Virus de l'hépatite a et e virus et marqueurs diagnostiques
1. Virus de l'hépatite A et E
Virus et marqueurs diagnostiques
Vincent THIBAULT
Laboratoire de Virologie
Groupe Hospitalier
Pitié-Salpêtrière
Assistance Publique Hôpitaux de Paris
V.Thibault DU_janv.-11 1
2. Hépatites virales
mode de transmission préférentiel
parentéral féco-oral
B non A, non B A
1965 D 1972
Vaccin
1977
C E Vaccin
1990 1991
(Vaccin)
F, G, TTV, autres…
V.Thibault DU_janv.-11 2
8. Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules
Attachement
Libération Réplication
du génome
Espace +
de Disse -
ir e
Traduction
cellula
Synthèse +
de la polyprotéine
-
rane
P3
Memb
Maturation
P2 Réticulum
endoplasmique
P1
Empaquetage
Canalicule
Relargage biliaire
V.Thibault DU_janv.-11 8
9. Hepatitis A Virus Suppresses RIG-I Mediated IRF-3 Activation To
Block Induction of Beta Interferon
*
*
Seth et al. Cell Research (2006)16: 141-147
Fensterl et al. JOURNAL OF VIROLOGY, Sept. 2005, p. 10968–10977
Yang et al. (2007) PNAS 104 :7253-7258
V.Thibault DU_janv.-11 9
10. VHA : physiopathologie
Absence d'effet cytopathique direct :
cytolyse résultant du processus immun de
défense de l'hôte,
médiation cellulaire
médiation humorale
V.Thibault DU_janv.-11 10
11. Propriétés Physiques du VHA
Agents Stabilité
Chaleur
Autoclavage (121°C, 20') Inactivation
100°C Inactivation
60°C Stable 1 heure
température ambiante Stable 1 mois (selles, eaux, sols)
Plusieurs jours sur surface sèche
4 h. Sur les mains
4°C Stable plusieurs mois
Congelé Stable des mois ou années
Acide-base pH 1 : stable 5 h.
PH 3-11 : stable au moins 30'
U.V. Inactivation
Chimiques
Chlore, ozone, Inactivation
glutaraldéhyde, iode
Alcool 70° 3' : inactivation partielle
V.Thibault DU_janv.-11 11
12. VHA et agents physiques ou chimiques
http://www.invs.sante.fr/publications/2009/guide_hepatite_a
V.Thibault DU_janv.-11 12
14. Génotypes et
phylogénie
VP1/P2A
Génotypes : >15% variations
Sous types : 7.5% variations
D'après Nainan et al. 2006
Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79
IV Nonhuman primate, Philippines
V Nonhuman primate, Kenya
VI Nonhuman primate, Indonesia
Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolates
in the VP1/P2B region (315-bp fragment).
V.Thibault DU_janv.-11 14
15. Répartition mondiale des génotypes
Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge.
Souche PA21 (génotype IIIA), isolée d'un singe Panamanian Owl en vert.
Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.
V.Thibault DU_janv.-11 15
16. Application à l'étude
de diffusion de I
certaines souches
Diffusion du génotype IIA en
France à partir d'une origine
Africaine
II
Diversité génétique d’un génotype rare
du virus de l’hépatite A III
Pathologie Biologie, In Press, Available
online 6 September 2010
D. Desbois et al.
V.Thibault DU_janv.-11 16
17. VHA : Paramètres Biologiques
Ac anti-VHA = hépatite A ancienne ou vaccination
IgM anti-VHA = hépatite aiguë A (clinique)
protection contre réinfection
Ag foie IgG
Symptomes
Ictère
VHA Selles
IgM
VHA Sang
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24
Semaines
V.Thibault DU_janv.-11 17
18. IgM HAV uniquement à bon escient !
1%
11 %
82 %
Faux positifs
Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887
Alaska : test "réflexe" si Ig-VHA totales + Ig M HAV
⌦32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86)
Vaccination : 8 à 20 % d'IgM VHA + dans les 2 à 3 semaines suivant
l'injection…
NE RECHERCHER L'IgM anti-VHA QU'EN CAS D'HEPATITE AIGUË
V.Thibault DU_janv.-11 18
19. Marqueurs biochimiques
Diagnostic ⌦ Transaminases (ALAT, ASAT)
⌦ Bilirubine
⌦ Phosphatase alcaline
⌦ Facteurs de coagulation
Sérologie +++
IgM anti VHA : infection récente
IgG anti VHA : infection passée ou vaccination
IgM et IgG anti VHA
Diagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre d'études]
Virémie : techniques sensibles (105 v./mL)
Recherche de virus dans les selles, prolongée, importante
(109v./mL), épidémiologie
Salive :
IgG (ELISA)
V.Thibault DU_janv.-11 19 Génome viral (RT-PCR)
20. Quantification de la virémie ?
Limite de
quantification
11 Hépatites A
Normann et al.,
Journal of Medical Virology 72:10–16 (2004)
Hépatite fulminante Evolution bénigne
Fujiwara K et al.
50 Hépatites A dont 19 fulminantes (10 OLT) J. Med Virol. 2011 Feb;83(2):201-7.
Hépatite fulminante : Hepatitis A viral load in relation to
-virémie (p=0.03) * severity of the infection.
-bilirubine -(p=0.04) * 11 patients with fulminant hepatitis
-age (p=0.09) 10 with severe acute hepatitis
-génotype non IA (p=0.09) 70 with self-limited acute hepatitis
Rezende et al., Hepatology 38:613-618 (2003)
V.Thibault DU_janv.-11 20
21. Durée de la virémie: conséquences cliniques et biologiques
6-7 5-6 2-5 Log particules/mL
Suivi de 13 patients : durée moyenne 95 jours Suivi de 27 patients
dont 2 avec rechute (1-2 mois)
High and Persistent Excretion of Hepatitis A
Duration of viremia in hepatitis A virus
Virus in Immunocompetent Patients
infection
Tjon et al.
Bower et al. Journal of Infectious Diseases
Journal of Medical Virology 78:1398–1405 (2006)
2000;182:12–7
V.Thibault DU_janv.-11 21
22. Hépatite A : le vaccin
virus inactivé
AVAXIM 160U suspension injectable seringue préremplie
⌦ Virus de l'hépatite A souche GBM cultivée sur cellules diploïdes humaines MRC-
5 , inactivé
HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue
HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue
⌦ Souche HM 175 du virus de l'hépatite A cultivée sur cellules humaines
diploïdes MRC5
Le schéma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie d'un rappel (1 dose) 6 à
12 mois plus tard.
La persistance des anticorps anti-VHA après vaccination n'est
actuellement pas connue . Les données disponibles suggèrent la persistance
des anticorps anti-VHA à un niveau protecteur au moins jusqu'à 20 ans
après primo-immunisation.
Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure Prophylaxis
Victor et al. 2007 N Engl J Med 357;17
V.Thibault DU_janv.-11 22
23. Difficultés diagnostiques
En routine
Adresser prélèvements
au
Centre national de référence du VHA
Pr E Dussaix
Laboratoire de virologie
Hôpital Paul Brousse
12-14 av Paul Vaillant Couturier
94804 Villejuif cedex
Tel : 01 45 59 37 21
http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
V.Thibault DU_janv.-11 23
24. SRAS ?
Hépatite E ? Grippe
V.Thibault DU_janv.-11 24
25. Historique VHE
Découverte dépendante de la connaissance des virus des hépatites
⌦1955 : Inde, hépatite chez des personnes immunisées contre le
VHA, épidémie particulière. "NANBH"
Entité clinique 1980 - similitude avec l’hépatite A :
Inde : prévalence de l’hépatite A importante
Epidémie : autre virus des hépatites, contamination par l’eau
1983 : reproduction de l’hépatite non A-non B chez un volontaire
immunisé contre VHA (Balayan)
Hépatite à J36
J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm)
Reproduction de l’infection chez le singe (cynomolgus)
Hépatite "non A - non B" à transmission entérique (ENANB)
1990 : Reyes et al. clonage et séquençage "VHE"
1991 : Tam et al. VHE
2000 : Panda et al. cDNA infectieux
V.Thibault DU_janv.-11 25
26. Coloured transmission electron micrograph of hepatitis E virus particles (purple)
Holmberg, Lancet Vol 376 September 11, 2010
V.Thibault DU_janv.-11 26
27. VHE Virus non enveloppé
Sphérique (SRV)
Famille : Hepeviridae Surface irrégulière
Genre : Hepevirus Capside 27-34 nm
Symétrie icosaédrique
ARN simple brin
hélice droite
polarité +
7,5kb
poly-A extrémité 3’
Stabilité
Au laboratoire : instable(-70 à +8°C)
Décongélation/congélation
Tractus GI : stable (pH)
V.Thibault DU_janv.-11 27
28. Organisation génomique
Non structurales Structurales
7 200 nt ARN polarité +
3’NC
5’ NC 28 5109 7124
Poly-A
ORF3
MeT Y Pro P X Hel RdRp ORF2
Génotypes 1-3
Protéines
DIAGNOSTIC
immunogènes
Hétérogénéité génétique
Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés
en 24 sous groupes dont homologues animaux
Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2
Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype
⌦ Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre
les différents types ?)
⌦ Vaccin : ORF 2 recombinante
V.Thibault DU_janv.-11 28
29. Similarités des souches humaines et animales
Bilic et al. Journal of General Virology
(2009), 90, 863–873
Sporadique
Epidémique
humaines aviaires
Unrooted phylogenetic tree of four avian HEV
and nine mammalian HEV isolates, based on
the complete genome region
V.Thibault DU_janv.-11 32
30. Evolution VHE
Anthropotropic
enzootic
536 to 1344 years ago
Purdy MA, Khudyakov YE. Evolutionary history and population
V.Thibault DU_janv.-11 33 dynamics of hepatitis e virus. PLoS One. 2010 Dec 17;5(12):e14376.
32. Culture et Modèles animaux
• Culture
Difficile
Culture primaire d’hépatocytes de macaques (cynomolgus)
Cellules PLC/PRF/5 hépatocarcinome (Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007)
Cellule embryonnaire
• Modèles animaux
Primates : reproduction de la pathologie humaine
Volontaires...
VHE du porc, du poulet
Présence d’Ac chez poulet, porc, rat, souris, mouton...
Lapin… Ma H et al. Experimental infection of rabbits with rabbit and genotypes 1
and 4 hepatitis E viruses. PLoS One. 2010 Feb 11;5(2):e9160
V.Thibault DU_janv.-11 36
33. Résistance thermique du VHE…
VHE dans des suspensions fécales :
Inactivation : 70°C 10' ou 95°C 1 min;
56 °C 30 min maintien de l'infectiosité
Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007
Colson et al. JID 2010:202
V.Thibault DU_janv.-11 37
34. VHE et contamination des eaux
Presence of hepatitis A virus (HAV) and hepatitis E virus (HEV) in
urban wastewater
Prédominance du génotype 3
J. Rodriguez-Manzano et al. Excretion patterns of HAV and HEV infections
in Eastern Spain Journal of Water and Health 08.2 2010
V.Thibault DU_janv.-11 38
35. VHE : Paramètres Biologiques
Khuroo MS, Khuroo MS.
Seroepidemiology of a second epidemic of hepatitis
E in a population that had recorded first epidemic
Titre peu élevé
30 years before and has been under surveillance protection contre réinfection ?
since then.
Hepatol Int. 2010 Feb 3;4(2):494-9 IgG
Symptomes
Ictère
VHE Selles
IgM
VHE Sang
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200
Jours
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36. Virémie et excrétion fécale
Virémie Selles
Détection du RNA-VHE chez 20 patients ayant une hépatite E aiguë
Aggarwal et al. THE LANCET • Vol 356 • September 23, 2000, p1081-1082
Chandra NS et al. Dynamics of HEV viremia, fecal shedding
and its relationship with transaminases and antibody
response in patients with sporadic acute hepatitis E.
V.Thibault DU_janv.-11 40 Virol J. 2010 Sep 6;7:213
37. HEV – virémie- selle
transmission
serum
salive
Concentré de plaquettes à J0
Transfusé à un homme de
64 ans traité pour Lymphome
non-Hodgkinien par GM IgG
autologue
IgM
Matsubayashi K, et al. Transfusion.
2008 Jul;48(7):1368-75.
V.Thibault DU_janv.-11 41
38. Immunodépression, hépatite chronique et
stratégie diagnostique
Dans le cadre d'une investigation chez un patient immuno déprimé,
La détection du génome viral (RT-PCR) sera privilégiée !
(ceci s'applique pour de nombreux diagnostics viraux - PCR)
Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1744–1748
V.Thibault DU_janv.-11 42
39. Stratégie Diagnostique
Marqueurs non biologiques
circonstances de la maladie (voyage, autres causes, épidémie)
A adapter en fonction de la zone géographique ? (Sud versus Nord ?)
clinique : hépatite “classique”, absence de chronicité (chez
l'immunocompétent ! ) – Portage prolongé en cas d'immunodépression
Absence de marqueurs biologiques : diagnostic d'exclusion
Absence des marqueurs des virus des autres hépatites (A, B, C, D)
Notions sérologiques pour d’autres virus (EBV, CMV, herpès)
Marqueurs sérologiques spécifiques
IgM anti-HEV
IgG anti-HEV (+++)
RT-PCR : détection du génome viral (sang, selles)
ATTENTION : spécificité - performances
V.Thibault DU_janv.-11 43
40. Incidence des cas d'hépatite E en France :
un gradient Nord-Sud
Renou et al. 2008 Aliment Pharmacol Ther 27, 1086–1093
Nicand et al. Pathol Biol. 2009 Mar;57(2):203-11
V.Thibault DU_janv.-11 44
41. Performance des tests
Panels
50 sérums ARN HEV (+), G3
406 sérums IgG ARN HEV (-)
IgM anti-HEV
Microplaque Microplaque Test rapide
Adaltis MP Diagnostics MP Diagnostics
anti-HEV IgG
positif négatif positif négatif positif négatif
Positif (n=41) 40 1 39 2 37 4
Negatif (n=9) 5 4 5 4 4 5
Total (n=50) 45 5 44 6 41 9
Sensibilité 90 88 82
Spécificité 100 99.5 100
VPP 100 95.7 100
VPN 98.8 98.5 97.8
Legrand-Abravanel CLINICAL AND VACCINE IMMUNOLOGY, May 2009, p. 772–774
V.Thibault DU_janv.-11 46
42. Stratégie Diagnostique
Se donner les moyens de faire le diagnostic
Diagnostic Indirect Diagnostic Direct
Recherche de l'immunité antivirale Recherche du génome sur
IgM anti VHE prélèvements sang et selles
IgG anti VHE
Diagnostic IgG IgM RT-PCR
Certain ++ ++ +
Probable - ou + - +
Douteux +++ - -
Immunité
+ - -
ancienne
Huang S et al. 2010 Profile of Acute Infectious Markers
in Sporadic Hepatitis E. PLoS ONE 5(10): e13560
V.Thibault DU_janv.-11 47
43. VHE et traitement
Efficacité du PEG-IFN
Efficacité de la ribavirine chez les patients
⌦Pas de mécanisme virologique précis décrit
Haagsma EB et al Liver Transpl. 2010 Apr;16(4):474-7
Mallet V et al. Ann Intern Med. 2010 Jul 20;153(2):85-9.
Kamar N et al. Nephrol Dial Transplant. 2010 Aug;25(8):2792-5.
Kamar N et al. Gastroenterology. 2010 Nov;139(5):1612-8.
V.Thibault DU_janv.-11 48
44. VHE et vaccination
20 μg d'antigène rHEV (capside exprimée
dans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur
0.5 mg d'hydroxyde d'aluminium.
3 injections
Moyenne géométrique du taux
d'anticorps anti-VHE
Efficacité : 95,5% après 3 doses
Risque cumulé d'un premier épisode
d'hépatite E
Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9
V.Thibault DU_janv.-11 49
45. HEV 239 (Hecolin; Xiamen Innovax Biotech,
Xiamen, China),
VHE et vaccination produced in bacterial cells : safe and
efficacious against infection with hepatitis E
virus in seronegative participants in a phase 2
trial
Zhu et al Lancet. 2010 Sep 11;376(9744):895-902
V.Thibault DU_janv.-11 50
46. Difficultés diagnostiques
En routine
Adresser les prélèvements
au
Centre national de référence du VHA/VHE
Pr E Dussaix
Laboratoire de virologie
Hôpital Paul Brousse
12-14 av Paul Vaillant Couturier
94804 Villejuif cedex
Tel : 01 45 59 37 21
http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
V.Thibault DU_janv.-11 51
