L'immunothérapie par la vaccination active de la 2éme génération de CAD106 : réduit l'accumulation de amyloïde chez les souris transgéniques exprimant APP; ainsi que les éventuelles effets secondaires.

1. L'immunothérapie par la vaccination active
de la 2éme génération de CAD106 : réduit
l'accumulation de amyloïde chez les souris
transgéniques exprimant APP; ainsi que les
éventuelles effets secondaires.
Travail réalisé par:
DRAOUI Jihéne
SAIDI Nasreddine
Faculté des Sciences de Tunis
Département de Biologie
1

2. Plan
2

3. Introduction
Matériels et méthodes
Résultats
Discussion
Conclusion
3

4. Introduction
4

5. Définition
• La maladie d’Alzheimer est une maladie
neuro-dégénérative irréversible du système
nerveux central associée à une perte
progressive de la mémoire et des fonction
cognitives.
5

6. L’Alzheimer est appelé aussi la maladie des 4 A :
Amnésie
• trouble de
la mémoire
Apraxie
• trouble des
gestes
Agnosie
• trouble de
la
perception
(les sens
sont
perturbés)
Aphasie
• trouble de
langage
(mal parler
et ne
comprenne
plus les
mots)
6

7. Historique
1901:première
examination d’une
patiente (Auguste
Deter) atteinte par
une démence par
Alois Alzheimer
1906:première
observation
microscopique au
niveau du cortex
d’Aguste.D qui
était décédé
1911: première
publication plus
détaillé sur la
maladie
7

8. Les signes histologiques
La maladie d’Alzheimer se caractérise par
différents types de lésions:
•Atrophie cérébrale : perte importante du
poids du cerveau avec atteinte précoce des
neurones dans l’hippocampe
•Les formations des plaques séniles: ce
sont des dépôts protéiques extracellulaires
d’une substance amyloïde
•Les dégénérescences neurofibrillaires:
dépôts de la protéine Tau anormalement
8

9. Alzheimer
Accumulation
des plaques
amyloïdes à
l’extérieur des
neurones
Accumulation
intracellulaire
de la protéine
Tau hyper
phosphorylé
9

10. Origine de la maladie
10
l’hypothèse la plus admise est celle de la
cascade amyloïde
Proviennent d’une accumulation des formes
oligomériques du peptides A 1-42
Suite à des mutation dans certains gènes

11. Au moins 4 gènes sont impliqués dans la régulation
du métabolisme du peptide Ab et qu’ils jouent un
rôles dans l’apparition de la maladie
11
APP PS1
PS2 ApoE

12. • Clivage préférentiel des g-
sécrétases
Mutation
dans l’APP
• Augmente l’affinité de
celle-ci pour l’APP
• Augmente la production
du peptide A
Mutation
dans les
protéines
PS1 et PS2
• Diminue l’élimination du
peptide A 1-42
Mutation de
gène ApoE
12

13. • Le peptide -amyloïde est constitué de 42
acides aminés et est produit par endoprotéolyse
de la protéine APP (Amyloid Precursor
Protein).
• L’APP est une protéine transmembranaire qui
subit des clivages protéolytiques par trois types
de sécrétases
-amyloïde et APP
13

14. Formation de -amyloïde
La b-sécrétase coupe en position
99 de la partie C-terminale d ’APP.
Libération du fragment
sAPPb dans l’espace
extracellulaire
Le fragment C-terminal C99
reste dans la membrane.
Les γ-sécrétases coupent au
niveau de la partie C-terminale.
Formation des oligomères d’Ab et
qui ne sont pas dégradés.
14

15. 15

16. Evolution du vaccin
16
La vaccination
contre l'amyloïde β-
(Aß)
Peut réduire l'accumulation
d'amyloïde in vivo
Considérer comme une
approche thérapeutique
potentielle
Il a été associé à la méningo-
encéphalite pensé être médiée par
des lymphocytes T inflammatoires
Raison de l'utilisation de l'Aß
Contient des épitopes de
cellules T
Les essais ont été arrêtés

17. Objectif
17

18. La mise au point d’une immunothérapie qui
permet une immunisation active destiné à
déclencher une défense immunitaire de
l’organisme contre les bêta-amyloïde sans le
risque d’engager des LTc à développer une
méningo-encéphalite
18

19. Matériels et méthodes
19

20. Les Souris Transgéniques APP
20
L’Animal comprend
Une séquence d'acides nucléiques
codant pour tout ou une partie du
gène codant pour l'APP.
Développe des pathologies
similaires à la maladie d'Alzheimer

21. Immunisation/ prélèvements de tissus de souris.
• Dans l’immunisation passive
Injection d’anticorps dans le
cerveau
• Dans l’immunisation active
Injection du peptide A afin
de stimuler la production
d’anticorps endogènes
dans le but d’éliminer les
plaques séniles dans le
cerveau
21

22. Détermination des AC anti-Aβ
Dilution de sérum
Après dilution, on détecte la présence - d’anti Ig G de souris-Phosphatase Alcaline

23. 23

24. Détermination des cytokine : IFN-γ par
ELISPOT
24

25. Dosage des cytokines et chemokines dans le cerveau
Les taux de cytokines ou chemokines sont mesurées en utilisant
un cytométrie en flux AimPlex™ multiplex assay
Le principe est le même que celui de
l'ELISA sandwich
incubation avec
de la R-
phycoerythrine
intensité de la fluorescence de la R-
phycoerythrine présente sur les billes est
quantifiée par cytométrie en flux
25

26. Mise en évidence de l’Aβ dans le cerveau
26

27. Immuno histochimie
27

28. Résultat
28

29. immunisation avec CAD106
Ils ont mis en évidence la présence des cellules T activées et spécifiques de Aβ
Ils ont effectués une immunisation par
Aβ1-42
+ l’adjuvant
de Freund CAD106
10
Jours
après
Tous les animaux développent des anticorps anti-Aß
Isolation des cellules splénique + stimulation avec des Aβ et des
cellules T sécrétrices de TNFγ. 29

30. Analysis of Aβ-specific T-cells in mice immunized with CAD106 or Aβ1–42.
L’immunisation avec CAD 106 n’active pas les Aβ des cellules T
spécifiques in vivo
Les AB1-40 et Aβ6-20 contiennent les épitopes des lymphocytes T
30

31. La génération d'anticorps spécifiques de Aß chez les souris transgéniques APP
Immunisation par le CAD 106 Injection de PBS
Le test Le contrôle
Les souris immunisées par le CAD106 développent des IgG Aß spécifique
31

32. 32
Effet de l’ immunisation par CAD106 sur accumulation de
l’amyloide B
Immunisation par
CAD 106
Diminution du nombre des plaques, ainsi
que la surface couverte

33. Aucune différence de réponse des anticorps a été apparente entre les
souris transgéniques APP23 et APP24
Réduction des plaques amyloïdes accumulées
33

34. Réduction du nombre des
plaques amyloïde ainsi que les
zones de leur déposition au
niveau des quatre régions
examinées du cerveau.
Absence quasi-totale des
plaques amyloïde au niveau du
caudat et putamen .
Une réduction importante au
niveau de la totalité du cerveau.
34

35. Effet de l’immunisation par le CAD 106 ou de QB sur le dépôt
des plaques amyloïde
Souris APP24 âgée de 9.5 mois a
19.5 mois
La même lignés de souris traitées mais
à un stade plus avancé, de 13.5 mois a
19.5 mois
Au moment où une quantité
considérable d'amyloïde a déjà été
déposé dans le cortex et l'hippocampe
juste après le début du dépôt
amyloïde dans le néocortex
Chez les souris âgées le nombre de
plaques diminues mais des effets très
puissants ont été de nouveau observé
QB a lui seul n’a aucun effet sur
l’accumulation des plaques
amyloïdes chez les souris jeunes
35

36. Effet de l’immunisation par CAD 106 sur l’accumulation des plaques amyloides
Numéro de plaque
du néocortex
Pourcentage de la
superficie totale du
cortex
• Une réduction de 92% de la surface de la plaque
• Une réduction de 94% du nombre de plaques
Les anticorps induit par le CAD 106 ne provoque pas l’altération du
métabolisme des souris transgéniques APP in vivo mais affecte la disposition
des plaques amyloïdes
36

37. Dépôt de substance amyloïde dans le néocortex de souris APP24 après
immunisation par CAD106
Coloration d’amyloïde ß au niveau de sections de néocortex
de souris
PBS CAD106
Diminution de la diffusion des plaques
amyloïdes parenchymateuses
Augmentation de l'amyloïde vasculaire
37

38. Effet répresseur du CAD106 contre l’amyloïde chez les
souris APP23
Après immunisation avec
CAD106
Diminution de 47% du
nombre des plaques amyloïdes .
Diminution des zone de
plaque de petite taille
Réduction sélective des plaques de petite taille
d’Aβ
38

39. L’effet du CAD106 sur l’amyloïde vasculaire
Elévation du nombre de Aß contenant les
profils des vaisseaux sanguins dans certaines
mais pas toutes les études avec des souris
APP24 immunisés par CAD106
La diminution des dépôts amyloïdes au
niveau cérébrale est proportionnelle à
l’augmentation de l’amyloïdes vasculaire.
Déposition préférentielle de l’Aβ42 par
rapport l’Aβ40  CAD106 augmente le dépôt
de AB42 mais pas de Aß40 dans le système
vasculaire
39

40. CAD106 vs Microhémorragies
Immunisation passive (Aβ)
la cause majeur des
microhémorragies est l’amyloïde
vasculaire.
Immunisation active (CAD106)
APP24 : une seule Microhémorragie dans
l’étude contrôle.
→ Apparition rare.
APP23 (âgées) : plus de Microhémorragies
→ CAD106 ne provoque pas l’augmentation
des microhémorragies.
40

41. Evaluation de l’infiltration des cellules B et cellules T dans le cerveau
extraction du
cerveau de la souris.
Analyse ce cerveau par des
cellules B et des cellules T
Détection des lymphocytes péri
vasculaire occasionnellement
chez les souris âgées
L’immunisation par le CAD 106 n’a pas d’effet
sur l’infiltration des lymphocytes
41

42. Etude de l’effet du CAD106 sur les singe rhésus : Ac / toxicité
immunisés avec
CAD106
singe rhésus
Les singes Rhésus ont la même séquence Aß
comme les humains et leur système
immunitaire peuvent être considérés comme
étroitement liés
Production d’Ac Anti-Aβ de
différentes classes d’IgG.
Absence de réactivité croisée entre les Ac des
singes avec les tissus murins et humains.
Les AC anti Aß de singe ont été testés pour leur
capacité à reconnaître des oligomères
synthétiques par Western Blot
42

43. CAD106 réagie contre les
oligomères d’Aβ et protège contre
la toxicité liée à l’Aβ.
les AC produit à partir de
l'immunisation avec CAD106 sont
était analysé pour un éventuelle
réactivité croisé vis à vis des Aβ
synthétiques (western blot).
A :Les anticorps induites par CAD106 réagissent avec les
monomères d'Aß (3,5 kDa) ainsi que des oligomères de taille
croissante
B :CAD106 antibodies from monkeys reverted the oligomer-
induced toxicity in a concentration-dependent manner
43

44. discussion
44

45. Dans cette étude
Ils ont démontrés que les anticorps induits interférer avec
dépôts amyloïdes dans les régions corticales et sous-
corticales, se lient à des agrégats de Aß, et de bloquer
leur toxicité pour les cellules
Toutes les souris et les singes rhésus immunisés avec
CAD106 développent un titres d'anticorps Aß quel que
soit leur âge.
Aß1-6 est un auto antigène commun aux souris
transgéniques APP, les singes rhésus et les humains
45

46. Diverses études de souris transgéniques APP ont
démontré l'augmentation des microhémorragies après
immunothérapie
La réduction de l'accumulation d'amyloïde ß après
immunothérapie avec CAD 106 est inversement lié au
niveau de Aß dans le cerveau
La plus forte diminution a été dans le noyau caudé-
putamen suivie par le thalamus, l'hippocampe et le
cortex cérébral
46

47. Conclusion
47

48. CAD 106 induit des titres d'anticorps efficaces Aß chez les
animaux tout en évitant les effets secondaires
Les anticorps peuvent interférer avec l'accumulation d'amyloïde
dans le cerveau et protéger contre la toxicité Aß.
CAD 106 est actuellement testé chez des patients atteint la
maladie d’Alzheimer comme un agent potentiellement
modificateur de la maladie.
48

49. Ce vaccin peut provoquer des effets secondaires.
Vue que les cellules T peuvent induire un effet indésirables, ils
ont pensés à éliminer les régions qui interagissent avec ces
cellules.
Donc ils ont désignés un vaccin CAD106 compris entre 1-6 et
couplé a un virus like QB
Ce vaccin n’active pas les cellules T spécifiques
des AB, et induit des anticorps anti-AB qui
diminuent l’accumulation d’amyloîdes dans le
cerveau mais dépend du stade de l’accumulation
d’AB, ainsi que la région la plus atteinte par
l’accumulation.
49

50. Merci de votre
attention
50