes sont utilisées pour obtenir un clone à
partir d'une cellule
Conservation
Des hybridomes
Amplification
des
hybridomes
La présence
d’ANTICORPS MONOCLONAUX
Type
D’ANTICORPS produits
Test sur le surnageant
de chaque puie
Méthode
ELISA
Sur milieu gélosé
Par dilution limite
Une colonie = une
cellule initiale
Lymphocyte BPar méthode CHIMIQUE
Fusion des membranes
Cellulaires avec du
PEG (poly éthylène glycol)
IMMUNISATION DE LA SOURIS
AVEC L’ANTIGÈNE ÉTUDIÉ
produits par la technique des Hybridomes
Cellule myélomateuse
MORT CELLULAIRE
disparition après
quelques divisions
MORT CELLULAIRE
Impossibilité de se diviser
OBTENTION DES
ANTICORPS MONOCLONAUX
Production dans
les liquides d'ascites
Production par
cultures cellulaires
Les premiers anticorps développés.
10. correspond à la greffe des
parties variables (VH et VL) d’un
anticorps murin sur les parties
constantes des chaines lourdes
et légères (CH et CL) d’anticorps
humain
humains a 60%
11. correspond à la greffe des parties
hypervariables (CDR)) d’un Anticorps murin
sur une immunoglobuline (Ig) humaine.
humain a 90%
Ils sont mieux tolérés par l’organisme.
Une demi-vie plus longue
12. Immortalisation des cellules B
mémoires humaines
Techniques des phages display
Techniques des souris transgéniques
19. Cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps(ADCC)
l'interaction domaine Fc-récepteurs FcγRs
FcγR : trois sous-groupes
FcγRI (CD64),
FcγRIIa, b, c (CD32a, b, c)
FcγRIIIa, b (CD16a, b),
Cellule dendritique
20. • Anticorps anti CD 20
• Chimérique
• Spécifique des cellules B, par intermédiaire du CD 20
• Toxicité faible
• Activité importante dans les lymphomes B folliculaires et le rejet humoral
de greffe
• Induction de l’apoptose (voies de signalisation) + Activation de l’ADCC et
CDC
• Très prometteur
Signalisation
Ex. Rituximab
24. Applications
• Immunologie fondamentale
– Etude des lignées cellulaires
– Etude des marqueurs des cellules non lymphocytaire
– Etudes des cellules pathologiques
– Protéomique
– Drug discovery
• Thérapie
– Traitement de cancer (cancer du sein)
– Traitement des rejets de greffes
– Anticorps catalytiques : enzymothérapie
– Vaccin ?
• Fusion avec de nombreux ligands
– Radioisotopes Imagerie médicale (RAIT)
– Enzymes Thérapie
– Toxines Destruction de cellules (Immuntoxines)
– Virus Thérapie génique
– Lipides Libération de médicaments
– Biocapteurs Détection en temps réel
• Diagnostic Chromatographie
– Phénotypage
– Cytométrie en flux
– Imagerie médicale
– Ligands pour la chromatographie
31. Exploitation du potentiel des anticorps catalytiques
Protection contre le VIH
Lutte contre la maladie d’ Alzheimer
Lutte contre l’addiction
Application en oncologie avec l’adaptation du système ADEPT (pour Antibody Directed Enzyme
Prodrug Therapy). Cette stratégie à été nommée ADAPT (pour Antibody Directed Abzyme
Prodrug Therapy)
Les cellules B mémoires (CD22 + IgM, IgD, IgA) sont isolées à partir de cellules mononuclées du sang périphérique,
Elles sont immortalisées par l'EBV en présence d'oligodésoxynucléotide CpG qui stimulent la prolifération lymphocytaire B par l’intermédiaire des récepteurs TLR9. Les surnageants de cultures sont ensuite testés afin de sélectionner les clones cellulaires produisant des anticorps humains spécifiques de la cible d’intérêt.
Introduction des genes humaines des igG pour obtenir des souris transgéniques possèdant à la place des loci de gènes d’immunoglobulines murines des loci de gènes d’immunoglobulines humaines.
après immunisation avec un antigène-cible on va récupérer les LB et les fusionnées aves des cellules myeloides pour obtenir des hybridomes.
Après les étapes de criblage et de sélection, des hybridomes humains sont obtenus.
Des étapes de clonage par dilution limite permettent alors de produire un anticorps monoclonal contre l’antigène d’intérêt.
