La toxoplasmose est l'une des affections parasitaires les plus fréquentes. Si elle est généralement bénigne, sa survenue pendant la grossesse peut être grave en raison du risque de lésions du système nerveux central du fœtus.

1. Abdsalah
Sérodiagnostic de la
Toxoplasmose
(Réaction d’hémagglutination
indirecte)
Par : S / Abdessemed

2. Abdsalah
• La toxoplasmose est l'une des affections
parasitaires les plus fréquentes. Si elle
est généralement bénigne, sa survenue
pendant la grossesse peut être grave en
raison du risque de lésions du système
nerveux central du fœtus.

3. Abdsalah
1. Principe :
• Des hématies de mouton traitées par le
glutaraldéhyde et sensibilisées par un
lysat de toxoplasmes (antigène soluble)
sont agglutinées lorsqu’elles sont mises
en présence de dilutions de sérum
contenant des anticorps homologues.
• TOXO-HA KIT permet la détermination
du taux d’anticorps anti-toxoplasmique
par la réaction d’hémagglutination
indirecte d’une très grande sensibilité.

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2. Réactifs :
 Réactif n°1 : Hématies- Antigène à 1%
A diluer au moment de l’emploi au 1/5 en
tampon PBS pH 7.2 pour obtenir la
suspension de travail à 0.2 %.
 Réactif n°2 : Hématies –Témoin à 0.2 %
(Suspension prête à l’emploi)

5. Abdsalah
 Réactif no3 : Hématies à 50%
Cette suspension est utilisée pour
l’adsorption des agglutinines naturelles anti-
moutons que peuvent contenir certains
sérums.
• Remarque : Les différentes préparations
d’hématies doivent être remises en
suspension homogène avant l’emploi par
agitation vigoureuse.
 Réactifs n°4 : diluant
Solution de NaCl à 8.5 g/l additionnée de
sérum de veau fœtal et d’azide de sodium.

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Toxo-trol « A » :
Sérum témoin positif pour
hémagglutination indirecte
• Reprendre le contenu d’un flacon par 0.5
ml d’eau distillée » »e. Ce produit ne
contenant pas de conservateur, il est
recommandé de le manipuler le plus
stérilement possible.
• Conservation après reprise :
-quelque jours à +4°C.
-plusieurs mois à –20°C.

7. Abdsalah
• Le titre de ce sérum est indiqué sur la
notice contenue dans le coffret. Il
correspond à l’inverse de la dernière
dilution hémagglutinante prise par
convention à ++.
• Tampon PBS pH 7.2

8. Abdsalah
 Solution 0.2M de 2-Mercaptoéthanol
(2-ME)
• 2Mercaptoéthanol………14 ml
• Tampon PBS PH 7,2 q.s.p…………1000 ml
 Ce réactif se conserve un mois à +4° C
(flacon brun). Le 2-ME pur sera également
conservé à cette température.

9. Abdsalah
 Sérums à tester :
• Ils ne doivent pas être inactivés. Il est
possible de les conserver à –20° C si l’on
ne peut pas les tester immédiatement.

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3. Matériel :
o Auto pipette manuelle avec adapter 50µl
o Pipettes compte-gouttes calibrées à 50µl
o Plaques pour microtitration à fond rond
o Feuilles autocollantes.

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4. Mode opératoire :
1. Traitement des sérums :
• Cette opération a pour but de réduire
les immunoglobulines IgM et d’adsorber
les hémagglutinines naturelles anti-
mouton.
• Engager simultanément dans la réaction
le sérum traité au 2-ME et le même
sérum non traité.

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Tube 1 Tube2
Sérum………………..
Solution 0.2 M de 2-ME…
Tampon PBS pH 7.2…
200µl
200µl
--
200µl
--
200µl
Placer au Bain –Marie 1 heure à 37 °C.
Dans deux autres tubes à hémolyse répartir :
Tube 3 Tube 4
Sérum traité (tube 1)…….
Sérum non traité (tube 2)
Diluant (réactif n°4)…….
Hématies à 50%………….
200µl
--
800µl
100µl
--
200µl
800µl
100µl
Mettre dans deux tubes à hémolyse :

13. Abdsalah
-- Placer au minimum 2 heures à +4°C en
agitant de temps en temps.
--Centrifuger 10 mn à 2500 tours/minute.
--Décanter les surnageant (dilution initiale
du sérum au 1/10).
• Ils peuvent être conservés quelques jours
à +4°C.
--Engager dans la réaction Toxo-trol « A »,
sérum témoin positif de titre connu, dans les
mêmes conditions que les sérums à tester.

14. Abdsalah
2 Détermination du titre en anticorps
des sérums à tester :
• Diluer la quantité nécessaire d’hématies
sensibilisées (réactif n°1) au 1/5.
• Par exemple, pour une micro plaque (4
sérums) 5 ml sont nécessaires :
--Hématies sensibilisées à 1%
(Remise en suspension homogène par
agitation)…………………..1ml
--Tampon PBS pH 7.2……………………4ml

15. Abdsalah
• La suspension de travail à 0.2 % ainsi
obtenue peut se conserver quelques
jours à 4°C.
• Exécuter la réaction en parallèle sur le
sérum traitée au 2-ME et sur le même
sérum non traité, en tenant compte de la
dilution initiale au 1/10 :

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N° des tubes 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Dilutions Témoin
sérum
1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 1/5120 1/10240 1/20480
Diluant…………
Sérum traité
ou non
traité………….
Hématies-
Antigène à
0,2%..
Hématies
témoin à
0,2%..
--
50
--
50
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--
50
50
50
--

17. Abdsalah
Témoin antigène :
Diluant…………………………………………50 µL
Hématies- Antigène à 0.2%………….50 µL
Placer sur un agitateur de Kline pendant
5 minutes.
Laisser 16 à 18 heures à la température
du laboratoire, l’abri de la dessiccation
(feuilles autocollante).

18. Abdsalah
• Remarque :
La réaction peut être réalisée dans la
journée si le traitement des sérums a été
effectué la veille ; lecture après 6 à 8
heures.

19. Abdsalah
5. Lecture :
• Sur fond blanc, ou en transillumination
oblique.
• Une réaction d’hémagglutination positive
se traduit par un voile tapissant plus ou
moins complètement la cupule.
• Le seuil de positivité est un voile dont le
diamètre doit être supérieur à la moitié
de la cupule. L’hémagglutination étant
quantifié de ++++ à 0, ce seuil
correspond à ++.

20. Abdsalah
++++ Voile tapissant la totalité du fond de la
cupule, pouvant parfois avoir un aspect rétracté
(rétraction partielle en bordure).
+++ Voile homogène recouvrant les 2/3 du fond
de la cupule.
++ Voile recouvrant la moitié du fond de la
cupule.
+ une ligne de sédimentation périphérique
nette apparaît sur le pourtour du voile dont le
diamètre est inférieur à la moitié du diamètre.
± un culot de sédimentation apparaît.
0 bouton central net.

21. Abdsalah
Les « témoins sérums » et « témoin
antigène » doivent montrer une réaction
négative.
Le titre du sérum est l’inverse de la
dernière dilution présentant une
hémagglutination à ++.

22. Abdsalah
6. Interprétation :
• La réaction d’hémagglutination indirecte
avec l’antigène toxoplasmique soluble
est très sensible aux immunoglobulines
(igG et igA).
• Elle est également sensible aux
immunoglobulines (igM) lorsqu’elles sont
pures mais n’est pas influencée par les
anticorps dits »AC naturels ».

23. Abdsalah
• Le test au 2-ME permet de déceler une
infection en début d’évolution ;un sérum
dont le titre chute de plus de deux
dilutions après traitement au 2-ME
contient vraisemblablement des igM
spécifiques.
• Le seuil de spécificité de la réaction est
voisin du 1/20. Un sérum sera
considéré comme positif si le titre
obtenu est supérieure ou égal à 1/40.

24. Abdsalah
• Comme pour toute réaction sérologique,
il est souhaitable de ne pas pratiquer
cette réaction isolément mais de
l’associer à une réaction autre,
susceptible de fournir des éléments
différents ; c’est le cas de
l’agglutination directe dont on connaît la
très grande sensibilité aux igM.

25. Abdsalah
• Cet examen est imposé par les textes
réglementaires lors de l’examen
prénuptial et il doit être prescrit chez
toute femme enceinte ou désirant le
devenir si celle-ci ne possède pas la
preuve d’une immunité acquise.

26. Abdsalah
• Chez la femme enceinte, un résultat
négatif entraine la nécessité d’un
contrôle mensuel jusqu'à la fin de la
grossesse.
• Un résultat modérément positif sans
igM confirmé par un deuxième examen
trois semaines plus tard, permet de
conclure à la présence d’anticorps
résiduels considérés comme protecteurs.

27. Abdsalah
• La présence d igM peut être notée
pendant une longue période après la
séroconversion en raison de la
sensibilité des nouvelles techniques
(jusqu'à 2 ans en ISAGA igM)

28. Abdsalah
• Chez l’enfant né de mère ayant fait une
séroconversion pendant la grossesse, on
retrouve les igG transmises.
• Celles-ci disparaissent en 6 à 9 mois.
après cette période, la persistance des
igG ou leur réapparition confirme la
contamination de l’enfant.

29. Abdsalah