Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme sous les tropiques. Parole de junior de la 8ème édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Elisabeth Ravaoarisoa

1. Perspectives :
Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme
sous les tropiques
Elisabeth Ravaoarisoa, PhD student
Avec le concours de Milijaona Randrianarivelojosia, PhD, HDR
8ème édition du Cours international Atelier Paludisme
Institut Pasteur de Madagascar, 22/03/2011

2. Test de Diagnostic Rapide du paludisme
• Diagnostic biologique, clé de la gestion du paludisme
• Test de Diagnostic Rapide (TDR) : facile à réaliser, pas de besoin
particulier en formation ni en matériels spécifiques
• Utilisation d’anticorps monoclonaux pour la détection d’antigènes
parasitaires
• 10 à 20 min avec la possibilité de lancer plusieurs tests à la fois

3. TDR du paludisme : immunocapture
Adapté de Bell D et al. 2006

4. TDR du paludisme : qualité
• Manufacture ?
• Transport et stockage ?
• Conduite du test et interprétation ?
Contrôle de Qualité (CQ) des TDR
essentiel

5. Contrôle de qualité des TDR
avant la dissémination sur le terrain

6. TDR du paludisme : contrôle de qualité
• Evaluation du seuil de détection des TDR (sensibilité) avant
la dissemination sur le terrain (seuil habituel : 200
parasites/µl)
• Utilisation des aliquots standards calibrés
> Test initial: dans les 5 jours suivant la réception
> Test à long terme: tous les 3 mois durant le stockage
Methods Manual for Laboratory Quality Control Testing of Malaria RDTs, version six, WHO/FIND, June 2010

7. TDR du paludisme : contrôle de qualité
• Test initial pour SD Bioline (2 lots )
détection de HRP-II spécifique de P. falciparum
et pLDH pan-spécifique.
• Réalisation du test initial selon SOP 3.12
Methods Manual for Laboratory Quality Control Testing of Malaria RDTs, version six, WHO/FIND, June 2010

8. TDR du paludisme : contrôle de qualité
Methods Manual for Laboratory Quality Control Testing of Malaria RDTs, version six, WHO/FIND, June 2010

9. TDR du paludisme : contrôle de qualité
• Seuil de détection de la protéine HRP-II correcte
• Seuil de détection de l’enzyme pLDH:
P. falciparum ? (détection à 200 parasites/µl=0)
P. vivax > 500 parasites/µl

10. Contrôle de qualité des TDR
après la dissémination sur le terrain

11. TDR du paludisme : contrôle de qualité
Evaluation de la sensibilité de TDR CareStart™ comparée à la
microscopie, la PCR et RT-PCR
Réalisation des TDR sur le terrain
Prélèvements sanguins positifs acheminés en chaîne de froid
TDR refaits à l’URP
Confection des frottis et lecture par un microscopiste référant
PCR et RT-PCR au laboratoire

12. TDR du paludisme : contrôle de qualité
• Lecture des frottis épais et mince
Lecture à l’aveugle par un microscopiste référant
Estimation de la parasitémie sur 500 leucocytes lus
Relecture en cas de discordance
• Detection des 4 espèces plasmodiales (Snousnou G et al. 1993; Mangold KA et
al. 2005)

13. Diagnostic par PCR : illustration
Mangold KA et al. 2005

14. Contrôle des résultats de TDR : illustration
TDR utilisé à Madagascar actuellement : CareStart™
Sur 231 isolats positifs par TDR selon les résultats du centre de santé :
11/231 (4,7%) négatifs par TDR au laboratoire
46/231 (19,9%) négatifs par microscopie
30/231 (13%) négatifs par PCR
24/201 (12%) infection mixte (P. falciparum + P. vivax) par PCR
19/231 (8,2%) négatifs par Real Time-PCR

15. Quels types de TDR à utiliser?

16. Quantité de TDR à utiliser?
Elimination du paludisme
Diminution de la prévalence (fièvre ≠ paludisme)
Diminution du contact homme-parasite
Charge parasitaire faible = accès grave
⇒ Diagnostic par TDR avant traitement (tous les groupes d’ âges)
- Taux de couverture en TDR?
- Traitements des patients asymptomatiques et symptomatiques?

17. Type de TDR à utiliser ?
Détection de HRP-II
Persistance , faux positif
Test basé sur HRP-II non pratique pour le suivi des traitements
⇒ A prendre ou à laisser?
- Peut être bénéfique dans les zones hypoendémique
- Test positif en HRP-II avec microscopie négative signifie t-il parasitémie
initiale, tendance au neuro-paludisme ou risque de recrudescence?
- Traitement des patients HRP-II positif , gaspillage des ACT? Or réduction
de la prévalence en paludisme, nombre d’ACT non utilisés?

18. Type de TDR à utiliser?
Détection de pLDH
Témoin de la viabilité des parasites
Pratique pour le suivi des traitements
⇒ A prendre ou à laisser?
- Bénéfice pour le malade dans détection précoce de la recrudescence
- Seuil de détection?
- Efficacité dans le suivi des traitements, présence des gamétocytes = non
détection pLDH?

19. TDR de demain?
Qualité des tests importants
Balance entre les avantages et les limites
Apport de la recherche
Adhésion de tous dans l’efficacité et l’utilisation des TDR
Accès aux diagnostics et soins pour tous
Nouvelles générations de TDR plus sensibles, plus
spécifiques, plus robustes pour résister aux conditions
réelles dans les sites d’utilisations (humidité, chaleur)

20. Perspectives :
Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme
sous les tropiques
Elisabeth Ravaoarisoa, PhD student
Avec le concours de Milijaona Randrianarivelojosia, PhD, HDR
8ème édition du Cours international Atelier Paludisme
Institut Pasteur de Madagascar, 22/03/2011